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文檔簡介
1、 研究背景研究背景 1 研究目標(biāo)研究目標(biāo) 2 研究內(nèi)容研究內(nèi)容 3 技術(shù)路線技術(shù)路線 4 資源及需求資源及需求 5 體細(xì)胞核移植技術(shù)依然存在著很多問題。研究普遍認(rèn)為體細(xì)胞核在卵 母細(xì)胞質(zhì)中不完全的表觀遺傳重編程是引起這些問題的一個重要原因。 組蛋白甲基化是一種發(fā)生在組蛋白精氨酸精氨酸和賴氨酸賴氨酸殘基上的共價修飾, 由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(HMT)催化。其中對賴氨酸甲基化修飾的研究 較為廣泛,而關(guān)于精氨酸甲基化結(jié)合蛋白的研究卻較少較少。本研究目的 通過對蛋白精氨酸精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(CARM1)在牛卵母細(xì)胞重編程及核移 植早期胚胎發(fā)育中作用的研究,揭示組蛋白精氨酸甲基化修飾組蛋白精
2、氨酸甲基化修飾在表觀 遺傳調(diào)控中的作用機(jī)制。 研究背景研究背景1 (1)研究CARM1通過干擾抑制表達(dá),對核移植早 期胚胎發(fā)育以及胚胎質(zhì)量的影響。 (2)研究CARM1干擾對早期胚胎不同時期總體甲 基化水平及H3R17,H3R26位點(diǎn)甲基化的影響。 (3)通過以上研究分析,揭示組蛋白精氨酸甲基 化修飾在表觀遺傳調(diào)控中的作用機(jī)制。 研究目標(biāo)研究目標(biāo)2 (1)設(shè)計(jì)合成SiRNA-CARM1片段,優(yōu)化干擾條件。 (2)研究CARM1基因干擾對早期胚胎發(fā)育早期胚胎發(fā)育的影。 (3)研究CARM1基因干擾對胚胎甲基化水平影響 及對H3R17,H3R26位點(diǎn)甲基化的影響。 研究內(nèi)容研究內(nèi)容3 合成SiRN
3、A-CARM1 顯微注射牛胎兒成纖維細(xì)胞檢測 干擾效率,尋找合適的注射劑量 對激活后的SCNT胚胎進(jìn)行顯微注射 統(tǒng)計(jì)一段時間后的胚胎發(fā) 育率,對SCNT胚胎細(xì)胞數(shù) 和囊胚凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分 析,定量PCR分析三組胚胎 發(fā)育相關(guān)和凋亡相關(guān)基因 的相對表達(dá)水平,與 control-NT, NON- targeting-NT及IVF胚胎比 較。 分析對早期 胚胎不同時 期總體甲基 化水平的影 響 對H3R17, H3R26位點(diǎn)進(jìn) 行甲基化染色, 研究其對特定 位點(diǎn)甲基化修 飾的影響 統(tǒng)計(jì)結(jié)果,數(shù)據(jù)分析 技術(shù)路線技術(shù)路線4 本項(xiàng)目將在西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)業(yè)部動物農(nóng)業(yè)部動物 生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室完成。本實(shí)驗(yàn)室 承擔(dān)多項(xiàng)國家重大科研項(xiàng)目,具有進(jìn)行胚 胎體外操作、細(xì)胞體外培養(yǎng)、基因表達(dá)檢 測以及載體構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)平臺,完成本項(xiàng)目 的一切實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件具備一切實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件具備。實(shí)驗(yàn)室也可以 為本項(xiàng)目提供一定資金支持與技術(shù)指導(dǎo)。 科創(chuàng)平臺科創(chuàng)平臺 本團(tuán)隊(duì)隊(duì)員大學(xué)期間均無任何掛科經(jīng)歷 半數(shù)以上成員通過英語六級 項(xiàng)目主持人曾主持過本實(shí)驗(yàn)室的自主實(shí)驗(yàn) 項(xiàng)目 大二成員均具有保研資格,其中兩人計(jì)劃 在本實(shí)驗(yàn)室直博 小組成員均擁有較好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和文獻(xiàn)搜 集能力,具備合格知識基礎(chǔ) 隊(duì)員能力隊(duì)員能力 8200元實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),超出限額部分由實(shí)驗(yàn)室 基金補(bǔ)充。 預(yù)算需求預(yù)算需求
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