細胞凋亡的檢測方法

1、細胞凋亡的檢測方法 報告人：王英 時間：2015 11 27 細胞凋亡的形態(tài)特征 細胞核縮小，染色質(zhì)邊緣化，出現(xiàn)凋亡小體。 細胞凋亡和壞死的區(qū)別 -細胞凋亡是一種主動的，程序性的死細胞凋亡是一種主動的，程序性的死 亡過亡過 -不造成炎癥和自體損傷不造成炎癥和自體損傷 -細胞壞死指細胞在各種致?lián)p傷因素作用下無 序死亡的過程 -形態(tài)特征為細胞脹大，胞膜破裂，胞漿內(nèi)容 物外泄 -局部導(dǎo)致炎癥反應(yīng) 綜述目的 近年來有不少綜述著作分別介紹了植物發(fā)育過程中的 細胞凋亡，環(huán)境脅迫下誘導(dǎo)的細胞凋亡、植物細胞凋 亡的機理以及發(fā)育調(diào)控、在植物發(fā)育中的細胞凋亡作 用、植物細胞凋亡與活性氧及抗氧化代謝的關(guān)系等， 但對

2、細胞凋亡的檢測方法則很少報道。本文主要從以 下幾方面對檢測細胞凋亡的技術(shù)加以闡述。 細胞凋亡的體內(nèi)檢測 體內(nèi)檢測 體內(nèi)檢測-試劑盒 細胞凋亡檢測方法 體外檢測 形態(tài)學(xué)檢測 DNA ladder TUNEL法 ELISA 法 細胞凋亡的細胞凋亡的DNA片段化檢測片段化檢測 DNA ladder： 優(yōu)點優(yōu)點:經(jīng)典的檢測經(jīng)典的檢測 細胞凋亡的指標(biāo)細胞凋亡的指標(biāo) 缺點缺點：DNA凝膠凝膠 電泳特異性高但電泳特異性高但 靈敏度低，不適靈敏度低，不適 于檢測凋亡初期于檢測凋亡初期 DNA輕微損傷的輕微損傷的 檢測檢測 TUNEL法法 優(yōu)點優(yōu)點：敏感、快速。：敏感、快速。 特異性強特異性強 缺點缺點：局限性

3、，如：局限性，如： 組織固定、處理的過組織固定、處理的過 程本身會改變實驗結(jié)程本身會改變實驗結(jié) 果。對細胞凋亡不是果。對細胞凋亡不是 特異的，壞死細胞也特異的，壞死細胞也 會被標(biāo)記。會被標(biāo)記。 ELISA檢測法檢測法 優(yōu)點優(yōu)點：此法既可：此法既可 定性，又可定量。定性，又可定量。 且適合檢測大量且適合檢測大量 樣本，且靈敏度樣本，且靈敏度 高。高。 線粒體膜電位的檢測 流式細胞術(shù)檢測 優(yōu)點：分析精確，重復(fù)性好，費用低廉，分析速度 快，檢測的細胞數(shù)量大，可定量分析群體細胞的凋 亡及同時進行其他相關(guān)的分析 缺點：不能檢測出細胞群體異質(zhì)性 鈣離子濃度變化檢測 凋亡的調(diào)控由十分復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)控制，

4、目前已知有三條主要 信號通路：線粒體通路，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路，死亡受體通路。這些信號通 路大部分與鈣離子有關(guān)，最終都能激活凋亡執(zhí)行者Caspases3,水解 各種細胞成分而使細胞凋亡。在鈣離子信號與腫瘤細胞形成的三條 通路中，存在相互促進，互為因果的促凋亡蛋白酶，加速了腫瘤細 胞的凋亡。雖有關(guān)鈣離子信號調(diào)控細胞凋亡的證據(jù)越來越多，但是 鈣離子如何激活這些凋亡調(diào)節(jié)因子的分子機制現(xiàn)在仍不清楚。一旦 完全認(rèn)識了Ca與細胞凋亡的關(guān)系，必將為凋亡研究帶來突破性進展， 為疾病特別是腫瘤細胞的治療提供新的思路和手段。 優(yōu)點：由于流式細胞術(shù)不能檢測出群體細胞的異質(zhì)性，但鈣離子濃 度變化檢測能對多項生化指標(biāo)進測定，固該法由較高的優(yōu)越性。 細胞凋亡意義 細胞凋亡在保證多細胞生物的健康生存過程中扮演者重要角 色。 其一，有利于清除有害細胞，在研究自身免疫性疾病，病毒 感染和腫瘤的機制中發(fā)現(xiàn)自身反應(yīng)性T,B淋巴細胞，某些病毒 感染細胞可通過細胞凋亡方式被清除。推測機體利用細胞凋 亡作為一種保護機制。 其二，有利于清除完成正常使命的衰老細胞。人紅細胞分化 成熟后是無核有功能細胞，可存活120d