酵母菌的染色和觀察

1、v1.0可編輯可修改4酵母菌的染色和觀察【摘要】此次實(shí)驗(yàn)采用美藍(lán)染液水浸片法和子囊抱子染色法觀察酵母菌的各項(xiàng)形態(tài)特征。通過對(duì)染色后的酵母菌細(xì)胞進(jìn)行觀察， 可以觀察到死、活細(xì)胞的對(duì)比,正在進(jìn)行出芽生殖的酵母細(xì)胞，以及抱子囊中的子囊抱子?！娟P(guān)鍵詞】酵母菌美藍(lán)染液水浸片法子囊抱子染色法出芽生殖【前言】此次實(shí)驗(yàn)的目的，是通過用美藍(lán)染色制成水浸片和水-碘水浸片的實(shí)驗(yàn)方法，來 觀察酵母的生活形態(tài)和出芽生殖的生殖方式，并了解酵母菌對(duì)人類生產(chǎn)生活的重要意義。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色，酵母細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還

2、原型，所以酵母的活細(xì)胞無色，而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。酵母菌是一些單細(xì)胞真菌，并非系統(tǒng)演化分類的單元。目前已知有1000多種酵母，根據(jù)酵母菌產(chǎn)生抱子（子囊抱子和擔(dān)抱子）的能力，可將酵母分成三類：形成抱子的株系屬于子囊菌 和擔(dān)子菌。不形成抱子但主要通過出芽生殖來繁殖的稱為不完全真菌，或者叫“假酵母”（類酵母）。目前已知大部分酵母被分類到子囊菌門。酵母菌是人類文明史中被應(yīng)用得最早的微生物。可在缺氧環(huán)境中生存。 酵母菌在自然界分布廣泛，主要生長(zhǎng)在偏酸性的潮濕的含糖環(huán)境中，而在

3、釀酒中，它也十分重要。1.材料菌種釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）溶液和試劑美藍(lán)染液，碘液，孔雀綠水溶液，番紅水溶 液。儀器和其他用品載玻片，蓋玻片，酒精燈，接種環(huán)，鑷子，顯微鏡等。2.方法配置麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基和液體培養(yǎng)基2.1.1稱量和溶化2.1.1.1 麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基的配置： 按照配方稱取 葡萄糖，酵母浸膏，醋酸鈉和 3g瓊脂溶于 水中，加熱溶化，冷2.3.1制片卻后加水至200ml。 PH自然狀態(tài)。 先在潔凈的載玻片中央滴一小滴無菌水，2.1.1.2 液體培養(yǎng)基的配置：按照配方稱取無菌操作從菌種斜面挑取少量菌體與水滴取酵母膏、ig蛋白胨、2g葡萄糖加入100ml 充分混

4、勻，涂成薄膜。水配制成液體培養(yǎng)基。平分為兩份分裝在兩232干燥、熱固定個(gè)錐形瓶中。 待涂片晾干后在酒精燈火焰上略微烤干。2.1.2咼溫火菌2.3.3染色121 C條件下滅菌 30min。 加孔雀綠水溶液于涂片處染色5min。.美藍(lán)染液水浸片法2.3.4水洗2.2.1制片用水輕輕地沖洗，直至流出的水無色。先在載玻片中央滴加一滴呂氏堿性美藍(lán)2.3.5復(fù)染染液，再滴加少量水稀釋。無菌操作取試管 用番紅液染色1min。中培養(yǎng)的酵母菌少許， 放在呂氏堿性美藍(lán)染2.3.6水洗、干燥液中，使菌體與染液均勻混合。用鑷子夾蓋 用水輕輕地沖洗，直至流出的水無色為止，玻片一塊，小心地蓋在液滴上。 然后將涂片晾干。2

5、.2.2鏡檢 2.3.7鏡檢將制好的水浸片放置 3分鐘后鏡檢。先用低 先用低倍鏡，然后換高倍鏡觀察染色后的酵倍鏡，再用高倍鏡，觀察酵母菌的形態(tài)和出 母菌。芽情況，同時(shí)可以根據(jù)是否染上顏色來區(qū)別死、活細(xì)胞。.子囊孢子染色法3結(jié)果及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖：圖1美藍(lán)染色后的酵母菌細(xì)胞(10 X 100)圖2子囊孢子染色后的酵母菌細(xì)胞(10X 100)結(jié)果分析圖1中美藍(lán)染色結(jié)果可推斷，無色細(xì)胞為活酵母菌細(xì)胞，藍(lán)色細(xì)胞為已死的酵母菌細(xì)胞，淺藍(lán)色細(xì)胞為衰老的酵母菌細(xì)胞。從圖中還可以觀察到正在進(jìn)行出芽生殖的酵母菌細(xì)胞。圖2中結(jié)果顯示，用子囊孢子染色法染色后，菌體呈紅色，子囊孢子呈綠色，圖中可以看到每個(gè)孢子囊內(nèi)2

6、個(gè)或3個(gè)孢子，實(shí)際上由所學(xué)知識(shí)可知每個(gè)孢子囊內(nèi)有4個(gè)子囊孢子。思考題1. 根據(jù)你的觀察結(jié)果，呂氏堿性美藍(lán)染液的作用時(shí)間與釀酒酵母的死活細(xì)胞比例變化是否有關(guān)系答：有。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，死細(xì)胞在總細(xì)胞數(shù)中的比例增大。2. 釀酒酵母除了通過出芽方式進(jìn)行無性繁殖外，還可以形成子囊孢子進(jìn)行有性繁殖，你在實(shí)驗(yàn)中是否觀察到釀酒酵母的子囊孢子答：通過子囊孢子染色法染色，觀察到了釀酒酵母的子囊孢子。在顯微鏡下可以看到每個(gè)孢子囊內(nèi)2個(gè)或3個(gè)孢子，實(shí)際上由所學(xué)知識(shí)可知每個(gè)孢子囊內(nèi)有4個(gè)子囊孢子。4.小結(jié)此次實(shí)驗(yàn)操作較簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于滴加染液要適中，以防用蓋玻片覆蓋時(shí)，過多染液會(huì)溢出，過少會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。蓋玻片要緩慢傾斜覆蓋，以免產(chǎn)生氣泡。染色的時(shí)間長(zhǎng)短也要適中，要使染后的顏色不能太深也不能太淡，否則將不利于觀察。通過對(duì)染色后的 制片仔細(xì)觀察，可以清晰的觀察