生物制品質(zhì)量監(jiān)控

1、123生物藥物生物藥物（來源和生產(chǎn)方法）（來源和生產(chǎn)方法）生化藥物生化藥物生物合成藥物生物合成藥物生物制品生物制品4l利用生物體、生物組織或組成生物體的利用生物體、生物組織或組成生物體的各種成分，綜合運用生物學(xué)、生物化學(xué)、各種成分，綜合運用生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)和藥學(xué)的微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)和藥學(xué)的原理與方法制得的一大類藥物。原理與方法制得的一大類藥物。5l定義：定義：l 指從動物、植物及微生物提取指從動物、植物及微生物提取的，也可用生物的，也可用生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物技術(shù)制得的生命基本物質(zhì)及代生物技術(shù)制得的生命基本物質(zhì)及其衍生物、降解物以及大分

2、子的結(jié)其衍生物、降解物以及大分子的結(jié)構(gòu)修飾物等，如氨基酸、多肽、蛋構(gòu)修飾物等，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶、多糖、脂質(zhì)、核甘酸類。白質(zhì)、酶、多糖、脂質(zhì)、核甘酸類。6l定義定義:l由微生物代謝所產(chǎn)生的藥物和必須利用由微生物代謝所產(chǎn)生的藥物和必須利用微生物及其酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)共同完成的半合微生物及其酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)共同完成的半合成藥物成藥物,如如: 山梨醇、木糖醇、甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘露醇、維生素、甾體激素、酶與輔酶類藥物等。維生素、甾體激素、酶與輔酶類藥物等。7 生物制品生物制品( (Biological Products)是應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、

3、細(xì)胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備，用于疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品。8 按生物制品的組成和性質(zhì)可分為按生物制品的組成和性質(zhì)可分為: :疫苗（疫苗（VaccinesVaccines）抗毒素及免疫血清抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera)(Antitoxin and Antisera)血液制品（血液制品（Blood ProductsBlood Products）細(xì)胞因子和重組細(xì)胞因子和重組DNADNA產(chǎn)品（產(chǎn)品（Cytokines and Cytokines and Recombinant DNA ProductsRecombinant DNA Product

4、s）診斷制品診斷制品(Diagnostic Reagents)(Diagnostic Reagents)其他制品其他制品9 由細(xì)菌、螺旋體或其衍生物制備而成，包括：由細(xì)菌、螺旋體或其衍生物制備而成，包括：l減毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫減毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫疫苗等疫苗等l滅活疫苗：霍亂菌體疫苗、鉤端螺旋體疫苗滅活疫苗：霍亂菌體疫苗、鉤端螺旋體疫苗等等l亞單位疫苗：腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒亞單位疫苗：腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒ViVi多糖疫苗等多糖疫苗等l重組重組DNADNA疫苗：重組瘧疾疫苗、重組幽門螺疫苗：重組瘧疾疫苗、重組幽門螺桿菌疫苗等桿菌疫苗等10 由病毒、衣原體

5、、立克次體或其衍生物制備由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備而成，包括：而成，包括：減毒活疫苗：乙型腦炎減毒疫苗、麻疹疫苗、減毒活疫苗：乙型腦炎減毒疫苗、麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、OPVOPV等等滅活疫苗：乙型腦炎滅活疫苗、出血熱疫苗、滅活疫苗：乙型腦炎滅活疫苗、出血熱疫苗、狂犬疫苗等狂犬疫苗等亞單位疫苗：重組乙肝疫苗等亞單位疫苗：重組乙肝疫苗等重組重組DNADNA疫苗：重組乙肝疫苗等疫苗：重組乙肝疫苗等11 由兩種或兩種以上疫苗抗原原液配制而成由兩種或兩種以上疫苗抗原原液配制而成的具有多種免疫原性的疫苗。的具有多種免疫原性的疫苗。 例如：例如： 吸附百白破聯(lián)合疫苗吸附百白破聯(lián)合疫苗 麻

6、風(fēng)腮三聯(lián)疫苗麻風(fēng)腮三聯(lián)疫苗12由特定抗原免疫的動物血清而制備由特定抗原免疫的動物血清而制備 主要產(chǎn)品：主要產(chǎn)品： 白喉抗毒素白喉抗毒素 破傷風(fēng)抗毒素破傷風(fēng)抗毒素 抗狂犬病血清等抗狂犬病血清等13 由健康人的血漿或特異免疫人血漿分由健康人的血漿或特異免疫人血漿分 離、提純或由重組技術(shù)制成的血漿蛋離、提純或由重組技術(shù)制成的血漿蛋 白組分或血細(xì)胞組分制品白組分或血細(xì)胞組分制品 。 主要產(chǎn)品：主要產(chǎn)品：人血白蛋白人血白蛋白 人免疫球蛋白人免疫球蛋白 人凝血因子等人凝血因子等14由健康人血細(xì)胞增值、分離、提純或由健康人血細(xì)胞增值、分離、提純或 由重組技術(shù)制成的多肽類或蛋白類制由重組技術(shù)制成的多肽類或蛋白

7、類制 劑。劑。 主要產(chǎn)品：干擾素主要產(chǎn)品：干擾素(IFN)(IFN) 白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素(IL)(IL) 集落刺激因子集落刺激因子(CSF) (CSF) 紅細(xì)胞生成素紅細(xì)胞生成素 (EPO)(EPO)等等15 由特定抗原、抗體或有關(guān)生由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的用于體外診斷疾病的試劑或試物物質(zhì)制成的用于體外診斷疾病的試劑或試劑盒，如傷寒、副傷寒等細(xì)菌的診斷菌液，劑盒，如傷寒、副傷寒等細(xì)菌的診斷菌液，沙門氏菌屬診斷血清，沙門氏菌屬診斷血清，HBsAgHBsAg診斷試劑盒等。診斷試劑盒等。 由抗原制成的用于體內(nèi)診斷由抗原制成的用于體內(nèi)診斷疾病的試劑，如卡介苗純蛋白衍生物（疾病的試劑，如卡

8、介苗純蛋白衍生物（BCG-BCG-PPDPPD）、錫克試劑毒素、標(biāo)記的單克隆抗體等。）、錫克試劑毒素、標(biāo)記的單克隆抗體等。16 由有關(guān)生物材料或特定方法制成的，由有關(guān)生物材料或特定方法制成的，上述上述5 5類產(chǎn)品以外的生物制品，如變態(tài)類產(chǎn)品以外的生物制品，如變態(tài)反應(yīng)原、微生態(tài)制劑、重組反應(yīng)原、微生態(tài)制劑、重組DNADNA產(chǎn)品、產(chǎn)品、基因治療產(chǎn)品、單克隆抗體制劑、某基因治療產(chǎn)品、單克隆抗體制劑、某些細(xì)胞治療制劑等。些細(xì)胞治療制劑等。17 疫苗疫苗、類毒素、類毒素、被動免疫制劑被動免疫制劑 免疫學(xué)診斷試劑、基因診斷試劑、免疫學(xué)診斷試劑、基因診斷試劑、 生化試劑生化試劑 血液制劑、細(xì)胞因子制劑、酶和

9、激素、血液制劑、細(xì)胞因子制劑、酶和激素、 特異性抗體特異性抗體、非特異性免疫治療制劑、非特異性免疫治療制劑、 基因及細(xì)胞治療制品等基因及細(xì)胞治療制品等18（二） 生物制品的分類192021u分子量不是定值。分子量不是定值。大部分生物制品的活性組分均為大分子的生命物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、核酸、多糖類等）。組分相同，但相對分子量不同而產(chǎn)生不同的生理活性，因此常需進行相對分子量的測定。u生化法結(jié)構(gòu)確證。生化法結(jié)構(gòu)確證。由于有效結(jié)構(gòu)或分子量不確定，其結(jié)構(gòu)的確證很難沿用化學(xué)藥物或結(jié)構(gòu)已知的生化藥物所常用的方法，還需要生物化學(xué)分析如：氨基酸組成、N末端氨基酸序列、肽圖等。2223u要求安全性檢查要求安全性檢

10、查。生物制品組分復(fù)雜，生物制品組分復(fù)雜，有效成分濃度很低，生物大分子雜質(zhì)含有效成分濃度很低，生物大分子雜質(zhì)含量比較高，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，易引入特殊量比較高，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，易引入特殊雜質(zhì)和污染物。如重組乙型肝炎疫苗涉雜質(zhì)和污染物。如重組乙型肝炎疫苗涉及的安全性檢查包括：細(xì)胞外源因子檢及的安全性檢查包括：細(xì)胞外源因子檢查、原液、半成品、成品中有關(guān)血清白查、原液、半成品、成品中有關(guān)血清白蛋白殘留量、蛋白殘留量、CHO細(xì)胞細(xì)胞DNA殘留量檢查、殘留量檢查、熱原檢查、過敏試驗、異常毒性檢查等。熱原檢查、過敏試驗、異常毒性檢查等。24u需做效價測定。需做效價測定。對于生物制品有效成分的檢測，除應(yīng)有一般化學(xué)方法

11、或理化分心進行有效成分含量測定外，更應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特異生理效應(yīng)或?qū)Ｒ换磻?yīng)擬定其專屬性的生物效價測定方法，以表征其所含生物活性成分的含量。例：人凝血酶原復(fù)合物的效價測定。25l生物制品化學(xué)性質(zhì)與生物學(xué)性質(zhì)都很不穩(wěn)定，又易受微生物污染，故對生物制品的均一性、有效性、安全性和穩(wěn)定性等應(yīng)有嚴(yán)格要求，以生產(chǎn)出具有藥理活性高、針對性強、毒性低、副作用小，療效可靠及營養(yǎng)價值高等特點的安全、高效的生物制品。為此，必須進行原材料、生產(chǎn)過程和最終產(chǎn)品的全程質(zhì)量控制，以確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。2627生物制品及檢定規(guī)程草案（生物制品及檢定規(guī)程草案（1952年）年）生物制品制造檢定規(guī)程（生物制品制造檢定規(guī)程（195

12、9年）年）中國生物制品規(guī)程（中國生物制品規(guī)程（2000年）年）中華人民共和國藥典三部（中華人民共和國藥典三部（2010年）年）收載生物制品101種28l品名l定義、組成及用途l基本要求l制造l檢定（原液、半成品、成品）l保存運輸及有效期l使用說明（僅預(yù)防類含此項）29生物制品生物制品u品名u定義、組成及用途u基本要求u制造u檢定（原液、半成品、成品）u保存運輸及有效期u使用說明（僅預(yù)防類含此項）化學(xué)藥品化學(xué)藥品品名化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子式性狀鑒別檢查含量測定3031u有效成分的同一性、結(jié)構(gòu)確證u有效成分的均一性、純度檢查u有害物質(zhì)及殘余雜質(zhì)等的控制u高效、靈敏的生物活性及比活性等實驗方法生物制品質(zhì)量控

13、制基本方法：u鑒別試驗u雜質(zhì)檢查u安全性檢查u含量測定（生物活性或效價）32l依據(jù)生物制品的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)特點，利用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法進行某些特殊反應(yīng)，或測定某些專屬的理化常數(shù)如紫外吸收系數(shù)、等電點、電泳遷移率、色譜保留時間和肽圖等，判斷與確證產(chǎn)品的真?zhèn)?。（一組實驗）l需用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谕粭l件下進行對照實驗。331、化學(xué)鑒別法、化學(xué)鑒別法 利用藥物與某試劑在一定條件下反應(yīng)，生成有顏色的產(chǎn)物或沉淀進行鑒別。如胰島素的沉淀反應(yīng)。2、紫外分光光度法（紅外）、紫外分光光度法（紅外） 蛋白質(zhì)生物制品主要由芳香族氨基酸側(cè)鏈如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸產(chǎn)生紫外吸收。如重組人促紅素最大吸

14、收279nm。3、高效液相色譜法高效液相色譜法 （主峰保留時間和肽圖的一致性）（主峰保留時間和肽圖的一致性） 例如腦蛋白水解液不同批次肽圖的一致性343536373839401、酶法、酶法利用酶對底物特異性的催化活力，做為酶類生物制品簡便、快速鑒別方法。如尿激酶的鑒別2、電泳法、電泳法 等電點聚焦電泳、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳等。可用于蛋白質(zhì)類生物制品的鑒別。如重組人生長激素的鑒別：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳414243（一）血清學(xué)法（一）血清學(xué)法-體外抗原抗體試驗體外抗原抗體試驗抗原抗體類生物制品的鑒別抗原抗體類生物制品的鑒別 抗原抗體在體外結(jié)合時，可因抗原物理性抗原抗體在體外結(jié)合時，可因抗原

15、物理性狀不同或參與反應(yīng)的成分不同而出現(xiàn)各種類型狀不同或參與反應(yīng)的成分不同而出現(xiàn)各種類型的反應(yīng)，如凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、中和反應(yīng)和的反應(yīng)，如凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、中和反應(yīng)和補給結(jié)合反應(yīng)，即經(jīng)典血清學(xué)反應(yīng)，在此基礎(chǔ)補給結(jié)合反應(yīng)，即經(jīng)典血清學(xué)反應(yīng)，在此基礎(chǔ)上，又衍生出免疫擴散、免疫電泳、熒光標(biāo)記、上，又衍生出免疫擴散、免疫電泳、熒光標(biāo)記、酶標(biāo)記等高度敏感的檢測技術(shù)。酶標(biāo)記等高度敏感的檢測技術(shù)。 44l利用生物體對生物制品特定的生物活性的反應(yīng)為基礎(chǔ)進行供試品的鑒別來鑒別藥物。454647 可用來判斷藥品的優(yōu)劣。由于生物可用來判斷藥品的優(yōu)劣。由于生物制品來自生物體，生物活性特特異性強，制品來自生物體，生物活

16、性特特異性強，制造與純化工藝復(fù)雜，分子結(jié)構(gòu)常常不制造與純化工藝復(fù)雜，分子結(jié)構(gòu)常常不確定，有時產(chǎn)品并非單一，極微量雜質(zhì)確定，有時產(chǎn)品并非單一，極微量雜質(zhì)可能產(chǎn)生顯著的效應(yīng)，因此，其雜質(zhì)檢可能產(chǎn)生顯著的效應(yīng)，因此，其雜質(zhì)檢查顯得尤為重要。主要包括：查顯得尤為重要。主要包括：l一般雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查l特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查l安全性檢查安全性檢查48l一般雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查 氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度、溶液的顏色、水份及干燥失重、熾燒殘溶液的顏色、水份及干燥失重、熾燒殘渣渣49從原料中帶入或生產(chǎn)工

17、藝中或貯藏過程中引入的雜質(zhì)根據(jù)生物制品的生產(chǎn)工藝特點與產(chǎn)品的穩(wěn)定性，其特殊雜質(zhì)分為：u生物污染物：生物污染物：微生物污染、宿主細(xì)胞蛋白、外源性DNA、培養(yǎng)基成分等u產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)：產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)：二聚體和多聚體、脫氨或氧化產(chǎn)物、突變物、裂解產(chǎn)物等u工藝添加劑：殘余抗生素、蛋白分離劑聚乙二醇、乙醇、佐劑氫氧化鋁，產(chǎn)品穩(wěn)定劑如辛酸鈉、肝素，防腐劑苯酚、硫柳汞，細(xì)菌與病毒滅活劑甲醛、戊二醛等。5051525354l生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞、工程菌相關(guān)的特殊雜質(zhì)。l方法：ELISA55l測定方法：l分子雜交技術(shù)l基于DNA結(jié)合蛋白分析系統(tǒng)l實時定量PCR方法56l生物制品在生產(chǎn)制造、分離純化和貯藏保存過程中產(chǎn)生

18、的與產(chǎn)品結(jié)構(gòu)類似的同系物、異構(gòu)體、突變物、氧化物、聚合體或降解物。l常用HPLC法和電泳法。l如重組人生長激素中相關(guān)蛋白質(zhì)的測定總相關(guān)蛋白質(zhì)含量不超過10%。57l如果生物制品在生產(chǎn)過程中使用了抗生素，則不僅要在純化工藝中除去，而且要在原液檢定中增加殘余抗生素活性的檢測方法。l常用方法：抑菌圈測量。l結(jié)果判定：對照溶液有抑菌圈，陰性對照無抑菌圈，供試品溶液抑菌圈的直徑小于對照溶液抑菌圈的58l（一）熱原檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（一）熱原檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 法法l（二）異常毒性檢查（二）異常毒性檢查l（三）過敏試驗（三）過敏試驗l 檢查異性蛋白檢查異性蛋白l（四）降壓試驗（四）降壓試驗l 檢查

19、組胺、類組胺或其他導(dǎo)致血壓下降檢查組胺、類組胺或其他導(dǎo)致血壓下降的物質(zhì)的物質(zhì)l（五）無菌試驗（五）無菌試驗檢查藥品及敷料是否有活菌的一種方法檢查藥品及敷料是否有活菌的一種方法59l（一）含量測定（一）含量測定l表示方法：表示方法：l百分含量：百分含量：適用于結(jié)構(gòu)明確的小分子藥適用于結(jié)構(gòu)明確的小分子藥物或經(jīng)水解變成小分子的藥物物或經(jīng)水解變成小分子的藥物l測定方法：測定方法：l1、HPLCl2、SDS-PAGEl（二）效價測定二）效價測定l表示方法：表示方法：l生物效價或酶活力：生物效價或酶活力：適用于酶類或蛋白適用于酶類或蛋白質(zhì)類藥物。質(zhì)類藥物。60616263（一）滴定分析法（一）滴定分析法

20、根據(jù)生物制品中某些成分能與標(biāo)準(zhǔn)溶根據(jù)生物制品中某些成分能與標(biāo)準(zhǔn)溶液定量地發(fā)生酸堿中和反應(yīng)、氧化還原液定量地發(fā)生酸堿中和反應(yīng)、氧化還原反應(yīng)等特性，通過滴定進行含量測定。反應(yīng)等特性，通過滴定進行含量測定。如胰酶中胰脂肪酶的測定。以橄欖油為如胰酶中胰脂肪酶的測定。以橄欖油為底物，經(jīng)胰脂肪酶水解后產(chǎn)生脂肪酸，底物，經(jīng)胰脂肪酶水解后產(chǎn)生脂肪酸，用氫氧化鈉液滴定。用氫氧化鈉液滴定。64651、比色法、比色法 例如：硫酸軟骨素的測定例如：硫酸軟骨素的測定2、紫外分光光度法、紫外分光光度法 糜蛋白酶與底物糜蛋白酶與底物N-乙酰乙酰-L-酪氨酸酪氨酸 237nm測定測定3、熒光分光光度法、熒光分光光度法 反應(yīng)物

21、或反應(yīng)產(chǎn)物激發(fā)產(chǎn)生應(yīng)觀熒光反應(yīng)物或反應(yīng)產(chǎn)物激發(fā)產(chǎn)生應(yīng)觀熒光 應(yīng)用熒光試劑產(chǎn)生熒光應(yīng)用熒光試劑產(chǎn)生熒光 應(yīng)用另一酶的催化反應(yīng)產(chǎn)生熒光應(yīng)用另一酶的催化反應(yīng)產(chǎn)生熒光66l特點：特點：適合于對高沸點、大分子、適合于對高沸點、大分子、強極性和熱穩(wěn)定性差強極性和熱穩(wěn)定性差l 色譜柱：色譜柱：C8、C18流動相：甲醇流動相：甲醇-水（或緩沖液）、乙腈水（或緩沖液）、乙腈-水水 （或緩沖液）（或緩沖液）檢測器：檢測器：UV、熒光、熒光、ECD色譜條件：67l多肽及蛋白質(zhì)等生物藥物的分離及其分多肽及蛋白質(zhì)等生物藥物的分離及其分子量測定子量測定l特點：特點：l活性蛋白質(zhì)可以回收活性蛋白質(zhì)可以回收l流動相通常為緩沖

22、液，為改善分離，可流動相通常為緩沖液，為改善分離，可加少量有機改性劑或表面活性劑加少量有機改性劑或表面活性劑l根據(jù)有效粒徑分離根據(jù)有效粒徑分離l68色譜條件：l色譜柱：色譜柱：SEC-3000柱柱l流動相：流動相：0.01mmol/LKH2PO4：0.1mmol/L Na2SO4（1：1），），內(nèi)加內(nèi)加0.05%疊氮化鈉疊氮化鈉l流速：流速：1mL/minl柱溫：柱溫：l檢測波長檢測波長:280nm色譜條件：697071l酶法酶法酶活力測定法酶活力測定法以酶為分析對象以酶為分析對象l 酶分析法酶分析法以酶為分析工具或分析試劑以酶為分析工具或分析試劑l酶活力測定法酶活力測定法l酶催化一定化學(xué)反應(yīng)

23、的能力。測定一個被酶所催酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。測定一個被酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度以單位時間底物化的化學(xué)反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度以單位時間底物的減少或產(chǎn)物的增加來表示。的減少或產(chǎn)物的增加來表示。 酶活力酶活力72l（1）底物濃度的影響：選擇）底物濃度的影響：選擇Km小的作底物小的作底物 l（2）pH的影響的影響l（3）溫度的影響：溫度控制在）溫度的影響：溫度控制在0.1度度l（4）輔助因子的影響）輔助因子的影響l（5）空白和對照試驗）空白和對照試驗 空白空白：雜質(zhì)反應(yīng)和自發(fā)反應(yīng)引起的變化量：雜質(zhì)反應(yīng)和自發(fā)反應(yīng)引起的變化量 對照實驗對照實驗：用純酶或標(biāo)準(zhǔn)酶制劑測定。用：用純酶或標(biāo)準(zhǔn)酶制劑

24、測定。用 于比較或測定的標(biāo)準(zhǔn)。于比較或測定的標(biāo)準(zhǔn)。73l（1）取樣測定法）取樣測定法l 停止酶反應(yīng)的方法：添加變性劑停止酶反應(yīng)的方法：添加變性劑l 加熱使酶失效加熱使酶失效l（2）連續(xù)測定法）連續(xù)測定法 74l1、UV-VIS根據(jù)產(chǎn)物和底物特征吸收根據(jù)產(chǎn)物和底物特征吸收 差別差別l2、熒光熒光l3、旋光法、旋光法l4、酶偶聯(lián)測定法、酶偶聯(lián)測定法 例如：例如：ELASAl5、其他：電化學(xué)法、離子選擇電極測其他：電化學(xué)法、離子選擇電極測定等定等 75l以酶為分析工具的方法。分析的對象可以是酶的底物、輔酶活化劑或酶抑制劑。l影響因素：酶和作用物的濃度、反應(yīng)時間、溫度和pH76l生物制品藥物分析的重要

25、手段。生物制品藥物分析的重要手段。l在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場作在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移。遷移。l1、自由界面電泳、自由界面電泳l2、區(qū)帶電泳、區(qū)帶電泳:紙電泳、紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、PAGE、SDS-PAGE。l3、HPCE：CZE、MECC、CGE、CIEF電泳原理電泳原理電泳分類電泳分類777879l1、紙電泳法：、紙電泳法： （1）操作方法；）操作方法； （2）定量方法：同紙色譜）定量方法：同紙色譜 （3）應(yīng)用：蛋白質(zhì)、核苷酸類）應(yīng)用：蛋白質(zhì)、核苷酸類80l

26、應(yīng)用：血清蛋白、脂蛋白等的分離測定應(yīng)用：血清蛋白、脂蛋白等的分離測定3、PAGE法法 聚丙烯酰胺凝膠，分離效果取決于分子聚丙烯酰胺凝膠，分離效果取決于分子所帶電荷與分子大小的比例及分子篩效應(yīng)。所帶電荷與分子大小的比例及分子篩效應(yīng)。 4、SDS-PAGE法法 測定酶和蛋白等大分子物質(zhì)分子量，蛋白測定酶和蛋白等大分子物質(zhì)分子量，蛋白分子相對遷移率的大小完全取決于分子量的分子相對遷移率的大小完全取決于分子量的高低，從已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的對數(shù)和相高低，從已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的對數(shù)和相對遷移率的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出對遷移率的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出。81l（1）操作方法）操作方法l（2）染色與洗脫）染色與洗脫l（3）

27、定量測定）定量測定l（4）應(yīng)用）應(yīng)用82l 利用藥物對生物體（整體動物、離體利用藥物對生物體（整體動物、離體組織、微生物等）的作用測定其效價或組織、微生物等）的作用測定其效價或生物活性的方法。以藥物的藥理作用為生物活性的方法。以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設(shè)計，通過供試品和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品在驗設(shè)計，通過供試品和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品在一定條件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)的劑一定條件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)的劑量比例，來測試供試品的效價。量比例，來測試供試品的效價。定義定義83l1、藥物的效價測定、藥物的效價測定l2、大分子結(jié)構(gòu)的測定、大分子結(jié)構(gòu)的測定l3、微量生物活性物質(zhì)的測定、微量生物活性物質(zhì)的測定l特點：特點：l結(jié)果誤差較大，重現(xiàn)性也較差，測結(jié)果誤差較大，重現(xiàn)性也較差，測定費時，適用于無適當(dāng)理化方法進定費時，適用于無適當(dāng)理化方法進行檢定的藥物行檢定的藥物84851234586678788生物藥物生物藥物（來源和生產(chǎn)方法）（來源和生產(chǎn)方法）生化藥物生化藥物生物合成藥物生物合成藥物生物制品生物制品89 由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備而成，包括：而成，包括：減毒活疫苗：乙型腦炎減毒疫苗、麻疹疫苗、減毒活疫苗：乙型腦炎減