實驗5 乳酸脫氫酶的活性測定

1、實驗5 唾液淀粉酶特性實驗 1、任務(wù)背景、任務(wù)背景 淀粉是葡萄糖以-1，4糖苷鍵及-1，6糖苷鍵聯(lián)結(jié)的高分子多糖，是人類和動物的重要食物，也是動物飼料中的重要成分。淀粉酶是催化分解淀粉的酶的總稱，它存在于動物的唾液和小腸中，催化淀粉水解為麥芽糖，是淀粉進入能量代謝的初級反應(yīng)，淀粉酶對淀粉的分解作用是人和動物利用淀粉的依據(jù)，淀粉酶活性的觀察與測定，具有重要的理論和應(yīng)用研究的意義。 2、任務(wù)目標、任務(wù)目標 理解酶的作用條件。 3、工作原理、工作原理 酶的特點之一對環(huán)境酸堿度敏感。酶表現(xiàn)最大活力時的pH值稱為酶的最適pH值。一般酶的最適pH值在48之間。 酶的催化作用受溫度的影響很大，反應(yīng)速度達到最

2、大值時的溫度稱為酶的最適溫度。大多數(shù)動物酶的最適溫度為3740，大多數(shù)植物酶的最適溫度為5060。 低濃度的氯離子能增加淀粉酶的活性，是它的激活劑。銅離子能降低該酶的活性，是它的抑制劑。 淀粉與各級糊精遇碘呈現(xiàn)不同的顏色。在不同pH、溫度以及激活劑、抑制劑存在下，唾液淀粉酶對淀粉水解活力的高低可通過水解混合物遇碘呈現(xiàn)顏色的不同來判斷。實驗步驟實驗步驟1 10稀釋唾液：取離心管 收集唾液0.51ml，3000r/min離心5min取0.5ml唾液，置新離心管中，加水4.5ml，充分混勻。實驗步驟實驗步驟1）溫度對酶活性的影響 取三支離心管按下表操作：加入物加入物1231% 淀粉溶液淀粉溶液0.5

3、0.50.5PH6.8緩沖液緩沖液0.50.50.5平衡平衡5mim37沸水冰浴冰浴稀唾液稀唾液0.10.10.1反應(yīng)溫度反應(yīng)溫度（計時）（計時）37沸水沸水冰浴冰浴 每反應(yīng)1min，取1號管反應(yīng)液1滴，加含有碘液的反應(yīng)板上觀察顏色變化。當(dāng)顏色為黃色時候，取出三管，冷卻到室溫，各加入1滴碘液。 記錄反應(yīng)結(jié)束時間t，及各管顏色。實驗步驟實驗步驟2）pH對酶活性的影響取三支離心管按下表操作：反應(yīng)t分鐘后，取三管各加入碘液一滴，記錄反應(yīng)顏色。加入加入物物ml4561%淀粉溶液淀粉溶液0.50.50.5P5.7緩沖液緩沖液0.5-PH6.8緩沖液緩沖液-0.5-PH8.0緩沖液緩沖液0.5搖勻后搖勻后37恒溫水浴中保溫恒溫水浴中保溫5分鐘分鐘稀唾液稀唾液0.1 0.1 0.1上面各管搖勻后放入上面各管搖勻后放入37恒溫水浴中保溫恒溫水浴中保溫實驗步驟實驗步驟3）激活劑與抑制劑：反應(yīng)t分鐘后，取三管各加入碘液一滴，記錄反應(yīng)顏色。加入加入物物ml7891%淀粉溶液淀粉溶液0.50.50.5P6.8緩沖緩沖液液0.50.50.5蒸餾水蒸餾水0.51%NaCl-0.5-1%CuSO40.5搖勻后搖勻后37恒溫水浴中保溫恒溫水浴中