血液樣本采集和血涂片制備課件VIP

1、福清市老年醫(yī)院檢驗科 李金輝 1血液樣本采集和血涂片制備（一）血液的組成（一）血液的組成血液由（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）和血漿組血液由（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）和血漿組 成成血漿：血漿：血液加抗凝劑后分離出的淡黃色液體血液加抗凝劑后分離出的淡黃色液體血清：血清：離體后的血液自然凝固析出的淡黃色透離體后的血液自然凝固析出的淡黃色透 明液體明液體血漿與血清的區(qū)別：血漿與血清的區(qū)別： 血清缺少某些凝血因子，如：凝血因子血清缺少某些凝血因子，如：凝血因子（纖維蛋白原）、（纖維蛋白原）、（凝血酶原）、（凝血酶原）、等。等。一、血液生理概要一、血液生理概要2血液樣本采集和血涂片制備3血液樣本采集和血涂片制

2、備（二）血液的理化性質(zhì)（二）血液的理化性質(zhì)血量：成人約血量：成人約4-5L4-5L，約占體重的，約占體重的6%-8%6%-8%， 血漿占血漿占55%55%，血細(xì)胞，血細(xì)胞45%45%顏色：顏色：紅色，動脈呈鮮紅色，靜脈血呈暗紅色。嚴(yán)重貧血者紅色，動脈呈鮮紅色，靜脈血呈暗紅色。嚴(yán)重貧血者 紅色變淺。一氧化碳或氰化物中毒者血液呈紅色變淺。一氧化碳或氰化物中毒者血液呈櫻紅色櫻紅色酸堿度：酸堿度：成人成人PH 7.3PH 7.37.457.45，動脈血，動脈血PH 7.40 PH 7.40 靜脈血靜脈血pH pH 7.357.35比密和滲透量：男性約比密和滲透量：男性約 1.0551.0551.063

3、1.063，女性約，女性約 1.0511.0511.0601.060 相對粘度為相對粘度為4 45 5；血漿比密約；血漿比密約1.0251.0251.0301.030。 血液比密與紅細(xì)胞含量、紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白血液比密與紅細(xì)胞含量、紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量有關(guān)含量有關(guān) 血漿比密與血漿內(nèi)血紅蛋白有關(guān)。血漿比密與血漿內(nèi)血紅蛋白有關(guān)。血漿滲透量血漿滲透量: :約約290290310mOsm310mOsmkgkgH H O O4血液樣本采集和血涂片制備 ( (三三) ) 血液特性血液特性 懸浮穩(wěn)定性懸浮穩(wěn)定性 紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性 均勻混懸狀態(tài)均勻混懸狀態(tài) 粘滯性粘滯性全全

4、血粘度為生理鹽水的血粘度為生理鹽水的4 45 5倍，倍， 血漿粘度為生理鹽水的血漿粘度為生理鹽水的1.61.6倍左倍左 右右 凝固性凝固性 血液從血管中流出可自行凝固血液從血管中流出可自行凝固 （四）血液生理功能（四）血液生理功能 運輸功能 協(xié)調(diào)功能 維護(hù)機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定 防御功能 5血液樣本采集和血涂片制備二、采血方法二、采血方法（一）靜脈采血法（一）靜脈采血法 1 1、采血部位采血部位 ： 肘部靜脈、手背靜脈、內(nèi)踝肘部靜脈、手背靜脈、內(nèi)踝靜脈靜脈 或股靜脈或股靜脈 小兒可采頸小兒可采頸外靜脈血液外靜脈血液 6血液樣本采集和血涂片制備2 2、操作方法：、操作方法： 準(zhǔn)備試管準(zhǔn)備試管 檢查注射器

5、檢查注射器 選擇靜脈選擇靜脈 消毒消毒 扎壓脈帶扎壓脈帶 穿刺穿刺 抽血抽血 放血與混勻放血與混勻 7血液樣本采集和血涂片制備3 3、注意事項：、注意事項： （1 1）采血前應(yīng)向患者耐心解釋，以消除疑慮和采血前應(yīng)向患者耐心解釋，以消除疑慮和 恐懼心理恐懼心理 （2 2） 所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣、針筒不漏氣所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣、針筒不漏氣 若靜脈暴露不明顯，可用左手食指若靜脈暴露不明顯，可用左手食指消毒后，消毒后， 觸摸采血部位，發(fā)現(xiàn)靜脈后憑手感觸摸采血部位，發(fā)現(xiàn)靜脈后憑手感的方向的方向 性性 穿刺穿刺 （3 3）抽血時只能往外抽，不能往里推）抽血時只能往外抽，不能往里推8血液樣本采集

6、和血涂片制備（二）皮膚采血法：（二）皮膚采血法：1 1、概述：、概述： 又稱為毛細(xì)血管采血法，是采集微動脈、微靜脈和又稱為毛細(xì)血管采血法，是采集微動脈、微靜脈和毛細(xì)血管的混合血，同時含細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。毛細(xì)血管的混合血，同時含細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。 采血部位：世界衛(wèi)生組織（采血部位：世界衛(wèi)生組織（WHOWHO）推薦采集左手推薦采集左手 無名指指端內(nèi)側(cè)血液，嬰幼兒可采集大踇趾或足無名指指端內(nèi)側(cè)血液，嬰幼兒可采集大踇趾或足跟內(nèi)側(cè)緣血液，嚴(yán)重?zé)齻颊?，可選擇皮膚完整處采血。跟內(nèi)側(cè)緣血液，嚴(yán)重?zé)齻颊撸蛇x擇皮膚完整處采血。 目前可用激光無痛采指血儀采血。目前可用激光無痛采指血儀采血。9血液樣本采集和

7、血涂片制備2 2、操作方法：、操作方法： 準(zhǔn)備準(zhǔn)備 取合適試管，加適量稀釋液取合適試管，加適量稀釋液 取微量試管與乳膠吸頭相連并檢取微量試管與乳膠吸頭相連并檢查是否漏查是否漏 氣，或取一次性微量采血管氣，或取一次性微量采血管 按摩按摩 按摩左手中指或無名指指端內(nèi)側(cè)，使按摩左手中指或無名指指端內(nèi)側(cè)，使局部局部 組織充血組織充血 消毒消毒 用用75%75%的乙醇棉簽擦拭采血部位，待的乙醇棉簽擦拭采血部位，待干干10血液樣本采集和血涂片制備針刺針刺 左手捏緊采血指端，右手持一次性消毒左手捏緊采血指端，右手持一次性消毒采血采血 針自指端腹內(nèi)刺入，深度針自指端腹內(nèi)刺入，深度2 23mm3mm拭血拭血 血

8、液流出后，用無菌棉球擦去第一滴血血液流出后，用無菌棉球擦去第一滴血吸血吸血 用一次性微量吸管吸血，止血。若血流用一次性微量吸管吸血，止血。若血流不不 暢，可用左手自采血部位遠(yuǎn)端向暢，可用左手自采血部位遠(yuǎn)端向指端施壓指端施壓 使血液流出使血液流出 11血液樣本采集和血涂片制備稀釋稀釋 用無菌干棉球擦去吸管外部血液，將吸用無菌干棉球擦去吸管外部血液，將吸管伸管伸 入裝有稀釋液的試管底部，慢慢排入裝有稀釋液的試管底部，慢慢排試管內(nèi)的試管內(nèi)的 出血液，并用上清液清洗管內(nèi)余血出血液，并用上清液清洗管內(nèi)余血2 23 3次，次， 最后將試管內(nèi)的血液混勻最后將試管內(nèi)的血液混勻12血液樣本采集和血涂片制備3 3

9、、注意事項、注意事項（1 1）所選采血部位皮膚應(yīng)完整，無燒傷、凍瘡、發(fā)）所選采血部位皮膚應(yīng)完整，無燒傷、凍瘡、發(fā)紺水腫或炎癥，除特殊情況外，不要耳垂采血紺水腫或炎癥，除特殊情況外，不要耳垂采血（2 2）應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止采血部位感染，做到一）應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止采血部位感染，做到一人一針一管，避免交叉感染。人一針一管，避免交叉感染。（3 3）消毒后，待乙醇揮發(fā)后采血，否則流血不易成）消毒后，待乙醇揮發(fā)后采血，否則流血不易成滴滴（4 4）因第一滴血混有組織液，應(yīng)擦去，應(yīng)向結(jié)果的）因第一滴血混有組織液，應(yīng)擦去，應(yīng)向結(jié)果的準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性 13血液樣本采集和血涂片制備（三）真空采血法：（三）真空采血法

10、： 真空采血裝置有套筒式、頭皮靜脈式真空采血裝置有套筒式、頭皮靜脈式兩種。封閉式采血避免了容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶兩種。封閉式采血避免了容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，能有效保護(hù)血液有形成分，保證待檢樣本血現(xiàn)象，能有效保護(hù)血液有形成分，保證待檢樣本原始性狀的完整性，是檢驗結(jié)果更可靠。能有效避原始性狀的完整性，是檢驗結(jié)果更可靠。能有效避免醫(yī)護(hù)人員與患者之間的交叉感染免醫(yī)護(hù)人員與患者之間的交叉感染 。各種真空采血。各種真空采血容器根據(jù)需要標(biāo)有不同的色碼，適用于不同檢驗項容器根據(jù)需要標(biāo)有不同的色碼，適用于不同檢驗項目（表目（表1-1-11-1-1）。）。14血液樣本采集和血涂片制備表表 1-1-1 常用

11、彩色真空采血容器的用途常用彩色真空采血容器的用途 蓋子顏色蓋子顏色 添加劑添加劑 注意事項注意事項 用途用途 紅色紅色 無無 凝塊形成凝塊形成約約需需 30306060minmin 化學(xué)化學(xué)、血清學(xué)、血清學(xué)、血庫、血庫 紫色紫色 EDTAEDTA 須須顛倒混勻顛倒混勻 8 8 次次 全血細(xì)胞計數(shù)全血細(xì)胞計數(shù)（CBCCBC） 淡藍(lán)色淡藍(lán)色 枸櫞酸枸櫞酸鈉鈉 須顛倒混勻須顛倒混勻 3 34 4 次次；血液與抗凝劑比例為血液與抗凝劑比例為9 9:1:1 凝血檢查凝血檢查 （PTAPTA、 PTTPTT、因子測定因子測定） 綠色綠色 肝素鈉肝素鈉、肝素鋰肝素鋰、肝肝素鋰素鋰 根據(jù)根據(jù)實驗需要實驗需要，

12、選擇選擇不同類型不同類型肝素肝素；須顛須顛倒混勻倒混勻 8 8 次次 化學(xué)化學(xué) 灰色灰色 氟化鈉氟化鈉 須顛倒混勻須顛倒混勻 8 8 次次 葡萄糖葡萄糖、糖耐量糖耐量 黃色黃色 多聚茴香腦磺酸鈉多聚茴香腦磺酸鈉 須顛倒混勻須顛倒混勻 8 8 次次 血培養(yǎng)血培養(yǎng) 金黃色金黃色 分離膠分離膠/ /凝塊激活劑凝塊激活劑 須顛倒混勻須顛倒混勻 5 5 次次 化學(xué)化學(xué) 淡綠色淡綠色 分離膠分離膠/ /肝素鋰肝素鋰 須顛倒混勻須顛倒混勻 8 8 次次 化學(xué)化學(xué) 黑色黑色 枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 須顛倒混勻須顛倒混勻 8 8 次次，血血液與抗凝劑比例為液與抗凝劑比例為4 4:1:1 血沉血沉 橘紅的橘紅的 促凝劑

13、促凝劑 須顛倒混勻須顛倒混勻 8 8 次次，靜靜置置 5min5min 快速生化快速生化 15血液樣本采集和血涂片制備（四）方法學(xué)評價（四）方法學(xué)評價1 1、皮膚采血法：、皮膚采血法： 缺點易溶血、凝血、混入組織液，局缺點易溶血、凝血、混入組織液，局部皮膚揉擦、刺針深度不一等影響檢驗結(jié)果；結(jié)果部皮膚揉擦、刺針深度不一等影響檢驗結(jié)果；結(jié)果重復(fù)性差、準(zhǔn)確性不好重復(fù)性差、準(zhǔn)確性不好 2 2、 靜脈采血法：靜脈采血法： 開放式采血法，操作環(huán)節(jié)多、難于開放式采血法，操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范、易造成血液污染；封閉式采血法，操作規(guī)范，規(guī)范、易造成血液污染；封閉式采血法，操作規(guī)范，利于樣本運送和保存，防止院內(nèi)血源

14、性傳染病。利于樣本運送和保存，防止院內(nèi)血源性傳染病。16血液樣本采集和血涂片制備（五）質(zhì)量控制（五）質(zhì)量控制 1 1、患者、患者 患者活動情況、精神狀態(tài)、藥物等患者活動情況、精神狀態(tài)、藥物等會影會影 響檢測結(jié)果響檢測結(jié)果 2 2、采血、采血 止血帶結(jié)扎應(yīng)止血帶結(jié)扎應(yīng)1min1min 3 3、溶血、溶血 容器不潔凈、劇烈震蕩、操作不當(dāng)容器不潔凈、劇烈震蕩、操作不當(dāng)引起引起 溶血使血細(xì)胞計數(shù)、血漿、溶血使血細(xì)胞計數(shù)、血漿、血清化學(xué)成血清化學(xué)成 分改變等多項指標(biāo)檢驗結(jié)分改變等多項指標(biāo)檢驗結(jié)果發(fā)生變化果發(fā)生變化17血液樣本采集和血涂片制備 4 4、樣本處理、樣本處理 采血后立即送檢，標(biāo)本保存不當(dāng)直接采

15、血后立即送檢，標(biāo)本保存不當(dāng)直接 影響影響檢驗檢驗 結(jié)果結(jié)果5 5、實驗結(jié)果分析、實驗結(jié)果分析 應(yīng)考慮藥物、飲食等因數(shù)對結(jié)果的影響，同應(yīng)考慮藥物、飲食等因數(shù)對結(jié)果的影響，同時密時密 切結(jié)合臨床切結(jié)合臨床18血液樣本采集和血涂片制備三、抗凝劑的選擇三、抗凝劑的選擇抗凝：抗凝： 是用物理或化學(xué)的方法除去或抑制血液中的是用物理或化學(xué)的方法除去或抑制血液中的 某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固?？鼓齽┗蚩鼓镔|(zhì)：抗凝劑或抗凝物質(zhì)： 能夠阻止血液凝固的物質(zhì)能夠阻止血液凝固的物質(zhì) 常用的抗凝物質(zhì)如下：常用的抗凝物質(zhì)如下：19血液樣本采集和血涂片制備 1 1、乙二胺四乙酸（

16、、乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）鹽）鹽 鈉鹽（鈉鹽（EDTAEDTANaNaH HO O）鉀鹽（）鉀鹽（EDTAEDTAK K H H O O），能與血液中的），能與血液中的鈣離子結(jié)合成螯合物鈣離子結(jié)合成螯合物，使，使鈣離子失去凝血作用，阻止血液凝固。鈣離子失去凝血作用，阻止血液凝固。 其有效抗凝濃度為其有效抗凝濃度為1 12mg/ml2mg/ml血液。血液。 血細(xì)胞分析儀用血細(xì)胞分析儀用EDTA-KEDTA-K2 2作抗凝劑作抗凝劑，用量為，用量為 EDTA- K EDTA- K2 22H2H2 2O 1.5O 1.52.2mg/ml2.2mg/ml血液血液20血液樣本采集和血涂片制備 2

17、 2、草酸鹽、草酸鹽 草酸根離子能與樣本中的草酸根離子能與樣本中的鈣離子形成鈣離子形成草酸鈣沉淀草酸鈣沉淀， 使鈣離子失去作用，阻止血液凝固。使鈣離子失去作用，阻止血液凝固。 草酸鹽：草酸鹽： 溶解度好、廉價，但對凝血因子溶解度好、廉價，但對凝血因子的保護(hù)作用差，影響凝血酶原時間測定，因此的保護(hù)作用差，影響凝血酶原時間測定，因此草酸草酸鹽不適用于凝血檢查。鹽不適用于凝血檢查。21血液樣本采集和血涂片制備 3 3、草酸鹽、草酸鹽雙草酸鹽：雙草酸鹽： 不影響紅細(xì)胞形態(tài)和體積，可用于不影響紅細(xì)胞形態(tài)和體積，可用于血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù) 可使血小板

18、聚集、影響白細(xì)胞形態(tài)，可使血小板聚集、影響白細(xì)胞形態(tài)，不適用于血小板計數(shù)、白細(xì)胞分類數(shù)不適用于血小板計數(shù)、白細(xì)胞分類數(shù)22血液樣本采集和血涂片制備 4 4、肝素、肝素 加強抗凝血酶（加強抗凝血酶（ATAT）滅活絲氨酸）滅活絲氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等蛋白酶，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，從而阻止血液凝固。作用，從而阻止血液凝固。 肝素具有抗凝力強、不影響紅細(xì)肝素具有抗凝力強、不影響紅細(xì)胞體積、不易溶血等優(yōu)點，絕大都數(shù)檢查都可用肝胞體積、不易溶血等優(yōu)點，絕大都數(shù)檢查都可用肝素做抗凝劑，是素做抗凝劑，是紅細(xì)胞滲透脆性試驗的的理想抗凝紅細(xì)胞滲透脆性試驗的的理想抗凝劑

19、劑。 可影起白細(xì)胞聚集瑞，氏染色后產(chǎn)可影起白細(xì)胞聚集瑞，氏染色后產(chǎn)生藍(lán)色背景，不適用于生藍(lán)色背景，不適用于CBCCBC、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查23血液樣本采集和血涂片制備 5 5、枸櫞酸鹽、枸櫞酸鹽 常用有枸櫞酸鈉，能與血液中的常用有枸櫞酸鈉，能與血液中的鈣離子結(jié)合形成螯合物，阻止血液凝固。鈣離子結(jié)合形成螯合物，阻止血液凝固。 應(yīng)用范圍：血沉、凝血象、血小板功能檢查應(yīng)用范圍：血沉、凝血象、血小板功能檢查及血及血 液保養(yǎng)液。液保養(yǎng)液。 凝血凝血: 10: 109 9mmol/Lmmol/L水溶液水溶液, ,與血液之比為與血液之比為1:91:9； 血沉血沉: 10: 106 6mmol/L

20、mmol/L水溶液水溶液, ,與血液之比為與血液之比為1:41:4。24血液樣本采集和血涂片制備四、血液涂片制備四、血液涂片制備（一）載玻片的清潔（一）載玻片的清潔 1. 1. 新玻片新玻片 1mol/L HCl1mol/L HCl泡泡2424小時小時水洗水洗干燥。干燥。 2. 2. 舊載玻片舊載玻片 肥皂水或其他合成洗滌劑水中煮沸肥皂水或其他合成洗滌劑水中煮沸2020分鐘分鐘熱水洗熱水洗自來水洗自來水洗干燥。干燥。(95%(95%乙醇泡乙醇泡1 1小時小時蒸餾蒸餾水洗水洗干后備用干后備用) )。 25血液樣本采集和血涂片制備（二）血涂片的制備（二）血涂片的制備方法方法1.1.取血滴。取血滴。

21、2.2.散開血滴。散開血滴。3.3.推片。推片。4.4.干燥干燥26血液樣本采集和血涂片制備1 1、手工推片法：、手工推片法： 取血液一滴，置于載玻片一端以邊取血液一滴，置于載玻片一端以邊緣平滑的推片（推片兩端應(yīng)平整光滑，比載玻片稍緣平滑的推片（推片兩端應(yīng)平整光滑，比載玻片稍窄或磨去兩角）的一端，放在血滴前方，逐漸后移窄或磨去兩角）的一端，放在血滴前方，逐漸后移接觸血滴，血液立即沿推片散開。接觸血滴，血液立即沿推片散開。27血液樣本采集和血涂片制備1 1、手工推片法：、手工推片法：將推片與載將推片與載片保持片保持3030-45-45夾夾角，平穩(wěn)向前推角，平穩(wěn)向前推進(jìn)至載玻片的另進(jìn)至載玻片的另一

22、端，殘片上即一端，殘片上即留下一薄層血膜。留下一薄層血膜。28血液樣本采集和血涂片制備1 1、手工推片法：、手工推片法： 血膜的影響因素血膜的影響因素 1.1.血滴大小、血滴大小、 2.2.推片與載玻片之間的角度、推片與載玻片之間的角度、 3.3.推片時的速度有關(guān)。推片時的速度有關(guān)。 血滴愈大、角度愈大、推片時速度愈快，血滴愈大、角度愈大、推片時速度愈快， 則血膜愈厚；反之血膜愈薄。則血膜愈厚；反之血膜愈薄。 29血液樣本采集和血涂片制備2 2、厚血膜涂片法、厚血膜涂片法 載玻片中央置血載玻片中央置血1 1滴滴 鏡檢鏡檢 用推片角將血由內(nèi)向外旋用推片角將血由內(nèi)向外旋 染色染色轉(zhuǎn)涂成厚薄均勻、直

23、徑約轉(zhuǎn)涂成厚薄均勻、直徑約 1.5cm 1.5cm的圓形血膜的圓形血膜 待干待干 待干待干加蒸餾水使紅細(xì)胞溶解加蒸餾水使紅細(xì)胞溶解待干待干鏡鏡30血液樣本采集和血涂片制備一張良好的血涂片的要求一張良好的血涂片的要求 厚薄適宜厚薄適宜 頭體尾分明頭體尾分明 細(xì)胞分布均勻細(xì)胞分布均勻 血膜邊緣整齊，并留有一定空隙血膜邊緣整齊，并留有一定空隙31血液樣本采集和血涂片制備五、血液細(xì)胞染色五、血液細(xì)胞染色（一）瑞氏染色法（一）瑞氏染色法 瑞氏染液是有酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的瑞氏染液是有酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料溶于甲醇而成。復(fù)合染料溶于甲醇而成。 甲醇的作用：溶解亞甲藍(lán)和伊紅甲醇的

24、作用：溶解亞甲藍(lán)和伊紅 固定細(xì)胞形態(tài)固定細(xì)胞形態(tài)32血液樣本采集和血涂片制備1 1、染色原理、染色原理伊紅系不易解離的弱酸性染料，通常用伊紅鈉鹽（+），其有色部分是伊紅，為陰離子，所以伊紅是酸性染料。33血液樣本采集和血涂片制備1 1、染色原理、染色原理 【原理 】 美藍(lán)又名亞甲藍(lán)，為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)（ +-）。其有色部分是美藍(lán)，為陽離子，所以是一種堿性染料。 34血液樣本采集和血涂片制備1 1、染色原理、染色原理 【原理】 細(xì)胞的受色既有化學(xué)親和作用，也有物理吸附作用。細(xì)胞中的嗜酸性物質(zhì)（如血紅蛋白、嗜酸性顆粒）易與酸性染料伊紅結(jié)合，染成粉紅色

25、；細(xì)胞中的嗜堿性物質(zhì)（如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒）易與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染成藍(lán)色；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫紅色。 35血液樣本采集和血涂片制備2 2、PHPH對細(xì)胞染色的影響對細(xì)胞染色的影響 1.1.在酸性環(huán)境中，染色偏紅；在酸性環(huán)境中，染色偏紅； 2.2.在堿性環(huán)境中在堿性環(huán)境中, ,染色偏藍(lán)。染色偏藍(lán)。 染色時應(yīng)用染色時應(yīng)用pH6.4pH6.46.86.8的緩沖液維持恒定的酸的緩沖液維持恒定的酸堿環(huán)境。堿環(huán)境。36血液樣本采集和血涂片制備3 3、試劑調(diào)配、試劑調(diào)配（1 1） 液：瑞氏染料液：瑞氏染料1.0g1.0g、純甲醇（、純甲醇（ARAR級以上）級以上） 60

26、0ml 600ml、甘油、甘油15ml15ml。 染料放入清潔干燥的乳缽中，加入少量甲醇染料放入清潔干燥的乳缽中，加入少量甲醇慢研慢研30min30min以上，將充分溶解的染料后倒入潔凈的以上，將充分溶解的染料后倒入潔凈的棕色瓶內(nèi)，乳缽內(nèi)再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次棕色瓶內(nèi)，乳缽內(nèi)再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止，最后加研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止，最后加入入15ml15ml甘油，密封保存。甘油，密封保存。37血液樣本采集和血涂片制備試劑調(diào)配試劑調(diào)配（2 2）夜：磷酸鹽緩沖液（夜：磷酸鹽緩沖液（PH 6.4PH 6.46.86.8） 由磷酸二氫鉀（由磷酸

27、二氫鉀（KHKH POPO ）0.3g0.3g、磷酸氫二、磷酸氫二鈉鈉 （NaNa HPOHPO ）0.2g0.2g、蒸餾水加至、蒸餾水加至1000lm1000lm。配。配好好 后用磷酸鹽溶液矯正后用磷酸鹽溶液矯正pHpH，塞緊瓶口保存。，塞緊瓶口保存。38血液樣本采集和血涂片制備4 4、染色方法、染色方法采血采血 在距離載玻片一端在距離載玻片一端1cm1cm處加血液處加血液1 1滴血液。滴血液。推片推片 左手拿載玻片，右手持推片，制成舌狀、左手拿載玻片，右手持推片，制成舌狀、頭、頭、 體、尾分明的血涂片。體、尾分明的血涂片。干燥干燥 在空氣中晃動，使其快速干燥，天氣寒在空氣中晃動，使其快速干

28、燥，天氣寒冷或冷或 潮濕時，可置潮濕時，可置3737溫箱中保溫促溫箱中保溫促干。干。標(biāo)記標(biāo)記 在載玻片一端做好標(biāo)記。在載玻片一端做好標(biāo)記。39血液樣本采集和血涂片制備4 4、染色方法、染色方法染色染色 將血涂片平置于染色架上，滴加將血涂片平置于染色架上，滴加夜夜3 35 5滴滴 使其迅速蓋滿血涂片，約使其迅速蓋滿血涂片，約0.50.51min1min后，滴后，滴 加等量或稍多的加等量或稍多的夜，用吸球吹氣，夜，用吸球吹氣，使染料使染料 充分混合。充分混合。沖洗沖洗 5 510min10min后用流水洗去染液，待干鏡后用流水洗去染液，待干鏡檢檢 。 40血液樣本采集和血涂片制備5 5、注意事項、

29、注意事項（1 1）血涂片干透后固定，否則細(xì)胞在染色過程中容）血涂片干透后固定，否則細(xì)胞在染色過程中容 易脫落。易脫落。（2 2）加染料應(yīng)適量，過少易蒸發(fā)形成沉淀，使細(xì)胞）加染料應(yīng)適量，過少易蒸發(fā)形成沉淀，使細(xì)胞 不易檢查。不易檢查。（3 3）不能先倒染料，以防染料沉著在血涂片上。沖）不能先倒染料，以防染料沉著在血涂片上。沖 洗時間不能過長，以防脫色。洗時間不能過長，以防脫色。（4 4）染色過淡可以復(fù)染，復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，后）染色過淡可以復(fù)染，復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，后 加染液。加染液。41血液樣本采集和血涂片制備（二）吉姆薩染色法（二）吉姆薩染色法1 1、染色原理、染色原理 吉姆薩染液由天青、伊紅組成。染色原理和吉姆薩染液由天青、伊紅組成。染色原理和結(jié)結(jié) 果與瑞氏染色基本相同果與瑞氏染色基本相同42血液樣本采集和血涂片制備2 2、試劑配制、試劑配制 吉姆薩染料吉姆薩染料1.0g1.0g、甘油、甘油66ml66ml、甲醇、甲醇66ml66ml。 將染料倒入盛有將染料倒入盛有66ml66ml甘油的圓錐燒瓶內(nèi)，在甘油的圓錐燒瓶內(nèi)，在5656 水浴鍋上加熱水浴鍋上加熱9090120min120min，使染料與甘油充分，使染料與甘油充分溶解然后加入溶解然后加入6060預(yù)熱甲醇，充分搖勻后置棕色瓶預(yù)熱甲醇，充分搖勻后置棕色瓶