第13章_紫外-可見分光

1、第第1313章章紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法Ultraviolet and Visible Spectrophotometry第第1313章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry）定義定義： 通常是指研究通常是指研究200-780nm光譜區(qū)光譜區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)分子或離子對光輻射吸域內(nèi)，物質(zhì)分子或離子對光輻射吸收的一種方法，也稱為收的一種方法，也稱為吸光光度法吸光光度法或或分光光度法。分光光度法。 利用有色溶液對可見光的吸收利用有色溶液對可見光的吸收來進行定量測定，來進行定量測定， 稱為稱為比色法比色法。

2、第第1313章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry）歷史（歷史（1）公元公元60年年 古希臘古希臘 普里尼普里尼 五倍子浸出液估測醋中五倍子浸出液估測醋中Fe十九世紀十九世紀30-40年代年代 比色是一種普遍分析方法比色是一種普遍分析方法 利用金屬離子本身顏色或無機顯色劑利用金屬離子本身顏色或無機顯色劑 MnO4- NH3 使使Cu2+ Co2+顯色顯色 方法：目視方法：目視比色法比色法 系列標樣系列標樣 Cs C2s C3s C4s C5s Cx 比較比較顏色深淺顏色深淺 第第1313章章 紫外可見分光光

3、度法紫外可見分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry）歷史（歷史（2）1852年年 Beer定律定律1868年年 布特列洛夫布特列洛夫 1870年年 杜包斯克杜包斯克 目視比色計目視比色計 浦氏光度計浦氏光度計1911年年 貝格爾貝格爾 硒光電池比色計硒光電池比色計1918年年 美國國家標準局美國國家標準局 第一臺分光光度計第一臺分光光度計20世紀世紀30-40年代年代 E.B.Sandell“痕跡金屬比色測定痕跡金屬比色測定” ” 20世紀世紀50年代年代 有機顯色劑有機顯色劑近二、三十年年 信息技術(shù)，高新技術(shù)，聯(lián)用技術(shù)信息技術(shù)，高新技術(shù)

4、，聯(lián)用技術(shù)第第1313章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry）13-1 選擇吸收及吸收光譜的獲得選擇吸收及吸收光譜的獲得 13-2 紫外可見吸收光譜的主要類型紫外可見吸收光譜的主要類型 13-3 光的吸收定律及定量分析方法光的吸收定律及定量分析方法 13-4 顯色反應(yīng)與光度測量顯色反應(yīng)與光度測量 13-5 吸光光度的其他分析技術(shù)吸光光度的其他分析技術(shù) 13-6 分光光度法在化學(xué)研究中的應(yīng)用分光光度法在化學(xué)研究中的應(yīng)用 第第1313章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（Ultraviolet and V

5、isible Spectrophotometry）選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 光的吸收定律及定量分析光的吸收定律及定量分析方面方面光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 1. 1. 選擇吸收選擇吸收宏觀現(xiàn)象宏觀現(xiàn)象 KMnO4 ( (紫紅色紫紅色) ) 吸收白光中的吸收白光中的 黃綠色黃綠色 CuSO4 ( (藍色藍色) ) 吸收白光中的吸收白光中的 黃色黃色 互補色互補色 結(jié)論結(jié)論同一種物質(zhì)對不同波長的光表現(xiàn)出不同的吸同一種物質(zhì)對不同波長的光表現(xiàn)出不同的吸收能力，稱之謂選擇吸收現(xiàn)

6、象。收能力，稱之謂選擇吸收現(xiàn)象。不同的物質(zhì)對光的選擇吸收性質(zhì)是不同的。不同的物質(zhì)對光的選擇吸收性質(zhì)是不同的。溶液的顏色并不是某一個波長，而是一個波溶液的顏色并不是某一個波長，而是一個波長帶。長帶。量子解釋（量子解釋（1）入射光的能量入射光的能量 能級間的能量差能級間的能量差 h h = hc/hc/ = E E2 2- -E E1 1 = E E 普朗克條件普朗克條件 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 1. 1. 選擇吸收選擇吸收 E E ？一個分子的總能量一個分子的總能量 E E = =E E內(nèi)能內(nèi)能+ + E E平動能平動能

7、+ + E E電電+ + E E振振+ + E E轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 固有固有 連續(xù)變化連續(xù)變化 量子化量子化 E E = = E E電電+ + E E振振+ + E E轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)量子解釋（量子解釋（2） E E = = E E電電+ + E E振振+ + E E轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)110eV 0.051eV 10-40.05eV 10 101005eV 0.1eV 0.005eV n V 250nm 5nm 0.25nm J=1 V=1 n=1 J J=1 V=1 J=1 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 1. 1. 選擇吸收選擇吸收量子解釋（量子解釋（3）物質(zhì)

8、對光呈現(xiàn)選擇吸收的原因物質(zhì)對光呈現(xiàn)選擇吸收的原因： 單一吸光物單一吸光物質(zhì)的分子或離子只有有限數(shù)量的量子化能級質(zhì)的分子或離子只有有限數(shù)量的量子化能級的緣故。的緣故。選擇吸收的性質(zhì)選擇吸收的性質(zhì)：反映了分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的差反映了分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的差異，各物質(zhì)分子能級千差萬別，內(nèi)部各能級異，各物質(zhì)分子能級千差萬別，內(nèi)部各能級間的間隔也不相同。間的間隔也不相同。(1)形成吸收帶：形成吸收帶：電子躍遷時不可避免要同時發(fā)電子躍遷時不可避免要同時發(fā)生振動能級和轉(zhuǎn)動能級的躍遷。生振動能級和轉(zhuǎn)動能級的躍遷。第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 1. 1.

9、選擇吸收選擇吸收透光度：透光度： T= I / I0 I0 I 吸光度：吸光度： A=lgT-1=lg(I0/I) 透射光譜：透射光譜： T 圖圖 吸收吸收光譜：光譜：A 圖圖 max Amax 吸收峰值波長吸收峰值波長 吸收峰值吸光度吸收峰值吸光度 吸收帶寬吸收帶寬 max （半峰寬）（半峰寬） 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) 物質(zhì)的能量特征物質(zhì)的能量特征 強度特征強度特征第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 2. 2. 吸收吸收光譜光譜 KMnO4吸收吸收光譜：光譜： A - A - 圖圖 525n m 第第13章章 紫外可見分光光度

10、法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 2. 2. 吸收吸收光譜光譜 CaryCary分光光度計分光光度計第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得 HPHP分光光度計分光光度計第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得 紫外可見分光光度計基本結(jié)構(gòu)有五部分組成紫外可見分光光度計基本結(jié)構(gòu)有五部分組成主要類型有：主要類型有：手動型手動型1 1、單波長、單光束分光光度計、單波長

11、、單光束分光光度計 I I0 0 I I I I0 0 A A光源光源 單色光器單色光器 吸收池吸收池 檢測器檢測器 顯示記錄顯示記錄鎢燈鎢燈 濾光片濾光片 光電池光電池 電表電表鹵鎢燈鹵鎢燈 單色器單色器- - 光柵光柵 光電管光電管 記錄儀記錄儀氫燈或氘燈氫燈或氘燈 棱鏡棱鏡 光電倍增管光電倍增管 計算器系統(tǒng)計算器系統(tǒng) 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得 單色器后單束平行光，參比液和樣品液輪流進入光路。單色器后單束平行光，參比液和樣品液輪流進入光路。 常用于簡易型的儀器。常用于簡易型的

12、儀器。 適合定波長的吸光度測量，進行定量分析。適合定波長的吸光度測量，進行定量分析。掃描型掃描型2 2、單波長、單波長、雙光束分光光度計雙光束分光光度計 I I0 0 I I I I0 0 A A 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得單波長、單波長、雙光束分光光度計雙光束分光光度計 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得3 3、雙雙波長、波長、 雙光束分雙光束分 光光度計光光度計 A A 第

13、第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得陣列型陣列型4 4、全全波長波長光度計光度計 多多色儀色儀 檢測器檢測器 二極管陣列二極管陣列 CCD(Charge coupled device)CCD(Charge coupled device)第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光

14、譜的獲得光譜的獲得第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 3. 3. 吸收吸收光譜的獲得光譜的獲得不同的物質(zhì)對光有不同的選擇吸收不同的物質(zhì)對光有不同的選擇吸收有何規(guī)律有何規(guī)律 max ， max 描述描述概念概念生色團生色團 助色團助色團 紅移紅移 ( (向紅向紅) ) max 藍移藍移 ( (向藍向藍) ) 濃色效應(yīng)濃色效應(yīng)( (增色效應(yīng)增色效應(yīng)) ) 淺色效應(yīng)淺色效應(yīng)( (減色效應(yīng)減色效應(yīng)) )強帶強帶 ( ( maxmax10104 4) )較強帶較強帶 (10 (104 4 maxmax 10 103 3) ) max 弱帶弱

15、帶 ( ( maxmax 10 104例如：例如： h Fe3+CNS Fe2+CNS 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 4.4. 光譜類型光譜類型 類型類型 無機物中配位體場吸收帶無機物中配位體場吸收帶 maxmax=10=10-1-1-10-102 2 弱帶弱帶 maxmax 可見光區(qū)（可見光區(qū)（少量落在紫外及近紅外光區(qū)）少量落在紫外及近紅外光區(qū)） d-d 躍遷躍遷（吸收峰較寬）（吸收峰較寬） f-f 躍遷躍遷（吸收峰較窄）（吸收峰較窄） 過渡金屬過渡金屬 鑭系和錒系元素鑭系和錒系元素 3d，4d電子電子 4 f，5 f電子

16、電子 配合物的結(jié)構(gòu)研究配合物的結(jié)構(gòu)研究 ?1 ?2 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 4.4. 光譜類型光譜類型 類型類型 無機物中配位體場吸收帶無機物中配位體場吸收帶為什么在配位場作用下才可能發(fā)生為什么在配位場作用下才可能發(fā)生d -d ，f-f 躍遷呢？躍遷呢？ 過渡元素、鑭系和錒系元素在真空下，原子、離子的過渡元素、鑭系和錒系元素在真空下，原子、離子的d軌道軌道和和f軌道是簡并的。軌道是簡并的。 在配位體場影響下，簡并能級發(fā)生分裂成不同能量組軌道。在配位體場影響下，簡并能級發(fā)生分裂成不同能量組軌道。第第13章章 紫外可見分光

17、光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 4.4. 光譜類型光譜類型 類型類型 無機物中配位體場吸收帶無機物中配位體場吸收帶為什么為什么d-dd-d躍遷的吸收峰較寬，躍遷的吸收峰較寬，f-ff-f躍遷的吸收峰躍遷的吸收峰較窄呢？較窄呢？ 外層外層d電子躍遷時容易受外界環(huán)境（溶劑、配位體）電子躍遷時容易受外界環(huán)境（溶劑、配位體）的影響的影響 f電子在內(nèi)層，受外層軌道電子的屏蔽，不易受溶電子在內(nèi)層，受外層軌道電子的屏蔽，不易受溶劑、配位體影響劑、配位體影響 Ce58 1s2 2s2 2p6 3s2 3p6 3d10 4s2 4p6 4d10 4f 2 5s2 5p6

18、 6s2 Pr59 4f 3 Nd60 4f 4 Ho67 4f 11第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-1 選擇吸收及吸收光譜選擇吸收及吸收光譜 4.4. 光譜類型光譜類型小結(jié)小結(jié) 波數(shù)波數(shù)cm-1lg 100000 50000 33000 25100000 50000 33000 25000 20000 16667 14286 12500000 20000 16667 14286 12500 6 6 遠遠UV UV Vis UV UV Vis 5 5 * 共軛共軛 電荷轉(zhuǎn)移電荷轉(zhuǎn)移 4 * n 雜環(huán)雜環(huán) * 3 n * 2 n * 共軛共軛 1 1 配位體場吸收帶配位

19、體場吸收帶 10 100 200 300 400 500 600 700 800nm吸收定律及吸收定律及影響因素影響因素BeerBeer定律定律 ( (Lambert-BeerLambert-Beer定律定律) ) A = a b c吸光度吸光度 改為改為 mol/L 時時A=lgT-1 吸光系數(shù)吸光系數(shù) 吸收光程吸收光程 濃度濃度 A = b c=lg(I0/I) (吸收池厚度吸收池厚度)無量綱無量綱 cm-1 (g/L)-1 cm g/L 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) cm-1 (mol /L)-1 A.Beer, Ann.der Physik.Chemie, (3), 26, 78(1852

20、). 133第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素 BeerBeer定律定律 入射入射 吸光質(zhì)點行為相互無關(guān)吸光質(zhì)點行為相互無關(guān)Lambert定律定律 Beer定律定律 -dIx=kxIxdx -dIc=kcIcdc -dIx/Ix=kx dx -dIc/Ic=kcIcdc積分，積分，I0Ix 0b I0 Ix 0 c ln(I0/I) = kx b ln(I0/I) = kc c

21、 A = lg(I0/I) = k1 b A = lg(I0/I) = k2c 合并合并 A = lg(I0/I) = a b c Lambert-Beer定律定律 簡稱簡稱Beer定律定律第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1.吸收定律及影響因素 BeerBeer定律定律 用量子觀點推導(dǎo)用量子觀點推導(dǎo)Beer定律定律 吸光質(zhì)點總數(shù)吸光質(zhì)點總數(shù) n I0 IX I 吸光體的總截面積吸光體的總截面積 s dx b 分子的俘獲截面分子的俘獲截面 從統(tǒng)計學(xué)的觀點看從統(tǒng)計學(xué)的觀點看 dIx dn 光的俘獲分數(shù)光的俘獲分數(shù)

22、= 俘獲光子的幾率俘獲光子的幾率 Ix s第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1.吸收定律及影響因素 BeerBeer定律定律( 用量子觀點推導(dǎo)用量子觀點推導(dǎo)Beer定律定律 )光束通過光束通過b厚度厚度 ，積分。，積分。 由由吸光度的定義：吸光度的定義： I0 n A = lg = I 2.303s ns = V / b A = 0.4343 NA b NA V dm3 Avogadro常數(shù)常數(shù) cm 吸光質(zhì)點的濃度吸光質(zhì)點的濃度c（mol dm 3） A = 0.4343 6.023 1023 10 3 b c

23、 = 2.614 1020 b c A = b c 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1.吸收定律及影響因素 BeerBeer定律定律 幾點說明幾點說明 推導(dǎo)推導(dǎo)BeerBeer定律的四點假定定律的四點假定 加和性加和性 A = b （ 1 c1 + 2 c2 + 3 c3+ + n cn） （1 1）n 種互不作用的吸光物質(zhì)種互不作用的吸光物質(zhì) （2 2）同一波長）同一波長 = 2.614 1020 = (1/3) 統(tǒng)計常數(shù)統(tǒng)計常數(shù) 分子大小截面分子大小截面 躍遷幾率躍遷幾率 10-15cm2 (0.05 0.

24、5) 可以估算得可以估算得 105 , 實際情況實際情況 在在 104103。 科學(xué)啟示科學(xué)啟示第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 物質(zhì)物質(zhì) 信號信號 A = b c 令令b=1cm A = c 能量能量 樣品溶液因素樣品溶液因素 基本限制基本限制 0.01 mol / L 濃度濃度分子或離子間距縮小分子或離子間距縮小電荷分布改變電荷分布改變吸收能力吸收能力 高濃度高濃度 n 改變改變 改變改變 溶劑影響溶劑影響 “ “非真

25、非真”吸收吸收 試劑，溶劑中的雜質(zhì)試劑，溶劑中的雜質(zhì) 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 樣品溶液因素樣品溶液因素 溶液組分間的相互作用不可避免-即平衡影響-化學(xué)誤差 ： 例一例一 CrCr2 2O O7 72-2-離子在水溶液中存在著二聚平衡離子在水溶液中存在著二聚平衡 Cr2O72-+H2O 2HCrO42- 2H+ + 2CrO42- 橙橙 黃黃 吸收綠藍吸收綠藍 光（光（450nm） 吸收藍吸收藍 光（光（375nm） A 比爾定律比爾定律 發(fā)生了正偏差發(fā)生了正偏差 0.033 0.050 0.100 c第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法

26、13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 樣品溶液因素樣品溶液因素 溶液組分間的相互作用不可避免-即平衡影響-化學(xué)誤差 例例: : FeFe3+ 3+ - - 水楊酸受水楊酸受 pH pH 影響影響pHpH 4 9 124 9 12 Fe(C Fe(C7 7H H4 4O O3 3) )+ + Fe(C Fe(C7 7H H4 4O O3 3) )2 2- - Fe(C Fe(C7 7H H4 4O O3 3) )3 33-3- Fe(OH) Fe(OH)3 3 紫色紫色 紅色紅色

27、 黃色黃色第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 儀器的單色光儀器的單色光 單色器提供的單色光單色器提供的單色光 0 0 是具有是具有一定的通帶寬度，一定的通帶寬度，( (即帶寬）即帶寬） 定量分析時取定量分析時取 為吸收峰寬為吸收峰寬 的的

28、1/81/10時，誤差可不計時，誤差可不計a.a.對對測量的測量的具體具體影響影響 0 0一定一定 A A A實實 - -A真真 = = A A為二次方為二次方影響影響 A實實A真真 ， A0不切實際不切實際 0 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 儀器的單色光儀器的單色光 A1a.a.對對測量的測量的具體具體影響影響 A2 一定一定不同不同 0， A不同不同 0101：峰峰 A1小小 A影響影響小小 02：陡坡：陡坡 A2大大 A影響影響大大 0， 一定一定 A 正比于正比于c 02 01 A 隨隨( A)2變化

29、，使變化，使A -c 曲線（向曲線（向c 彎曲）彎曲）第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影響因素第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 儀器的單色光儀器的單色光b b. .狹縫對提供單色光性能的關(guān)系狹縫對提供單色光性能的關(guān)系 I 1 0 2 1 0 2 1 0 2 入射狹縫入射狹

30、縫S S1 1出射狹縫出射狹縫S S2 2 S S1 1 =S=S2 2 S S1 1 S S2 2 單色光不純單色光不純 0 0 , ,I Imaxmax 光不純光不純 , ,I I 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 光光程問題程問題 光束傾斜光束傾斜 試樣容器的窗面試樣容器的窗面平行平行 n n n R A/A % 0.02mm 20 0.020 R 50 0.11 100 0.38 內(nèi)反射損失內(nèi)反射損失第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量

31、分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 雜散光雜散光定義定義表示法：雜散光分數(shù)表示法：雜散光分數(shù) S = Is / I0雜散光存在時的測量值雜散光存在時的測量值 1 I + Is 1+S 1+S A M =lg = lg =lg - = lg TM I0 + Is (I/I0)+S T +S幾點說明：幾點說明： 一臺高質(zhì)量的紫外可見光光度

32、計，雜散光應(yīng)很小一臺高質(zhì)量的紫外可見光光度計，雜散光應(yīng)很小 在儀器光譜感應(yīng)區(qū)的極端，雜散光引起的誤差較大在儀器光譜感應(yīng)區(qū)的極端，雜散光引起的誤差較大 高吸光度時，雜散光引起的相對誤差大高吸光度時，雜散光引起的相對誤差大第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 光度誤差光度誤差 /c A = -lgT = a b c c/c = (0.4343 T)/(T lgT) T 與與 T

33、 的關(guān)系的關(guān)系 T = k1 a.暗電流，放大器噪聲，暗電流，放大器噪聲，0%T值的不精確性值的不精確性 b.熱噪聲熱噪聲 c.有限讀出分辨率有限讀出分辨率 T= k2(TT2)1/2 d.信號的散粒噪聲信號的散粒噪聲 T = k3 T e.e.光源的閃變噪聲光源的閃變噪聲 f.f.吸收池定位的不精確性吸收池定位的不精確性 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 光度誤差光度

34、誤差 /c 低中檔儀器低中檔儀器 c(有限讀出分辨率有限讀出分辨率)為主要因素為主要因素 T = k1 = 0.005 c/c = 1.5 - 3 % 0.003 c/c = 1 2 % 在在 10-80% T 即即 0.1-1.0 A）時時，誤差小誤差小第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 1. 吸收定律及影提供響因素 影響因素影響因素吸收定律的適應(yīng)性及可靠性吸收定律的適應(yīng)性及可靠性 能量測量因素（儀器因素）能量測量因素（儀器因素） 光度誤差光度誤差 /c 高級分高級分光光度計光光度計 d. f.為主要因素為主要因

35、素 一般一般 k2 = = 0.003 0.003 誤差小誤差小 0.2 - 2.5 A k3 = = 0.003 0.003 A c/c 0 綜合綜合 k2， k3 一般一般在在 0.8 - 1.5 0.8 - 1.5 A c/c 小小 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面 定量測定的溶液體系定量測定的溶液體系 在測量條件下，僅有在測量條件下，僅有單一物質(zhì)單一物質(zhì)有吸收有吸收被測物質(zhì)本身有較大吸收，即被測物質(zhì)本身有較大吸收，即 maxmax 大大 物質(zhì)溶液體系物質(zhì)溶液體系直接直接測量測量 A A

36、被測物質(zhì)本身吸收小，無被測物質(zhì)本身吸收小，無 物質(zhì)物質(zhì)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化為有色物測量為有色物測量 A A 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 顯色劑顯色劑-無機顯色劑無機顯色劑 有機顯色劑（具有不飽和鍵基團）有機顯色劑（具有不飽和鍵基團） N=N C=O C=S NO2 N=O 影響顯色反應(yīng)因素影響顯色反應(yīng)因素 絡(luò)合物穩(wěn)定性絡(luò)合物穩(wěn)定性, , 顯色劑用量顯色劑用量, , pH , , 溫度溫度, , 時間時間, , 溶劑溶劑第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面 定量測定的溶液體系定量測定的溶液體系 在測量條件下，僅有單一物質(zhì)

37、有吸收在測量條件下，僅有單一物質(zhì)有吸收 在測量條件下，體系內(nèi)有在測量條件下，體系內(nèi)有多種物質(zhì)多種物質(zhì)有吸收有吸收 物質(zhì)分離各組分 第四篇第四篇 物質(zhì)的化學(xué)掩蔽 滴定分析中有討論滴定分析中有討論 信息分離處理 見下面見下面13-313-3內(nèi)容內(nèi)容 定量測定的定量測定的光度光度測量測量波長波長 max 單色器寬度單色器寬度 單單 (1/81/10）吸吸 A 值值 落在落在 c/c 較較小區(qū)域小區(qū)域參比液參比液 消除除測定組分外引起吸收變化的影響消除除測定組分外引起吸收變化的影響溶劑溶劑 溶解能力溶解能力, ,吸收峰吸收峰, ,穩(wěn)定性穩(wěn)定性, ,對被測吸收峰的影響對被測吸收峰的影響 A=1=1時，短

38、波長端臨界波長值（時，短波長端臨界波長值（nm） 200 210 230 245 265 280 305 330200 210 230 245 265 280 305 330 水水 甲醇甲醇 甘油甘油 氯仿氯仿 四氯化碳四氯化碳 苯苯 吡啶吡啶 丙酮丙酮 正己烷正己烷 乙醇乙醇 二氯甲烷二氯甲烷 正庚烷正庚烷 異丙醇異丙醇 環(huán)己烷環(huán)己烷第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分

39、析方面 定量校正方法定量校正方法 xi xi 編碼編碼 解碼解碼 間接法間接法 直接法直接法 用標準物校正用標準物校正 用確定的用確定的 y=f(x) 計算計算 定函數(shù)定函數(shù) y=f(x) A = a 1%1cm, max c定量基本關(guān)系式定量基本關(guān)系式 A = bc = K c 標準標準吸光系數(shù)吸光系數(shù) 待定待定 絕對法絕對法 與實驗條件有關(guān)與實驗條件有關(guān) （吸光系數(shù)法）（吸光系數(shù)法） 定量校正方法定量校正方法 單組份單組份測定測定 A = K c 外標法外標法 單個標樣單個標樣cs -直接比較法直接比較法-求求待定系數(shù)待定系數(shù)K-解析法解析法 （標準對照法）（標準對照法） cx=(Ax c

40、s)/As 系列標樣系列標樣-標準標準曲線法曲線法-求求K 的平均的平均-圖解法圖解法 （工作（工作曲線法）曲線法） 作作As cs 圖，圖，求求K 由由圖查圖查Ax 的的c cx x 值值 解析法解析法 擬合擬合線性方程，線性方程，定定K 由由方程方程解解Ax 的的cx 值值 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面 定量校正方法定量校正方法 單組份單組份測定測定 外標法外標法 注意點注意點： 標準樣標準樣cs 的確定的確定 單個標樣時單個標樣時cs 應(yīng)與應(yīng)與cx 值接近值接近 系列標樣時系列標樣時

41、cx 值應(yīng)處于系列溶液濃度中間值應(yīng)處于系列溶液濃度中間 用于簡單試樣體系用于簡單試樣體系 系列標樣比單個標樣更準確系列標樣比單個標樣更準確第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面 定量校正方法定量校正方法 單組份單組份測定測定 標準（標準（試樣試樣）加（減）入法）加（減）入法 增（減）量法增（減）量法 單個標樣加入單個標樣加入-標準加入標準加入法法 解析法解析法 （試樣）（減） cx= (Vs cs/ V）Ax / （As+ x -Ax） 系列標樣加入系列標樣加入-系列標準加入系列標準加入法法-圖解法

42、圖解法 （連續(xù)標樣加入） （連續(xù)標準加入法）作作A Vs 圖，求圖，求A=0 時時Vs 值值 由由 cx= -Vs cs/ V 計算計算 解析法解析法 擬合擬合線性方程，線性方程，由由方程方程解解A Ax x時的時的V Vs s 值值 由由 cx= Vs cs/ V 計算計算 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2 . 定量分析方面 定量校正方法定量校正方法 單組份單組份測定測定 標準標準( (試樣試樣) )加加( (減減) )入法入法 增增( (減減) )量法量法 注意點注意點： 標準樣標準樣cs 的確定的確定

43、加入標準樣加入標準樣cs cx 100，VsV/100 保持各測試溶液濃度在同一數(shù)量級，基體相似保持各測試溶液濃度在同一數(shù)量級，基體相似 用于復(fù)雜試樣體系，或試樣量少場合。用于復(fù)雜試樣體系，或試樣量少場合。 系列標樣加入比單個標樣加入更準確。系列標樣加入比單個標樣加入更準確。第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2.定量分析方面 定量校正方法定量校正方法 多組份體系多組份體系測定（信號重疊時）測定（信號重疊時） 加和性原則加和性原則 m 個波長處，建個波長處，建 m 個方程個方程 1 A1=A1a+A1b+ =K1a

44、 ca+K1b cb+ a 2 A2=A2a+A2b+ =K2a ca+K2b cb+ b m Am =Ama+Amb+ =Kma ca+Kmb cb+ 1 2 m m n m n Aj = Aji = (Kji ci) j=1,2, m 波長點數(shù)波長點數(shù) j=1 j=1 i=1 j=1 i=1 i=1,2, n 組份組份數(shù)（數(shù)（mn）第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2.定量分析方面 定量校正方法定量校正方法 多組份體系多組份體系測定測定( (信號重疊時）信號重疊時） 外標法外標法 單組單組 ( (n個組份個組

45、份) )混合標樣混合標樣 csi , , 測定測定Asj , 求求Kji （j=1,2, m ，i=1,2, n ） 測定測定Axj , 求求cxi 系列組系列組 ( (n個組份個組份) )混合標樣混合標樣 csi 組數(shù)組數(shù) 測定測定Asj 組數(shù)組數(shù), 求平均求平均Kji （j=1,2, m ，i=1,2, n ） 測定測定Axj , 求求cxi 求解方程組：求解方程組： m = n 方法方法 m n 方法方法 標準加入法標準加入法? ?第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-2 光的吸收定律及定量分析方面光的吸收定律及定量分析方面 2. 定量分析方面1.1. 定量分析中的兩

46、個重要摡念定量分析中的兩個重要摡念 靈敏度靈敏度 一般定義一般定義 S=dY/dX 吸吸光度法中光度法中 S=dA/dc 或或 S= A/ c 當(dāng)當(dāng) b=1 時，時， S = 桑德爾（桑德爾（SandellSandell）靈敏度靈敏度S 定義定義 一定波長，一定帶寬，光程一定波長，一定帶寬，光程1cm時，時， 測得吸光度為測得吸光度為0.001， 每毫升溶液所含吸光物質(zhì)的微克數(shù)，單位每毫升溶液所含吸光物質(zhì)的微克數(shù)，單位 g cm-2。 = F/S第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用 注意點注意點1 同一同一 值，不同元素，因

47、其值，不同元素，因其 F 值不同，值不同，S 不同。不同。2 經(jīng)顯色反應(yīng)，組份變?yōu)槲馕镔|(zhì)，使用經(jīng)顯色反應(yīng)，組份變?yōu)槲馕镔|(zhì)，使用S 時并不要求時并不要求知道吸光物質(zhì)組成。知道吸光物質(zhì)組成。3 一般元素一般元素 S 值為值為 0.001 0.01 g cm-2。4 最小檢測濃度最小檢測濃度 cmin= S / b = F / b ( g cm-3) 例：例：Fe2+-鄰二氮菲鄰二氮菲 F：55.85 : 1.1104 b:1 cm cmin= 0.0050 g cm-3 =110-7 mol/L5 使用靈敏度摡念時，要區(qū)分光度使用靈敏度摡念時，要區(qū)分光度(顯色顯色)反應(yīng)靈敏度和反應(yīng)靈敏度和分析

48、方法靈敏度，光度反應(yīng)靈敏度是分析方法靈敏分析方法靈敏度，光度反應(yīng)靈敏度是分析方法靈敏度的核心。度的核心。第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用1.1. 定量分析中的兩個重要摡念定量分析中的兩個重要摡念 靈敏度靈敏度 提高靈敏度的基本途徑提高靈敏度的基本途徑 試樣試樣 改善分子的光度特性改善分子的光度特性 更靈敏的顯色試劑更靈敏的顯色試劑 多元配合物或表面活性劑多元配合物或表面活性劑 利用化學(xué)反應(yīng)利用化學(xué)反應(yīng) 放大反應(yīng)，轉(zhuǎn)換為放大反應(yīng)，轉(zhuǎn)換為 大的物質(zhì)大的物質(zhì) 利用動態(tài)的化學(xué)動力學(xué)方法利用動態(tài)的化學(xué)動力學(xué)方法 儀器儀器 改進測量

49、技術(shù)改進測量技術(shù) 下降最小下降最小A 值值，下降散射光下降散射光 提高單色性，利用吸收窄峰提高單色性，利用吸收窄峰 加長吸光光程加長吸光光程第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用1.1. 定量分析中的兩個重要摡念定量分析中的兩個重要摡念 靈敏度靈敏度 選擇性（干擾問題）選擇性（干擾問題） 選擇性試劑選擇性試劑 特效試劑特效試劑 分離是消除干擾分離是消除干擾 提高分光光度法選擇性的途徑提高分光光度法選擇性的途徑 試樣試樣(1)(1)尋求高選擇性的試劑，引入分析功能尋求高選擇性的試劑，引入分析功能團團 (2) (2)用化學(xué)方法改進

50、溶液體系，掩蔽法用化學(xué)方法改進溶液體系，掩蔽法 儀器儀器(3)(3)采用新的測量技術(shù)，包括信息處理技術(shù)采用新的測量技術(shù)，包括信息處理技術(shù)第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用1.1. 定量分析中的兩個重要摡念定量分析中的兩個重要摡念 用于高濃度方向，用于高濃度方向，提高光度法提高光度法測量精密度（準確度）測量精密度（準確度） 光度滴定光度滴定法法光度滴定法的定量關(guān)系是建立在化學(xué)反應(yīng)計量關(guān)系上光度滴定法的定量關(guān)系是建立在化學(xué)反應(yīng)計量關(guān)系上 滴定過程中吸光度變化來指示滴定終點滴定過程中吸光度變化來指示滴定終點自學(xué)要點：自學(xué)要點：

51、（1）與一般的滴定分析法（目視定終點）比較）與一般的滴定分析法（目視定終點）比較 （2）與常規(guī)光度法比較）與常規(guī)光度法比較 （3）直接光度滴定法的滴定曲線形狀）直接光度滴定法的滴定曲線形狀 （4）間接光度滴定的滴定終點條件）間接光度滴定的滴定終點條件第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用2.2.光度滴定光度滴定法法及及示差分光光度法示差分光光度法 示差分光光度法示差分光光度法 提高測量精密度，測高含量提高測量精密度，測高含量 通過降低讀數(shù)誤差通過降低讀數(shù)誤差 辦法是擴展標尺，充分利用儀器的靈敏度辦法是擴展標尺，充分利用儀器的靈

52、敏度 測量上的差異測量上的差異 方法方法 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)Td=0% 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)Ts=100% 表觀吸光度表觀吸光度 Af G G 普通法普通法 關(guān)光閘關(guān)光閘 溶劑溶劑 Af=A= b cx A A 高高吸光度法吸光度法 關(guān)光閘關(guān)光閘 標準液標準液cs(cx) Af= b(cx cs) B B 低低吸光度法吸光度法 標準液標準液cd (cx) 溶劑溶劑 Afcx 非線性非線性 c 最精密法最精密法 標準液標準液cd (cx) 標準液標準液cs(cx) Afc 非線性非線性第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用2.2.光度滴定光度滴定法法

53、及及示差分光光度法示差分光光度法 示差分光光度法示差分光光度法 標尺擴展示意標尺擴展示意 A A C C B B 4%4%10% 40%10% 40%48%48% 60% 90% 60% 90%96%96%0%0%c cx xc cs s c cd d c cx x c cs s c cd d c cx x100%100% 光閘光閘 溶劑溶劑 T TG G普通法普通法 0% 0% 10 20 3010 20 30 48%48% 70 80 9070 80 90 100% 100% 40% 40% 60%60%第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光

54、度分析的拓展及其應(yīng)用2.2.光度滴定光度滴定法法及及示差分光光度法示差分光光度法 示差分光光度法示差分光光度法 表達式表達式 A A 高吸光度法高吸光度法 (Td=0)lgTf=Af= b(cx-cs) C C 最精密法最精密法 -lg(TfTs-TfTd+Td)= bcx B B 低吸光度法低吸光度法( (Ts=1) -lg(Tf-TfTd+Td)= bcx 表現(xiàn)透光度表現(xiàn)透光度普通法時標準液普通法時標準液 cs 的透光度的透光度 普通法時標準液普通法時標準液 cd 的透光度的透光度第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用2.

55、2.光度滴定光度滴定法法及及示差分光光度法示差分光光度法 示差分光光度法示差分光光度法示差法光度誤差示差法光度誤差 以使用較多的高吸光度法為例，導(dǎo)出其以使用較多的高吸光度法為例，導(dǎo)出其光度誤差公式光度誤差公式 cx 0.4343 Tf _ =_ cx Tf lg（Tf Ts ) （同一儀器中同一儀器中 Tf = T）思考思考：第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用2.2.光度滴定光度滴定法法及及示差分光光度法示差分光光度法 問題問題1:1: 繪制繪制（ cx/cx ）Tf 曲線（曲線（G.A.B.CG.A.B.C 四種方法）四

56、種方法） 已知：已知： T=0.005 , , A: Ts = 10 % B: Td = 90 % C: Ts = 55 % , Ts = 45 %問題問題2:2:如何證明如何證明 ( cx/cx )G ( cx/cx )示差示差 用數(shù)學(xué)方法，分離混合信號（信息分離）用數(shù)學(xué)方法，分離混合信號（信息分離） 多組份體系的光度分析的一般方多組份體系的光度分析的一般方法法 信號重疊 加和性原則 聯(lián)立方程求解 經(jīng)典方法經(jīng)典方法 m=n 現(xiàn)代方法現(xiàn)代方法 mn參考：參考： (1) (1) 胡鑫堯、孫揚名、王心樞，計算機在分析化學(xué)中的應(yīng)胡鑫堯、孫揚名、王心樞，計算機在分析化學(xué)中的應(yīng)用，北京，清華大學(xué)出版社，

57、用，北京，清華大學(xué)出版社，19821982 (2) (2) 李克安、童沈陽，分析化學(xué)中的數(shù)值方法李克安、童沈陽，分析化學(xué)中的數(shù)值方法計算機計算機在分析化學(xué)中的應(yīng)用，北京，北京大學(xué)出版社，在分析化學(xué)中的應(yīng)用，北京，北京大學(xué)出版社，1990 1990 第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用3. 3. 雙波長雙波長分光光度法分光光度法及導(dǎo)數(shù)及導(dǎo)數(shù)光度法光度法 雙波長雙波長分光光度法分光光度法（19521952年提出，年提出，70-8070-80年代大發(fā)展）年代大發(fā)展） 等吸收點雙波長方法等吸收點雙波長方法 A A 1 1組份組份1

58、1 A A1 1 A A1 1=A=A1 1 1 1- -A A1 1 2 2 = =（ 1 1 1 1- - 1 1 2 2）bcbc1 1 A A2 2= =0 0 2 2組份組份2 2 令令 A A2 2=A=A2 2 1 1- -A A2 2 2 2 = =（ 2 2 1 1- - 2 2 2 2）bcbc2 2 = 0= 0 組份組份1 1 , ,2 2混合混合 1 1 2 2 A A = A = A 1 1 - - A A 2 2 = = ( (A A1 1 1 1 + + A A2 2 1 1) )- -( (A A1 1 2 2 + + A A2 2 2 2) ) = (A =

59、 (A1 1 1 1 - - A A1 1 2 2)+()+(A A2 2 1 1 - - A A2 2 2 2) ) 組份組份 2 2 作為干擾被消除作為干擾被消除 = = A A1 1 + + A A2 2 = = 0 0 = kc= kc 定量分析基本關(guān)系式定量分析基本關(guān)系式第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用3. 3. 雙波長雙波長分光光度法分光光度法及導(dǎo)數(shù)及導(dǎo)數(shù)光度法光度法 雙波長雙波長分光光度法分光光度法 等吸收點雙波長方法等吸收點雙波長方法 本本方法關(guān)鍵：如何選擇波長對方法關(guān)鍵：如何選擇波長對 1 1， 2 2

60、 。原則是：原則是：干擾組份干擾組份 A2=0 組份組份 A1 足夠大足夠大 避開避開 dA/d 大處大處 1 ， 2 盡可能接近盡可能接近第第13章章 紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法 13-3 光度分析的拓展及其應(yīng)用光度分析的拓展及其應(yīng)用3. 3. 雙波長雙波長分光光度法分光光度法及導(dǎo)數(shù)及導(dǎo)數(shù)光度法光度法 提問提問1 1：如果要測組份如果要測組份2 2含量，應(yīng)如何含量，應(yīng)如何選擇波長對選擇波長對 1 1， 2 2？提問提問2 2：如果在干擾組份如果在干擾組份2 2的吸收光譜上找不到的吸收光譜上找不到等吸收點，等吸收點，怎么對怎么對組份組份1 1定量定量？第第13章章 紫外可見分光光度法