紫外分光光度法檢測荷葉中荷葉生物堿

1、12 為了較準(zhǔn)確的檢測荷葉中荷葉生物堿含量為了較準(zhǔn)確的檢測荷葉中荷葉生物堿含量, ,采用了采用了紫外分光光度法，以荷葉堿為對照，溴甲酚綠為紫外分光光度法，以荷葉堿為對照，溴甲酚綠為顯色劑，在荷葉生物堿最大吸收波長顯色劑，在荷葉生物堿最大吸收波長415nm處進處進行測定。可得線性回歸方程為行測定?？傻镁€性回歸方程為y=14.12x-0.013，R=0.9998（n=5），說明了荷葉生物堿在，說明了荷葉生物堿在0.020.020.10mg/mL 0.10mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率達(dá)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率達(dá)98.31%，RSDRSD為為2.10 %，回收率為，回收率為98.3

2、1%，RSD%為為2.10%。此實驗表明紫外分光光度法操。此實驗表明紫外分光光度法操作簡便、靈敏度高。作簡便、靈敏度高。3 1 1 緒論緒論 2 2 材料與儀器材料與儀器 3 3 方法方法 4 4 結(jié)果與分析結(jié)果與分析 5 5 結(jié)論結(jié)論4 荷葉荷葉：荷葉為睡蓮科植物蓮的干燥葉，具有清暑化濕、升發(fā)清陽、減肥降脂、升發(fā)清陽、涼血止血之功效，主要用于暑熱煩渴、暑濕泄瀉、脾虛泄瀉、血熱吐衄、便血崩漏等癥狀。因此，測定總生物堿的含量對于控制其質(zhì)量、確保療效有重要意義。 荷葉生物堿荷葉生物堿：多屬于阿撲啡類生物堿，此類化合物具有顯著的降脂減肥、抗病毒、抑菌、抗驚厥等藥理作用。 紫外分光光度法紫外分光光度法

3、:由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。5 材料材料：1.標(biāo)準(zhǔn)品，荷葉堿、含0.85%生物堿的干荷葉、干荷葉； 2.供試品，氯仿、溴甲酚綠、鄰苯二甲酸氫鉀； 主要儀器與設(shè)備：主要儀器與設(shè)備：紫外分光光度計、電子天平、數(shù)顯恒溫水浴鍋、粉碎機； 6 3.1 溶液配制溶液配制：（1）溴甲酚綠溶液，稱取溴甲酚綠0.10g，加入7.2ml的0.02mol/LNaOH溶液溶解，蒸餾水定容至250mL；（

4、2）0.02mol/l NaOH，稱取0.08gNaOH于100ml的容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度；（3）鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液，將鄰苯二甲酸氫鉀粉末倒入250mL容量瓶中，用少量蒸餾水沖塑料袋內(nèi)壁并稀釋至刻度；（4）80%乙醇，稱取80ml食品學(xué)院提供的無水乙醇再加20ml的水；（5）0.42mg/ml荷葉標(biāo)準(zhǔn)品溶液，電子天平稱取4.2mg荷葉標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，加水至刻度線定溶。7 荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長 稱取4.2mg荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用氯仿溶解定容，以氯仿為空白，用紫外分光光度計在19080

5、0nm 下掃描，測得荷葉堿的紫外最大吸收波長。荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品染色后的最大吸收波長。精密稱取4.2mg荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用氯仿定容，混勻，吸取1mL于10mL分液漏斗中，加入鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液1mL，溴甲酚綠溶液1mL，振蕩，加入5mL氯仿，振蕩30s，靜置30min。取下層氯仿液4mL，以標(biāo)準(zhǔn)品空白為對照，在紫外分光光度計的190800nm下掃描，測得荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長。8 樣品荷葉生物堿經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長樣品荷葉生物堿經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長 樣品經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長。稱取荷葉2.0g，加入濃度為80%的乙醇80mL，于80

6、的恒溫水浴加熱。趁熱過濾，用80%乙醇定容至80mL，即為樣品液。吸取1mL樣品液于10mL分液漏斗中，揮去乙醇，加入鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液1mL，溴甲酚綠溶液1mL，振蕩，加入5mL氯仿，振蕩30s，靜置30min。取下層氯仿液4mL，以未加樣品液的乙醇試劑空白為對照，在紫外分光光度計的190800nm下掃描，測出樣品液經(jīng)溴甲酚綠染色后的最大吸收波長。9 3. 3 荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mL于5mL容量瓶中，氯仿定容，以試驗得出的最佳含量測定條件操作，以試劑氯仿空白為參比液，在最大吸收波長處測定吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3

7、. 4 重現(xiàn)性實驗 按制備荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，取2mL濃度為0.02mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液5份，在415nm下測定吸光度值。10 稱取已知生物堿含量0.85%的同批荷葉2.0g，共5份，分別精密加入荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為0.42mg/mL各1mL，分別加入濃度為80%乙醇80mL，在80下的恒溫浴冷凝回流提取。趁熱過濾，用80%乙醇定容至80mL，即為樣品液。吸取1mL樣品液按最佳含量測定條件操作，計算生物堿含量，分析加樣回收率。114.1 荷葉生物堿最大吸收波長的確定 荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品用紫外分光光度計在190800nm下掃描后在245325nm處出現(xiàn)了波峰，經(jīng)測量得知荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品的紫外最大吸收

8、波長為273nm。12溴甲酚綠染色后的荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品在415nm處有最大吸收波長。13 經(jīng)測量得知溴甲酚綠染色后的樣品在415nm處有最大吸收波長，故本實驗以415nm為含量測定最大波長。14不同濃度的荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液在415nm處的吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4所示 在最大吸收波長415nm處測定吸光度及其濃度對照圖可得標(biāo)準(zhǔn)曲線圖方程為y=14.12x-0.013,R=0.9998（n=5），表明荷葉堿在0.020.10mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。15 采用UV法測定5份0.02mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液荷葉堿含量，在415nm下測定吸光度值相近，平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均較小，實驗結(jié)果重現(xiàn)性好，采集到的數(shù)據(jù)較準(zhǔn)確。16 采用UV法測定收集液中的荷葉生物堿含量的加樣回收率較高，為98.31%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.10%，較??；應(yīng)此該方法準(zhǔn)確度較高17 以荷葉堿為標(biāo)準(zhǔn)品，采用UV檢測法檢測荷葉堿波長為273nm，確定了經(jīng)溴甲酚綠染色后荷葉生物堿的波長為415nm，通過分析，確定了簡單易行的紫外分光光度法對其荷葉生物堿進行測定，建立了荷葉生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=14.12x-0.013,R=0.9998（n=5），平均