ABO血型鑒定的方法步驟與注意事項(xiàng)

1、一一. .原理原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú) A抗原或 B 抗原，將血型分為 A型、B型、AB型及()型 4 種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒 定 ABO血型。所謂正定型，是用已知抗一 A和抗一 B 分型血清來(lái)測(cè)定 紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的 A抗原或 B 抗原；所謂反定型，是用已知 A細(xì)胞 和 B 細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗一 A或抗一 B。二. 試劑和材料試劑和材料1. 抗一 A(B 型血)、抗一 B(A型血)及抗一 A十 B(0型血)分型血清(制備方法見本節(jié)附注)2. 5%A、B 及()型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注；3. 受檢者血清；4. 受檢者 5%紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法

2、見本節(jié)附注。三. 方法方法1.試管法(1) 取潔凈小試管 3 支，分別標(biāo)明抗一 A、抗一 B和抗一 A十 B,用 滴管分別加抗一 A、抗一 B 和抗一 A十 Bo分型血清各 1 滴于試管底部, 再以滴管分別加入受檢者 5%紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴，混和。(2) 另取潔凈小試管 3支，分別標(biāo)明 A、B 和 0 細(xì)胞。用滴管分別加 入受檢者血清 1滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B和 0型 5%試劑紅細(xì)胞懸液 1滴，混和。(3) 立即以 lOOOr / min 離心 lmino(4) 將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上

3、，再 以低倍鏡檢查。(5)觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 A、B亞型、類 B或 cisAB的發(fā)現(xiàn)。(6)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1+肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞+-鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞MF混合凝集外觀(mixedfield)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝 集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。2.玻片法(1) 取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗 -A、

4、抗-B和抗-A 十 B,分別用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A十 B 分型 血清 1 滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2%紅細(xì)胞懸液 1 滴，混和。(2)另取潔凈玻片一張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明 A 細(xì)胞、B細(xì)胞和()細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管 滴加 A、B和0 型試劑紅細(xì)胞懸液 1 滴。(3)將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連 續(xù)約15min,以肉眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)反應(yīng)。如以玻片作試驗(yàn)時(shí), 也可用低倍鏡觀察結(jié)果。四四. .結(jié)果判定結(jié)果判定ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血清+試劑紅細(xì)胞受檢者血型抗-A抗-B

5、抗-ABA細(xì)胞B 細(xì)胞()細(xì)胞+A+B+0+AB注；“十”為凝集；“-為不凝集。五五附注及注意事項(xiàng)附注及注意事項(xiàng)1.分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì) 菌污染。2試劑紅細(xì)胞以 3 個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4. 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液， 以便容易核實(shí)是否漏加血清。5.按理 IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4C 為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾， 一般仍在室溫 （20-24C） 內(nèi)進(jìn)行試 驗(yàn)， 37可使反應(yīng)減弱。6. 離心時(shí)間

6、不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，速度不宜過(guò)快或過(guò)慢，以防假陽(yáng)性 或假陰性結(jié)果。7. 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排 列的區(qū)別。8. 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。正反定型結(jié)果不一 致的原因六六. .常見有技術(shù)性問(wèn)題或紅細(xì)胞和血清本身的問(wèn)題常見有技術(shù)性問(wèn)題或紅細(xì)胞和血清本身的問(wèn)題1. 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗一 A血清效價(jià)不髙,可 將 A亞型誤定為 0型，AB 型誤定為 B型。2. 紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯, 誤判為陰性反應(yīng)。3. 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血 病或惡性腫瘤：以及類 B或 cisAB 等。4.

7、受檢者血清中蛋白紊亂（髙球蛋白血癥），或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過(guò)高， 常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。5. 受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A及或抗一 B 抗體， 如丙種球蛋白 缺乏癥。6. 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可 溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.7.由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原因。8. 血清中有意外抗體，如自身抗-1,常引起干擾。9. 老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決 辦法如發(fā)現(xiàn) ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn) 1 次。嚴(yán)格執(zhí) 行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就 可解決明顯的問(wèn)題，對(duì)一些疑難問(wèn)題

8、月必須進(jìn)一步研究。檢查步驟1.另從受檢者采取 1份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò) 樣本造成的不符合。2將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成 5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗一 A、抗一 B、抗一A1,抗一 A十 B 及抗 H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。3. 對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì) 胞已被抗體致敏。4. 用 A1、Az、B、0紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑 是抗一 I,用 0 型（或 ABO相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。5. 如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和 4 工 放置30n）in,用顯微鏡檢查核實(shí)。6. 如疑為 A抗原或 B 抗原減弱， 則可將受檢紅細(xì)

9、胞與抗一 A或抗 -B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。 后者只對(duì)80%HAB分泌型的人有用。7. 如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水 1 滴，混和，往 往可使絹錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 1滴于受檢者血清中而后 和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。8. 如受檢者為 A型血而疑為有類 B 抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒 別：(1) 觀察細(xì)胞與抗一 A及抗一 B 的凝集強(qiáng)度，與抗一 A的反應(yīng)要比與 抗一 B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。(2) 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗一 B 不凝集自 身紅細(xì)胞上的類 B抗原。(3) 檢查唾液中是否有 A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A物質(zhì)而 無(wú) B物質(zhì)。(4) 核對(duì)患者的診斷，類 B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰 性桿菌感染有關(guān)。9. 如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，