人體瘧原蟲鏡檢ppt課件

1、人體瘧原蟲鏡檢技術(shù) 一、一、 概述概述 二、瘧原蟲生活史二、瘧原蟲生活史 三、人體瘧原蟲形態(tài)特征三、人體瘧原蟲形態(tài)特征 四、血片制作與染色四、血片制作與染色一、概述 瘧疾是由按蚊叮咬傳播瘧原蟲引起寄生蟲病。瘧疾是由按蚊叮咬傳播瘧原蟲引起寄生蟲病。瘧原蟲是單細胞真核生物，屬原生動物門、孢子瘧原蟲是單細胞真核生物，屬原生動物門、孢子綱、真球蟲目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。自然界瘧綱、真球蟲目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。自然界瘧原蟲有原蟲有149149種，能感染人體的瘧原蟲只有四種：即種，能感染人體的瘧原蟲只有四種：即間日瘧（間日瘧（pvpv）、惡性瘧（）、惡性瘧（pfpf）、三日瘧（）、三日瘧（pmpm）、）

2、、卵形瘧（卵形瘧（popo）四種。）四種。 在我國間日瘧最常見，分布最廣，發(fā)病最多；在我國間日瘧最常見，分布最廣，發(fā)病最多；惡性瘧次之，但對人體危害嚴重，常引起腦型瘧惡性瘧次之，但對人體危害嚴重，常引起腦型瘧等兇險發(fā)作。三日瘧偶爾發(fā)現(xiàn)，卵形瘧已無病例等兇險發(fā)作。三日瘧偶爾發(fā)現(xiàn)，卵形瘧已無病例報告。報告。二、瘧原蟲的生活史二、瘧原蟲的生活史 瘧原蟲的發(fā)育和繁殖，必須通過脊椎動物瘧原蟲的發(fā)育和繁殖，必須通過脊椎動物與昆蟲媒介兩個宿主，人體瘧原蟲的宿主與昆蟲媒介兩個宿主，人體瘧原蟲的宿主是人（中間宿主）和按蚊（終宿主）。是人（中間宿主）和按蚊（終宿主）。1 1、紅細胞外期、紅細胞外期2 2、紅細胞內(nèi)

3、期、紅細胞內(nèi)期3 3、子孢子增殖期、子孢子增殖期瘧原蟲生活史瘧原蟲生活史紅細胞外期紅細胞外期紅細胞內(nèi)期紅細胞內(nèi)期蚊體內(nèi)發(fā)育蚊體內(nèi)發(fā)育人體內(nèi)發(fā)育人體內(nèi)發(fā)育配子生殖孢子增殖1 紅細胞外期n按蚊刺吸人血時，子孢子隨唾液進入人體，約按蚊刺吸人血時，子孢子隨唾液進入人體，約3030分鐘隨血流侵入肝細胞。分鐘隨血流侵入肝細胞。n在肝細胞內(nèi)，子孢子在肝細胞內(nèi)，子孢子滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體裂體增殖裂體增殖紅外紅外期裂殖體期裂殖體裂殖子（約裂殖子（約1200012000個）個） 肝細胞破裂肝細胞破裂裂殖子散出裂殖子散出血竇，一部分裂殖子被吞噬細胞血竇，一部分裂殖子被吞噬細胞吞噬，一部分則侵入紅細胞內(nèi)發(fā)育。吞噬，一部分則侵

4、入紅細胞內(nèi)發(fā)育。n目前認為間日瘧原蟲和卵形瘧原蟲的子孢子有：目前認為間日瘧原蟲和卵形瘧原蟲的子孢子有：速發(fā)型和遲發(fā)型。速發(fā)型和遲發(fā)型。2 紅細胞內(nèi)期 由肝細胞釋放出的紅細胞外期裂殖子侵入紅細胞由肝細胞釋放出的紅細胞外期裂殖子侵入紅細胞內(nèi)進行裂體增殖，稱為紅細胞內(nèi)期（紅內(nèi)期）。內(nèi)進行裂體增殖，稱為紅細胞內(nèi)期（紅內(nèi)期）。包括滋養(yǎng)體和裂殖體兩個階段。包括滋養(yǎng)體和裂殖體兩個階段。 基本過程：環(huán)狀體基本過程：環(huán)狀體 大滋養(yǎng)體大滋養(yǎng)體 未成熟裂殖體未成熟裂殖體 成熟裂殖體成熟裂殖體 裂殖子裂殖子健康紅細胞健康紅細胞 ，重復(fù)上，重復(fù)上述過程幾次，部分裂殖子在紅細胞內(nèi)不再進行裂述過程幾次，部分裂殖子在紅細胞內(nèi)

5、不再進行裂體增殖，而發(fā)育為配子體體增殖，而發(fā)育為配子體 。 紅內(nèi)期增殖周期：間日瘧和卵形瘧為紅內(nèi)期增殖周期：間日瘧和卵形瘧為48h/48h/代；三代；三日瘧日瘧72h/72h/代；惡性瘧代；惡性瘧36-48h/36-48h/代代 。3 子孢子增殖期 雌按蚊刺吸瘧疾患者血液，瘧原蟲隨血入雌按蚊刺吸瘧疾患者血液，瘧原蟲隨血入蚊胃，僅雌雄配子體存活并繼續(xù)進行配子蚊胃，僅雌雄配子體存活并繼續(xù)進行配子生殖，而其它各期瘧原蟲均被消化。生殖，而其它各期瘧原蟲均被消化。 雄配子體形成雄配子或稱小配子。雄配子體形成雄配子或稱小配子。 雌配子體逸出紅細胞外，發(fā)育為不活動的雌配子體逸出紅細胞外，發(fā)育為不活動的圓形或

6、橢圓形的雌配子或稱大配子。圓形或橢圓形的雌配子或稱大配子。3.13.1雄配子形成 雄雄配子體幾分鐘內(nèi)核分裂為配子體幾分鐘內(nèi)核分裂為4-8塊，胞質(zhì)亦塊，胞質(zhì)亦向外伸出向外伸出4-8條細絲，核分別進入細絲內(nèi)，條細絲，核分別進入細絲內(nèi)，稱稱出絲現(xiàn)象出絲現(xiàn)象，即，即雄雄配子形成配子形成 細絲脫離母體，在蚊胃腔中游動，即細絲脫離母體，在蚊胃腔中游動，即雄雄配配子或小配子子或小配子3.23.2動合子和卵囊的形成 雌雄雌雄配子受精，形成圓球形的合子。配子受精，形成圓球形的合子。 合子數(shù)小時后變?yōu)殚L形的香蕉狀的能活合子數(shù)小時后變?yōu)殚L形的香蕉狀的能活動的動合子。動的動合子。 動合子穿過蚊胃壁的上皮細胞，停留在胃

7、壁的上皮細胞和外層彈性纖維膜之間，蟲體變圓并分泌囊壁形成球形的卵囊，卵囊，卵囊也稱囊合子卵囊也稱囊合子。3.3 孢子增殖 卵囊逐漸長大并向蚊胃壁外突出卵囊逐漸長大并向蚊胃壁外突出 囊內(nèi)的核和胞質(zhì)反復(fù)分裂進行孢子增殖，囊內(nèi)的核和胞質(zhì)反復(fù)分裂進行孢子增殖，生成成千上萬的子孢子生成成千上萬的子孢子 子孢子呈梭形，子孢子呈梭形，1015m1m 主動從卵囊壁鉆出或因卵囊破裂后散出，主動從卵囊壁鉆出或因卵囊破裂后散出，隨血淋巴流入蚊體組織。隨血淋巴流入蚊體組織。 只有到蚊唾腺內(nèi)的子孢子才具有傳染性。只有到蚊唾腺內(nèi)的子孢子才具有傳染性。子孢子3.4 雌性按蚊-終宿主-蟲媒n蚊唾液腺內(nèi)含有瘧原蟲子孢子蚊唾液腺

8、內(nèi)含有瘧原蟲子孢子n當(dāng)雌蚊刺吸人血時，可隨唾液進入人體當(dāng)雌蚊刺吸人血時，可隨唾液進入人體n雌性按蚊飽餐人血雌性按蚊飽餐人血三、人體瘧原蟲形態(tài)特征 在紅細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)瘧原蟲是確診瘧疾和鑒別蟲種在紅細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)瘧原蟲是確診瘧疾和鑒別蟲種的重要依據(jù)的重要依據(jù) 瘧原蟲基本構(gòu)造相同瘧原蟲基本構(gòu)造相同- -細胞膜、質(zhì)、核細胞膜、質(zhì)、核 瑞氏瑞氏wrightwright或姬氏或姬氏giemsagiemsa染色：核染成紫紅色，染色：核染成紫紅色，胞質(zhì)呈蘭色，瘧原蟲消化血紅蛋白產(chǎn)物胞質(zhì)呈蘭色，瘧原蟲消化血紅蛋白產(chǎn)物- -瘧色瘧色素呈棕黃色素呈棕黃色 瘧原蟲在紅細胞內(nèi)各期形態(tài)各不相同瘧原蟲在紅細胞內(nèi)各期形態(tài)各不相同 三

9、期六種形態(tài)三期六種形態(tài) 滋養(yǎng)體期：大、小滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體期：大、小滋養(yǎng)體 裂殖體期：成熟、未成熟裂殖體裂殖體期：成熟、未成熟裂殖體 配子體期：雌、雄配子體配子體期：雌、雄配子體1、薄血膜瘧原蟲形態(tài)特征（1）間日瘧：環(huán)狀體、滋養(yǎng)體、裂殖體、配子體（2）惡性瘧：環(huán)狀體、配子體小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧約為紅細胞直徑的約為紅細胞直徑的1/3,1/3,環(huán)較粗大；核環(huán)較粗大；核1 1個，個，2 2個個核和一個紅細胞寄生核和一個紅細胞寄生2 2個環(huán)狀體不如惡性瘧原個環(huán)狀體不如惡性瘧原蟲多見蟲多見。約為紅細胞的約為紅細胞的1/61/6；環(huán)；環(huán)纖細，核纖細，核1 12 2個，一個個，一個紅細胞寄生

10、紅細胞寄生2 2個環(huán)狀體個環(huán)狀體的常見的常見。薄血膜間日瘧環(huán)狀體 2.1 2.1 未成熟裂殖體未成熟裂殖體 （immature immature schizontschizont）薄血膜間日瘧環(huán)狀體惡性瘧薄血膜環(huán)狀體薄血膜惡性瘧環(huán)狀體薄血膜惡性瘧環(huán)狀體大滋養(yǎng)體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧蟲體不規(guī)則，較大；蟲體不規(guī)則，較大；阿米巴樣，空泡明顯；阿米巴樣，空泡明顯；瘧色素細小，黃褐色。瘧色素細小，黃褐色。較小，圓形；空泡?。惠^小，圓形；空泡?。辉缙诏懮丶毿?，金早期瘧色素細小，金黃色，晚期結(jié)成塊狀，黃色，晚期結(jié)成塊狀，黃褐色黃褐色。薄血膜間日瘧滋養(yǎng)體薄血膜間日瘧滋養(yǎng)體未成熟裂殖體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性

11、瘧圓形或不規(guī)則，核分圓形或不規(guī)則，核分裂為裂為2 2個以上，空泡個以上，空泡消失；瘧色素分布不消失；瘧色素分布不勻。勻。圓形，核分裂為圓形，核分裂為2 2個個以上；瘧色素集成團以上；瘧色素集成團塊塊。薄血膜間日瘧未成熟裂殖體成熟裂殖體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞；裂大于正常紅細胞；裂殖子殖子12122424個，通常個，通常1616個，排列不規(guī)則，個，排列不規(guī)則，瘧色素常集于一側(cè)，瘧色素常集于一側(cè)，黃褐色。黃褐色。小于正常紅細胞；裂小于正常紅細胞；裂殖子較小，殖子較小，8 82626個，個，通常通常8 81818個，排列個，排列不規(guī)則，瘧色素成團不規(guī)則，瘧色素成團塊狀，黑褐色。塊狀，黑

12、褐色。薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體雌配子體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞，圓大于正常紅細胞，圓形；核小，致密，深形；核小，致密，深紅色，偏于一側(cè)，胞紅色，偏于一側(cè)，胞漿深藍色；瘧色素散漿深藍色；瘧色素散在。在。新月形，兩端較尖；新月形，兩端較尖；核小，致密，深紅色，核小，致密，深紅色，位于中央；胞漿深藍位于中央；胞漿深藍色；瘧色素圍于核周。色；瘧色素圍于核周。雄配子體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞，圓大于正常紅細胞，圓形；核大，疏松，淺形；核大，疏松，淺紅色，多位于中央；紅色，多位于中央；胞漿淺藍色或淡紅色；胞漿淺藍色或淡紅色；瘧色素散在。

13、瘧色素散在。臘腸形，兩端鈍圓，臘腸形，兩端鈍圓，核大，疏松，淡紅色，核大，疏松，淡紅色，位于中央；胞漿淺藍位于中央；胞漿淺藍色或淺紅色；瘧色素色或淺紅色；瘧色素位于核周。位于核周。薄血膜配子體薄血膜配子體惡性瘧配子體 惡性瘧配子體惡性瘧配子體大配子體和大滋養(yǎng)體的形態(tài)區(qū)別大配子體大配子體大滋養(yǎng)體大滋養(yǎng)體蟲體大小蟲體大小幾乎充滿被寄生的紅幾乎充滿被寄生的紅細胞細胞不超過被寄生紅不超過被寄生紅細胞的細胞的3/4核核一個，較大且致密，一個，較大且致密，周圍有一圈空白的不周圍有一圈空白的不染色帶染色帶一個，延長呈帶一個，延長呈帶狀，狀， 周圍無明顯周圍無明顯的不染色帶的不染色帶胞漿胞漿邊緣清楚，不含空泡

14、邊緣清楚，不含空泡邊緣不整齊，多邊緣不整齊，多有空泡有空泡瘧色素瘧色素顆粒較多顆粒較多,較粗，均較粗，均勻散在勻散在顆粒較少顆粒較少,較細，較細，分布不均勻分布不均勻大配子體和大滋養(yǎng)體的形態(tài)區(qū)別吉氏染色液被寄生紅細胞形態(tài) 間日瘧間日瘧 惡性瘧惡性瘧紅細胞脹大，退色，紅細胞脹大，退色，薛氏點薛氏點鮮紅、細小、鮮紅、細小、數(shù)多數(shù)多 。紅細胞大小正常，色紅細胞大小正常，色稍紫；稍紫；茂氏點茂氏點紫紅色，紫紅色，粗大，數(shù)少。粗大，數(shù)少。2、厚血膜中瘧原蟲形態(tài) 厚血膜的血量多，紅細胞重疊且干燥較慢，致使瘧原蟲皺縮，空泡縮小或消失，蟲體變形，蟲種鑒別比薄血膜困難。 厚血膜中小滋養(yǎng)體 胞漿可呈環(huán)狀，也可收縮

15、在核的一側(cè)或兩側(cè)，也可圍核分布等，形成各種形態(tài)。 間日瘧原蟲的環(huán)較大，胞漿較厚；核一個；蟲體形態(tài)常呈分號“；”和感嘆號“！”；品型 惡性瘧原蟲的環(huán)纖細，較小，著色較淺；核12個，蟲體形態(tài)常呈分號“；”、飛鳥“. ”、v狀“v”和斷環(huán)“o”狀等；厚血膜中間日瘧大滋養(yǎng)體 間日瘧原蟲呈阿米巴樣，形狀不規(guī)則。核位于胞質(zhì)中或邊緣；胞漿常斷裂成幾塊或縮成圓形，瘧色素分布不均。厚血膜中間日瘧裂殖體 蟲體較大，核2個以上，一般1224個，除蟲體略為縮小且著色較深外，均與薄血膜的相似。厚血膜中間日瘧配子體 除蟲體略為縮小且著色較深外，均與薄血膜的相似。一般蟲體較大，圓形，色素粗大，大配子核小，偏與一側(cè)，胞漿深蘭

16、色。小配子核大，居中，胞漿淺蘭色。厚血膜中惡性瘧配子體 惡性瘧原蟲大配子體為新月形，小配子體為臘腸形。核居中，瘧色素圍在核周，外為一圈胞漿。此外，還可見配子體的胞漿部分或全部消失，只留下核和瘧色素，或核和胞漿均消失，只留下一些瘧色素厚血膜中紅細胞一般染色后，寄生的紅細胞溶解，輪廓消失。但間日瘧有時尚留下紅細胞的“影子”和薛氏點。惡性瘧常見紅細胞“影子”和茂氏點瘧色素 瘧色素與原蟲在一水平面上 有立體感； 黃褐色、深褐色、金黃色。 形狀如沙粒狀、短桿狀等，可聚集成堆。 瘧色素在瘧原蟲診斷，蟲期判斷中有著重要作用。厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)本片中部有兩個白細胞，在

17、其左上方、左下方各有一個大滋養(yǎng)體；本片中部有兩個白細胞，在其左上方、左下方各有一個大滋養(yǎng)體；其右上方有兩個大滋養(yǎng)體，胞漿皆已縐縮成數(shù)塊，但皆有紅細胞殘其右上方有兩個大滋養(yǎng)體，胞漿皆已縐縮成數(shù)塊，但皆有紅細胞殘骸可見骸可見間日瘧間日瘧蟲體位于本片中部，胞漿皺縮為多塊，色素聚集于蟲體右上方；本蟲體位于本片中部，胞漿皺縮為多塊，色素聚集于蟲體右上方；本蟲上方為一個大滋養(yǎng)體蟲上方為一個大滋養(yǎng)體間日瘧間日瘧厚血膜惡性瘧環(huán)狀體厚血膜惡性瘧配子體厚血膜瘧原蟲鑒別要點 在厚血膜中必須根據(jù)瘧原蟲的核、胞漿、瘧色素三個條件鑒別是否是瘧原蟲及蟲種。 具備上述三條中的二個條件也能給與判定。 有時因染色較淺，看不到核和

18、胞漿，但看到典型的瘧色素也可判定。瘧原蟲與其它物體的鑒別 疑似瘧色素：血膜上的染料殘渣及灰塵，有時被誤認為瘧色素?？梢罁?jù)顆粒大小、色澤及分布范圍加以區(qū)別。轉(zhuǎn)動微調(diào)時，可見殘渣及灰塵浮于紅細胞上，于瘧原蟲不在一平面。 疑似瘧原蟲核：球菌、白細胞破裂后散出的顆粒、血小板，皆為紅色小點，與瘧原蟲核相似，最易混淆。但球菌形體較大，邊緣光滑，常見多個聚集一處，分布較廣。中性和嗜酸性粒細胞顆粒，著色較淡，邊緣整齊，附近常有白細胞碎屑。血小板：紅點結(jié)構(gòu)松散，花瓣狀，多35成群。瘧原蟲與其它物體的鑒別 疑似瘧原蟲胞漿：網(wǎng)織紅細胞殘留物和白細胞殘留物通常為藍色，與瘧原蟲胞漿相似，與某些紅點結(jié)合在一起，易誤診為瘧

19、原蟲 。如似大滋養(yǎng)體，可根據(jù)有無瘧色素特點加以區(qū)別。如似小滋養(yǎng)體，可依據(jù)蟲體大小、折光是否均勻、核與胞漿是否在一個平面上進行區(qū)別。四、血片的制作與染色1 1、材料、材料玻片：推玻片（具有光滑的邊緣）、載玻片一次性采血針75%的醫(yī)用消毒酒精（濕棉球）干棉球（止血用）標簽、記號筆：載玻片上標識與編號玻片盒玻片的處理：（1）新玻片常有游離的堿質(zhì)，使用前應(yīng)用重鉻酸鉀洗液或稀鹽酸（將濃鹽酸稀釋10倍）浸泡24小時，然后用自來水反復(fù)沖洗，晾干或烘干備用。（2）舊的玻片，應(yīng)放入5%的肥皂或洗衣粉水中煮沸20分鐘，再用熱水將肥皂或血膜等污物洗去，用自來水反復(fù)沖洗，必要時再置95%乙醇中浸泡1小時，然后擦干或烘

20、干備用。2 2、采血、采血厚血膜血量約為5立方毫米左右(即一小滴)，涂成邊緣光滑之園形，直徑約0.81.0厘米左右。薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約2.5厘米，寬約2厘米3 3、制片、制片瘧原蟲鏡檢要求在一張玻片上必須同時制作厚、薄血膜。（1）涂制厚血膜：取玻片2張，1張作載片，1張作推片（具有光滑邊緣）。用右手拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片的左下角刮取血液45l，再用該端中部刮取血液11.5l。將左下角的血滴涂于載片的右端1/3處，由里向外劃圈涂成直徑為0.81cm的圓形厚血膜（厚度以1個油鏡視野內(nèi)可見到510個白細胞為宜）。 厚血膜外觀：圓形，厚薄均勻。過厚易于脫落，過薄達不到檢出率的要求。涂制厚血膜涂制厚血膜（2）推制薄血膜：用干棉球抹凈玻片角上的血漬，然后將推片下緣（最好為磨口邊緣）平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片與推片之間向兩側(cè)擴展至約2cm寬時，使兩玻片保持3045度夾角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜（角度過大、速度過快，血膜太薄，反之血膜則太厚），用力要均勻，中途