乳塊消片指紋圖譜初步研究

1、乳塊消片指紋圖譜初步研究王鳳林1何慧麗1劉華1李瑾瑾2萬(wàn)林春（通訊作者）（1武警總醫(yī)院 北京100039）（2北京中醫(yī)藥大學(xué) 北京100102）（3江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究 中心江西南昌330029）【摘 要】目的：控制乳塊消片的質(zhì)量。方法：采用hlpc方法測(cè)定。結(jié)果： 確定了 9個(gè)共有峰，36批樣品指紋圖譜的相似度均在0.90以上。結(jié)論：所建立 的指紋圖譜簡(jiǎn)便可靠，可用于乳塊消片的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】乳塊消片；指紋圖譜；初步研究【中圖分類(lèi)號(hào)】r286【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】b【文章編號(hào)】1003-5028 （ 2015 ）5-0161-02乳塊消片功能為疏肝理氣，

2、活血化瘀，消散乳塊，其質(zhì)量收載于中國(guó)藥典 2010年版一部?，F(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定中指標(biāo)控制成分少，因而采用指紋圖譜對(duì)乳塊 消片中的橘葉、丹參、王不留行等藥味進(jìn)行了研究，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，方法可行, 可作為相應(yīng)的控制標(biāo)準(zhǔn)。1.儀器設(shè)備、試劑試藥、樣品、與對(duì)照品儀器設(shè)備：agilentllo0四元低壓梯度泵系列，chemstation化學(xué)工作站。試劑：乙購(gòu)為色譜純、水為milli-q制備的純化水；磷酸為分析純。乳塊消片藥店釆購(gòu),共34批。丹參素鈉（批號(hào)：110855-201311）原兒茶 醛（批號(hào)：110810200506）、王不留行黃酮昔（批號(hào)：111853-201102）丹酚酸 b （批號(hào)：111562

3、-201212）橙皮昔（批號(hào)：110721-201316）對(duì)照品由中國(guó)食品 藥品檢定研究院提供。2 方法與結(jié)果2.1色譜條件techmate c18色譜柱;檢測(cè)波長(zhǎng)：282 nm；流速：1.0 ml/min； 乙臘(a)0.2%的磷酸水溶液(b)為流動(dòng)相,梯度洗脫(030 min, 5%→20% a;30 40 min, 20 %a→30%a; 40 50 min, 30%a;50 60min,30 %a→5%a)o2.2供試品溶液的制備取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取約遼，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精 密加入50%甲醇50ml,稱(chēng)定重量，

4、超聲處理60分鐘放冷，再稱(chēng)定重量，用50% 甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。2.3對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉、原兒茶醛、王不留行黃酮昔、丹酚酸b、橙皮昔對(duì)照品適量, 精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每lml含丹參素鈉80?g、丹酚酸b 80?g、橙皮昔80?g、 含原兒茶醛與王不留行黃酮昔各40?g的溶液，即得。2.4精密度試驗(yàn)取同一供試品(s1,批號(hào)120205),按2.2項(xiàng)下的方法，制備供試品溶液。 然后按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣，測(cè)定，連續(xù)6次。測(cè)得其各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間 rsd均<2% ,相對(duì)峰面積rsd < 5% ,表明儀器精密度良好。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同

5、一供試品(同上)，按2.2項(xiàng)下的方法，制備供試品溶液。分別于制備 后0, 2, 6, 4, 8, 10, 12, 24 h分別進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，其各共 有峰的相對(duì)保留時(shí)間rsd均< 2%,相對(duì)峰面積rsd< 5%,結(jié)果表明供試品溶 液放置24 h穩(wěn)定。2.6垂復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品(同上)，按2.2項(xiàng)下的方法，制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng) 下色譜條件測(cè)定，測(cè)得各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間rsd均v 2%,相對(duì)峰面積rsd < 5%,表明該方法重復(fù)性良好。3結(jié)果與分析3.1共有峰的確定 對(duì)比所測(cè)定20批次乳塊消片樣品色譜圖，見(jiàn)圖1,根 據(jù)其相對(duì)保留時(shí)間，從中選定了9個(gè)共

6、有峰作為的乳塊消片指紋圖譜共有峰，見(jiàn)圖2o3.2參照峰的選擇精密吸取丹參素鈉、原兒茶醛、王不留行黃酮昔、丹酚酸b、橙皮昔對(duì)照品 混合對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 &mu;l,按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，發(fā)現(xiàn)各 成分在樣品圖譜中均有體現(xiàn)，2號(hào)峰為丹參素鈉;3號(hào)峰為原兒茶酔;4號(hào)峰為王 不留行黃酮昔;5號(hào)峰為橙皮昔;8號(hào)峰為丹酚酸b,見(jiàn)圖3。8號(hào)峰丹酚酸b峰 高度適度，分離度好，保留吋間適中，可以作為參照峰。3.3相似度測(cè)定取20批乳塊消片，按正文指紋圖譜項(xiàng)下方法制成供試品溶液，色譜測(cè)定， 記錄色譜圖。將測(cè)定色譜圖，分別在agilent色譜工作站進(jìn)行積分。逐個(gè)以cdf 數(shù)據(jù)文件的形式，導(dǎo)出譜

7、圖的aia文件。將導(dǎo)出的上述20批乳塊消片色譜圖aia 文件，分別導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（v2.0）。將導(dǎo)入的20批乳塊消片供試品色譜圖，對(duì)其中9個(gè)主要色譜峰進(jìn)行色譜峰 匹配，采用自動(dòng)匹配生成對(duì)照指紋圖譜，并導(dǎo)出對(duì)照指紋圖譜的電子文件乳塊消 片對(duì)照指紋圖譜文件s卬，結(jié)果見(jiàn)表lo34批乳塊消片供試品色譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)相似度計(jì)算軟件與乳塊消片對(duì)照指紋 圖譜進(jìn)行比較，結(jié)果除1批（該批未檢出丹酚酸a）外，其他相似度結(jié)果均大于 0.90,從目前的數(shù)據(jù)說(shuō)明乳塊消片批與批之間有較好的一性。綜合以上數(shù)據(jù)，結(jié) 合生產(chǎn)的可操作性，暫定相似度不低于0.90。4討論4.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇因丹參素鈉、原兒茶醉、丹

8、酚酸b、橙皮昔等的最大吸收波長(zhǎng)為 282&plusmn;2nm（分別見(jiàn)圖15）,而王不留行黃酮昔則在270nm有最大吸收， 為使各峰的響應(yīng)值都較大，試驗(yàn)采用了 282nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。4.2提取方法與時(shí)間的考察采用超聲處理15分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘、加熱回流1小吋等方 法進(jìn)行提取，結(jié)果，四種提取方式供試品均能達(dá)到良好的分離，考慮操作方便， 故確定本品提取方法為超聲處理60分鐘。參考文獻(xiàn)：1 chp2010. vol i （中國(guó)藥典 2010 年版. 一部）s2010:8362 chen wei 一 kang（陳偉康）,luo yue 一 hua（羅躍華）,xiongwei（熊 蔚）. sutdy on fingerprint chromatogram of coyrdalis decumbensfor injection（ 夏 天無(wú)注射液的hplc指紋圖譜的研究）j. chinj pharm anal（藥物分析