抗體藥物分析PPT課件

1、 截至2014年底，全球已批準上市的單抗藥物一共有50余種，進入臨床試驗階段的單抗藥物則接近500多種，治療范圍涵蓋腫瘤、自體免疫疾病、治療器官移植排斥反應(yīng)、抗感染、止血、呼吸道疾病等，其中又以腫瘤和自體免疫疾病藥物市場最大，種類最多。 在全球已批準上市的單抗藥物中，抗腫瘤藥物占42.5%，免疫性疾病藥物占32.5%，器官移植藥物占7.5%，心血管疾病藥物占7.5%，感染性疾病藥物占2.5%，其他藥物占7.5%。第1頁/共54頁第2頁/共54頁第3頁/共54頁第4頁/共54頁第5頁/共54頁第6頁/共54頁第7頁/共54頁第8頁/共54頁第9頁/共54頁第10頁/共54頁第11頁/共54頁第1

2、2頁/共54頁第13頁/共54頁第14頁/共54頁第15頁/共54頁第16頁/共54頁第17頁/共54頁第18頁/共54頁第19頁/共54頁第20頁/共54頁第21頁/共54頁第22頁/共54頁第23頁/共54頁第24頁/共54頁第25頁/共54頁第26頁/共54頁第27頁/共54頁第28頁/共54頁第29頁/共54頁第30頁/共54頁第31頁/共54頁 （1）理化性質(zhì)研究 分子量：常用質(zhì)譜法和還原性SDS-PAGE方法檢測抗體整體分子量和重鏈、輕鏈分子量，并與理論值比較。 肽譜：一級序列確證，關(guān)注覆蓋率/檢出率的分析；C-端氨基酸檢測。 氨基酸含量測定：應(yīng)分析測量結(jié)果與理論值比對結(jié)果。 鑒別

3、：通常采用免疫印跡法。 N-端氨基酸檢測：需要說明和理論序列是否一致。 糖基化修飾研究：糖類含量（還原性CE-SDS）、結(jié)構(gòu)、寡糖形態(tài)（CE-Glycan）和糖基化位點（LC-MS肽譜法）等。檢測方法常是多種方法聯(lián)用。 等電點：常采用等電聚焦法。不能僅以等電點范圍為質(zhì)控標準，需明確主區(qū)帶位置。 C端Lys異質(zhì)性：結(jié)合等電點研究說明異質(zhì)性。 其他高級結(jié)構(gòu)方法：二硫鍵：采用肽譜分析（還原和非還原條件下）質(zhì)譜測定法。需說明二硫鍵形成位置和數(shù)量。圓二色譜分析：拉曼光譜法、熒光及差示掃描量熱法（DSC）、紅外光譜法等。第32頁/共54頁 （2）生物學(xué)活性 功能性生物活性測定：細胞生長抑制實驗。 結(jié)合活性

4、：ELISA法進行抗原抗體結(jié)合力測定。 親和力：用Biacore方法測定單抗的親和常數(shù)或相對親和力。 （3）純度和雜質(zhì)分析 純度：還原/非還原性SDS-PAGE，可用CE-SDS取代。 產(chǎn)品相關(guān)質(zhì)質(zhì)：常采用非還原性SDS-PAGE和SEC檢測產(chǎn)品中聚合物，相關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物的種類和含量。采用離子交換色譜或成像毛細管凝膠電泳檢測電荷異質(zhì)性。 工藝相關(guān)雜質(zhì)：殘留DNA、殘留CHOP、蛋白A殘留以及工藝中用到的對人體有害的有機溶劑和其他添加物。 （4）與原研藥的可比性研究。第33頁/共54頁第34頁/共54頁第35頁/共54頁第36頁/共54頁第37頁/共54頁第38頁/共54頁第39頁/共54頁第40頁/共54頁第41頁/共54頁第42頁/共54頁第43頁/共54頁第44頁/共54頁一致性分析 鑒別v糖基化修飾分析第45頁/共54頁 分析糖基化的類型和比例： 一些糖型比如NGNA（唾液酸的N-羥乙?；窠?jīng)氨酸的同分異構(gòu)體）具有免疫原性； 高甘露糖型會影響藥代，降低血漿清除率； 巖藻糖、半乳糖的含量會影響ADCCCDC活性；第46頁/共54頁第47頁/共5