第八章體內(nèi)中藥制劑分析

1、2021-11-12 中藥制劑成分復(fù)雜，尤其是對許多化合物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)還未能了中藥制劑成分復(fù)雜，尤其是對許多化合物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)還未能了解。解。 目前中國有復(fù)方丹參滴丸、血脂康等目前中國有復(fù)方丹參滴丸、血脂康等1010種中藥處方藥正式向美國種中藥處方藥正式向美國FDAFDA申請檢測認(rèn)證，其中有申請檢測認(rèn)證，其中有7 7種進(jìn)入二期臨床試驗(yàn)，其余種進(jìn)入二期臨床試驗(yàn)，其余3 3種正啟動種正啟動一期臨床試驗(yàn)。但一期臨床試驗(yàn)。但迄今為止尚未有中藥通過美國迄今為止尚未有中藥通過美國FDAFDA認(rèn)證而進(jìn)入藥認(rèn)證而進(jìn)入藥品流通品流通。 中藥制劑要想被國際醫(yī)學(xué)界認(rèn)可并接受，關(guān)鍵在于如何中藥制劑要想被國際醫(yī)學(xué)界認(rèn)可

2、并接受，關(guān)鍵在于如何采用現(xiàn)代采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段探明中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)、相互作用機(jī)制，為傳統(tǒng)中科學(xué)技術(shù)手段探明中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)、相互作用機(jī)制，為傳統(tǒng)中藥賦予現(xiàn)代科學(xué)的內(nèi)涵藥賦予現(xiàn)代科學(xué)的內(nèi)涵?；钚猿煞只钚猿煞窒嗷プ饔脵C(jī)制相互作用機(jī)制體內(nèi)動態(tài)變化規(guī)律體內(nèi)動態(tài)變化規(guī)律中藥制劑中藥制劑體體內(nèi)內(nèi)中中藥藥制制劑劑分分析析技技術(shù)術(shù) 體內(nèi)中藥制劑分析，研究其活性成分的吸收、分布、代謝、體內(nèi)中藥制劑分析，研究其活性成分的吸收、分布、代謝、排泄、立體選擇性、藥物的相互作用、藥物對內(nèi)源性代謝的影排泄、立體選擇性、藥物的相互作用、藥物對內(nèi)源性代謝的影響，闡明中藥制劑的作用機(jī)制，為中藥新藥研究提供了新的途響，闡明中

3、藥制劑的作用機(jī)制，為中藥新藥研究提供了新的途徑。徑。 體內(nèi)中藥制劑分析技術(shù)：核磁共振技術(shù)（體內(nèi)中藥制劑分析技術(shù)：核磁共振技術(shù)（NMRNMR）、色譜質(zhì)譜）、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（如聯(lián)用技術(shù)（如GC-MSGC-MS、LC-MS /MSLC-MS /MS）、分子生物學(xué)技術(shù)（如酶）、分子生物學(xué)技術(shù)（如酶聯(lián)免疫吸附、化學(xué)發(fā)光免疫、熒光免疫方法）等。聯(lián)免疫吸附、化學(xué)發(fā)光免疫、熒光免疫方法）等。本章內(nèi)容提要本章內(nèi)容提要1.1. 生物樣品制備及貯存生物樣品制備及貯存2.2. 生物樣品預(yù)處理生物樣品預(yù)處理3.3. 生物分析方法建立及驗(yàn)證生物分析方法建立及驗(yàn)證1. 1. 生物樣品制備及貯存生物樣品制備及貯存1. 1.

4、 生物樣品制備及貯存生物樣品制備及貯存1.1 1.1 概念概念 生物樣品是指來自于生物機(jī)體生物樣品是指來自于生物機(jī)體的各種體液及組織的樣品，如：的各種體液及組織的樣品，如：血液尿液唾液腦脊液膽汁胃液臟器淋巴液組織（一）（一） 血樣血樣1.2 1.2 常見生物樣品的制備及貯存常見生物樣品的制備及貯存 血漿血漿血清血清全血全血自行凝固、靜置、離心自行凝固、靜置、離心+ +抗凝劑、靜置、離心抗凝劑、靜置、離心SerumPlasma+ +抗凝劑、混勻抗凝劑、混勻Whole blood（不含纖維蛋白原）（不含纖維蛋白原）（含血細(xì)胞）（含血細(xì)胞）問題：有哪些應(yīng)用？問題：有哪些應(yīng)用？應(yīng)用及貯存應(yīng)用及貯存w

5、血清多用于血液生化、免疫等方面的測定；血清多用于血液生化、免疫等方面的測定；w 血漿多用于凝血等方面的測定；血漿多用于凝血等方面的測定；w 全血則多用在血細(xì)胞、血常規(guī)、血沉等方面的測全血則多用在血細(xì)胞、血常規(guī)、血沉等方面的測定。定。w 關(guān)于貯存：血清、血漿視情況分裝后關(guān)于貯存：血清、血漿視情況分裝后-20-20或或- -8080備用。備用。（二）尿樣（二）尿樣臨床常用尿液標(biāo)本種類：晨尿、隨機(jī)尿、計(jì)時臨床常用尿液標(biāo)本種類：晨尿、隨機(jī)尿、計(jì)時尿。尿。關(guān)于貯存：應(yīng)盡量及時新鮮標(biāo)本檢測關(guān)于貯存：應(yīng)盡量及時新鮮標(biāo)本檢測, , 如不能即如不能即刻檢查，應(yīng)刻檢查，應(yīng)-20-20或或-80-80備用。備用。（

6、三）組織樣品（三）組織樣品應(yīng)用及貯存應(yīng)用及貯存2 2 生物樣品的預(yù)處理生物樣品的預(yù)處理提取提取分離分離釋放待測成分釋放待測成分減少雜質(zhì)干擾減少雜質(zhì)干擾使待測成分達(dá)使待測成分達(dá)到檢測限度到檢測限度結(jié)合物或結(jié)合物或絡(luò)合物絡(luò)合物富集富集常用生物樣品種類：血漿、血清、組織；常用生物樣品種類：血漿、血清、組織；采用采用蛋白沉淀、溶劑萃取蛋白沉淀、溶劑萃取預(yù)處理技術(shù)；預(yù)處理技術(shù)； 蛋白沉淀法因操作簡單，在滿足分析條件的情蛋白沉淀法因操作簡單，在滿足分析條件的情況下，應(yīng)首先考慮該方法。況下，應(yīng)首先考慮該方法。關(guān)于貯存：應(yīng)盡量及時新鮮標(biāo)本檢測關(guān)于貯存：應(yīng)盡量及時新鮮標(biāo)本檢測, , 如不能即如不能即刻檢查，應(yīng)刻

7、檢查，應(yīng)-20-20或或-80-80備用。備用。3 3 生物樣品分析方法的建立及驗(yàn)證生物樣品分析方法的建立及驗(yàn)證分析方法的設(shè)計(jì)依據(jù)分析方法的設(shè)計(jì)依據(jù) 在建立分析方法之前，應(yīng)充分利用現(xiàn)代科技成就和前人的研究成果，在建立分析方法之前，應(yīng)充分利用現(xiàn)代科技成就和前人的研究成果，系統(tǒng)檢索國內(nèi)外的科技文獻(xiàn)，對藥物在生物體內(nèi)的存在狀況、藥代動系統(tǒng)檢索國內(nèi)外的科技文獻(xiàn)，對藥物在生物體內(nèi)的存在狀況、藥代動力學(xué)參數(shù)、分析檢測方法等相關(guān)資料加以分析和研究，以供借鑒。力學(xué)參數(shù)、分析檢測方法等相關(guān)資料加以分析和研究，以供借鑒。 對于尚無文獻(xiàn)報(bào)道的藥物，亦可參考同類藥物的相關(guān)文獻(xiàn)。對于尚無文獻(xiàn)報(bào)道的藥物，亦可參考同類藥物

8、的相關(guān)文獻(xiàn)。檢索文獻(xiàn)，可在最短時間、最小的花費(fèi)建立一個好的分析方法檢索文獻(xiàn)，可在最短時間、最小的花費(fèi)建立一個好的分析方法！這是！這是試驗(yàn)前要做的第一件事！試驗(yàn)前要做的第一件事！ http:/ PubMed是因特網(wǎng)上使用最廣泛的免費(fèi)是因特網(wǎng)上使用最廣泛的免費(fèi)MEDLINE，是，是美美國國家醫(yī)學(xué)圖書館國國家醫(yī)學(xué)圖書館(US National Library of Medicine, NLM)所屬的國家生物技術(shù)信息中心所屬的國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)于于2000年年4月開發(fā)的，月開發(fā)的，基于基于WEB的生物醫(yī)學(xué)的生物醫(yī)學(xué)信息檢索系統(tǒng)信息檢索系統(tǒng),它是它是NCBI Entrez整個數(shù)整個數(shù)據(jù)庫查

9、詢系統(tǒng)中的一個。據(jù)庫查詢系統(tǒng)中的一個。PubMed界面提供與綜合分子生物界面提供與綜合分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫的鏈接學(xué)數(shù)據(jù)庫的鏈接，其內(nèi)容包括：，其內(nèi)容包括：DNA與蛋白質(zhì)序列，與蛋白質(zhì)序列，基因圖基因圖數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)，3D蛋白構(gòu)象，人類孟德爾遺傳在線，也包含著與提供蛋白構(gòu)象，人類孟德爾遺傳在線，也包含著與提供期刊全文的出版商網(wǎng)址的鏈接等。期刊全文的出版商網(wǎng)址的鏈接等。 3.13.1分析方法的選擇分析方法的選擇生物樣品中的生物樣品中的藥物濃度藥物濃度決定分析方法的決定分析方法的首要因素；首要因素；待測組分的待測組分的理化性質(zhì)、體內(nèi)的存在形式及組分在生物體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化理化性質(zhì)、體內(nèi)的存在形式及組分在生物體內(nèi)

10、的生物轉(zhuǎn)化( (代代謝謝) )途徑也是途徑也是分析方法的分析方法的重要影響因素重要影響因素，如：如： 藥物的藥物的pKapKa值、親脂性、溶解度、分配系數(shù)等值、親脂性、溶解度、分配系數(shù)等決定預(yù)處理方法及萃取決定預(yù)處理方法及萃取 方法；方法； 具有親脂性具有親脂性在適當(dāng)?shù)脑谶m當(dāng)?shù)膒HpH值下用溶劑萃??；值下用溶劑萃??； 具有強(qiáng)極性或親水性具有強(qiáng)極性或親水性沉淀蛋白、固相萃取、離子對萃取或衍生化后沉淀蛋白、固相萃取、離子對萃取或衍生化后 萃取等；萃取等； 具有揮發(fā)性具有揮發(fā)性GCGC測定法；具有光譜或電化學(xué)特性測定法；具有光譜或電化學(xué)特性分析檢測方法；分析檢測方法； 對酸堿不穩(wěn)定對酸堿不穩(wěn)定避免使

11、用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性溶劑；避免使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性溶劑； 對熱不穩(wěn)定對熱不穩(wěn)定避免高溫蒸發(fā)溶劑。避免高溫蒸發(fā)溶劑。 體內(nèi)藥物分析常用分析方法見體內(nèi)藥物分析常用分析方法見p201p201表表8-28-2。 目前，常用分析方法：目前，常用分析方法： （1 1）色譜法：氣相色譜法）色譜法：氣相色譜法(GC)(GC)、高效液相色譜法、高效液相色譜法(HPLC)(HPLC)、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（LCLCMSMS、LC-MS-MSLC-MS-MS，GC-MSGC-MS，GC-MS-GC-MS-MSMS）等，）等， 可用于大多數(shù)藥物的檢測；可用于大多數(shù)藥物的檢測；（2 2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免

12、疫分析法、熒光）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（3 3）微生物學(xué)方法，可用于抗生素藥物的測定。）微生物學(xué)方法，可用于抗生素藥物的測定。w從目前發(fā)展看，生物樣品的分析一般首選色譜法從目前發(fā)展看，生物樣品的分析一般首選色譜法，如，如HPLCHPLC、 GCGC法或法或LC-MSLC-MS、GC-MSGC-MS法，這類方法靈敏度、特法，這類方法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性一般都能適應(yīng)臨床藥代動力學(xué)研究的需要異性、準(zhǔn)確性一般都能適應(yīng)臨床藥代動力學(xué)研究的需要，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室也具備條件，因此應(yīng)用最廣，大約，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室

13、也具備條件，因此應(yīng)用最廣，大約90%90%的的藥物濃度測定可以用色譜法來完成。藥物濃度測定可以用色譜法來完成。w 具體選用何種分析方法應(yīng)根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性具體選用何種分析方法應(yīng)根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、質(zhì)、 儀器條件以及借鑒文獻(xiàn)方法多方面因素來考慮確儀器條件以及借鑒文獻(xiàn)方法多方面因素來考慮確定。定。 GC/MS分析分析 氣相色譜和質(zhì)譜氣相色譜和質(zhì)譜(GC/MS) (GC/MS) 是分析揮發(fā)性化學(xué)物質(zhì)的有效組是分析揮發(fā)性化學(xué)物質(zhì)的有效組合。合。 GC/MSGC/MS要求分析物能夠揮發(fā)，以便在毛細(xì)管中進(jìn)行遷移。因要求分析物能夠揮發(fā)，以便在毛細(xì)管中進(jìn)行遷移。因此，此，分析物必須具有揮發(fā)性

14、，或能夠經(jīng)過化學(xué)衍生具有揮分析物必須具有揮發(fā)性，或能夠經(jīng)過化學(xué)衍生具有揮發(fā)性發(fā)性。LC/MS分析分析w 液相色譜可以分離無揮發(fā)性和未衍生化的代謝物液相色譜可以分離無揮發(fā)性和未衍生化的代謝物。因此，。因此，LC/MSLC/MS可以分析的化合物種類范圍比可以分析的化合物種類范圍比GC/MSGC/MS更廣。更廣。w 常用常用LC/MS LC/MS 分析的樣品包括氨基酸（分析的樣品包括氨基酸（20 20 種氨基酸中的種氨基酸中的1818種種可以衍生，其余兩種不能）和比三糖更大的糖?？梢匝苌?，其余兩種不能）和比三糖更大的糖。w 最適合作為未知代謝物研究中的探索方法最適合作為未知代謝物研究中的探索方法，或

15、者在多種目標(biāo)，或者在多種目標(biāo)代謝物由于揮發(fā)性問題不能用代謝物由于揮發(fā)性問題不能用GC/MSGC/MS進(jìn)行分析時采用。進(jìn)行分析時采用?；衔锓诸惣捌渥钸m的分析技術(shù)化合物分類及其最適的分析技術(shù)3.2 3.2 生物樣品分析方法的建立生物樣品分析方法的建立初步擬定分析方法后進(jìn)行一系列試驗(yàn)，通過：初步擬定分析方法后進(jìn)行一系列試驗(yàn)，通過： （1 1）選擇最佳分析條件）選擇最佳分析條件 ( (即分析條件的篩選即分析條件的篩選) )； （2 2）驗(yàn)證分析方法的可行性；）驗(yàn)證分析方法的可行性；以確認(rèn)是否適用于實(shí)際生物樣品以確認(rèn)是否適用于實(shí)際生物樣品( (一一) )分析條件的篩選分析條件的篩選 取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，照擬定

16、的分析方法取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，照擬定的分析方法( (不包括生物樣品的預(yù)處理不包括生物樣品的預(yù)處理) )測定，測定，確定最佳分析檢測條件和檢測靈敏度。確定最佳分析檢測條件和檢測靈敏度。如色譜分析時：調(diào)整檢測器如色譜分析時：調(diào)整檢測器( (類型、條件類型、條件) )、色譜柱、色譜柱( (型號、牌型號、牌號、填料性狀與粒徑、柱長度號、填料性狀與粒徑、柱長度) )、流動相、流動相( (組分及其配比組分及其配比) )及其及其流速、柱溫、進(jìn)樣量、內(nèi)標(biāo)物的濃度及其加入量等條件，使各流速、柱溫、進(jìn)樣量、內(nèi)標(biāo)物的濃度及其加入量等條件，使各物質(zhì)具有良好的色譜參數(shù)物質(zhì)具有良好的色譜參數(shù)( (理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)n n、分離

17、度、分離度R R、拖尾因子、拖尾因子T T) )和適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r間和適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r間( (t tR R) )， 目的：避開其他物質(zhì)干擾，且待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積比適當(dāng)，目的：避開其他物質(zhì)干擾，且待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積比適當(dāng)，并通過選擇適當(dāng)檢測器，獲得好的方法靈敏度。并通過選擇適當(dāng)檢測器，獲得好的方法靈敏度。( (二二) )分析方法的建立分析方法的建立：1 1空白溶劑試驗(yàn)空白溶劑試驗(yàn)對色譜分析法而言對色譜分析法而言2. 2. 空白生物基質(zhì)試驗(yàn)空白生物基質(zhì)試驗(yàn)3. 3. 模擬生物樣品試驗(yàn)?zāi)M生物樣品試驗(yàn) 對色譜分析法而言對色譜分析法而言4. 4. 實(shí)際生物樣品的測試實(shí)際生物樣品的測試3.3 3.3 生物樣

18、品分析方法的驗(yàn)證生物樣品分析方法的驗(yàn)證 基于以下原因需要對建立的分析方法學(xué)進(jìn)基于以下原因需要對建立的分析方法學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證：行驗(yàn)證： (1)(1)生物樣品量少生物樣品量少 (2) (2)待測組分濃度低待測組分濃度低 (3) (3)內(nèi)源性物質(zhì)的干擾內(nèi)源性物質(zhì)的干擾 (4) (4)生物的個體差異較大生物的個體差異較大 從而確保分析方法的重現(xiàn)性和可靠性。從而確保分析方法的重現(xiàn)性和可靠性。驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟Freeze-and-thaw cycle） 分析方法的驗(yàn)證分析方法的驗(yàn)證 1 1、專屬性、專屬性(Specificity)(Specificity) 2 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（C

19、alibration CurveCalibration Curve） 3 3、定量下限（、定量下限（Lower Limit of quantitationLower Limit of quantitation，LLOQLLOQ） 4 4、精密度與準(zhǔn)確度（、精密度與準(zhǔn)確度（Precision and AccuracyPrecision and Accuracy） 5 5、樣品穩(wěn)定性、樣品穩(wěn)定性(Stability) (Stability) 6 6、提取回收率、提取回收率 7 7、方法學(xué)質(zhì)控、方法學(xué)質(zhì)控 8 8、微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證、微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證 （一）方法專屬性（一）方法專屬性(

20、specificity) 1. 1. 內(nèi)源性物質(zhì)的干擾內(nèi)源性物質(zhì)的干擾2. 2. 代謝產(chǎn)物的干擾代謝產(chǎn)物的干擾 3. 3. 聯(lián)合藥物的干擾聯(lián)合藥物的干擾4. 4. 與參比方法的相關(guān)性與參比方法的相關(guān)性 4. 4. 與參比方法的相關(guān)性與參比方法的相關(guān)性（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線（standard curve）生物樣品中所測定藥物濃度與響應(yīng)的相關(guān)性（比例的程度），生物樣品中所測定藥物濃度與響應(yīng)的相關(guān)性（比例的程度），通常用回歸分析方法所得的回歸方程來評價。通常用回歸分析方法所得的回歸方程來評價。 除少數(shù)方法（免疫分析法）外，標(biāo)準(zhǔn)曲線通常為線性模式。除少數(shù)方法

21、（免疫分析法）外，標(biāo)準(zhǔn)曲線通常為線性模式。 回歸分析法為最小二乘法（回歸分析法為最小二乘法（least squares）或加權(quán)最小二乘法）或加權(quán)最小二乘法（weighted least squares）（線性范圍較寬時使用加權(quán)法）。）（線性范圍較寬時使用加權(quán)法）。 線性范圍（線性范圍（linear range） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高與最低濃度的區(qū)間。標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高與最低濃度的區(qū)間。 模擬生物樣品的測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度模擬生物樣品的測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍( (續(xù)續(xù)) )標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線 用至少用至少5個濃度的標(biāo)準(zhǔn)模擬生物

22、樣品建立；個濃度的標(biāo)準(zhǔn)模擬生物樣品建立； 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線所建立標(biāo)準(zhǔn)曲線所使用的模擬生物樣品應(yīng)使用與待測的使用的模擬生物樣品應(yīng)使用與待測的含藥生物樣品相同的生物基質(zhì)制備含藥生物樣品相同的生物基質(zhì)制備。 線性范圍線性范圍 不包括零點(diǎn)，應(yīng)能覆蓋全部生物樣品中的藥物濃度；不包括零點(diǎn)，應(yīng)能覆蓋全部生物樣品中的藥物濃度； 不能使用外推的方法求算未知生物樣品中的藥物濃度。不能使用外推的方法求算未知生物樣品中的藥物濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的一般建立方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的一般建立方法 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)系列模擬生物樣品的制備標(biāo)準(zhǔn)系列模擬生物樣品的制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制加權(quán)

23、最小二乘法加權(quán)最小二乘法限度要求限度要求標(biāo)準(zhǔn)曲線的一般建立方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的一般建立方法 1. 1. 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照品、標(biāo)準(zhǔn)品對照品、標(biāo)準(zhǔn)品溶劑溶劑水或甲醇（或其他適當(dāng)溶劑）水或甲醇（或其他適當(dāng)溶劑）濃度濃度模擬生物樣品中藥物濃度的模擬生物樣品中藥物濃度的5050倍以上倍以上 加入量為生物樣品總體積的加入量為生物樣品總體積的2%2%以下以下 避免標(biāo)準(zhǔn)模擬生物樣品與實(shí)際樣品存在較大差異避免標(biāo)準(zhǔn)模擬生物樣品與實(shí)際樣品存在較大差異濃度較低濃度較低應(yīng)除去溶劑后再加入生物基質(zhì)應(yīng)除去溶劑后再加入生物基質(zhì) 否則否則, ,在實(shí)際樣品測定時應(yīng)加入等體積的溶劑并渦旋混勻在實(shí)

24、際樣品測定時應(yīng)加入等體積的溶劑并渦旋混勻 至少含至少含58個濃度點(diǎn)個濃度點(diǎn)(不包括零點(diǎn)不包括零點(diǎn),即空白即空白)可覆蓋全部待測生物樣品中的藥物濃度可覆蓋全部待測生物樣品中的藥物濃度如：如：1、2、5、10、20、50、100(等比梯度模等比梯度模式式比例常數(shù)約為比例常數(shù)約為 2)若體內(nèi)平均達(dá)峰濃度為若體內(nèi)平均達(dá)峰濃度為50，其，其1/20為為2.5設(shè)定最高濃度為設(shè)定最高濃度為100，最低濃度為，最低濃度為1 (個體差異個體差異)3. 3. 標(biāo)準(zhǔn)系列模擬生物樣品的制備標(biāo)準(zhǔn)系列模擬生物樣品的制備 空白生物基質(zhì)空白生物基質(zhì)( (如血漿如血漿) )加入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液適量，渦旋混勻加入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液適量，渦

25、旋混勻?yàn)榉乐乖跇?biāo)準(zhǔn)溶液加入及渦旋混合時造成的損失為防止在標(biāo)準(zhǔn)溶液加入及渦旋混合時造成的損失先加入標(biāo)準(zhǔn)溶液先加入標(biāo)準(zhǔn)溶液 再加入空白生物基質(zhì)再加入空白生物基質(zhì)渦旋混勻渦旋混勻 1 1、標(biāo)準(zhǔn)模擬生物樣品的最高濃度、標(biāo)準(zhǔn)模擬生物樣品的最高濃度應(yīng)高于生物體用藥后的達(dá)應(yīng)高于生物體用藥后的達(dá)峰濃度，最低濃度應(yīng)低于最高濃度的峰濃度，最低濃度應(yīng)低于最高濃度的10105 5。2 2、應(yīng)先在離心試管中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入空白生物基質(zhì)、應(yīng)先在離心試管中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入空白生物基質(zhì)后混懸。后混懸。3 3、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到試管中后，、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到試管中后，應(yīng)先揮干溶劑再加入空白生應(yīng)先揮干溶劑再加入空白生物基質(zhì)物基質(zhì)

26、。（三）定量限（三）定量限注意注意（四）準(zhǔn)確度（四）準(zhǔn)確度1. 1. 測定法測定法 2. 2. 結(jié)果計(jì)算與限度要求結(jié)果計(jì)算與限度要求）（%100AMRR）（）（%100%100RRAAMRE（五）精密度（五）精密度1. 1. 表示方法表示方法112nXXniii）（%100XSD）（%100112XnXXniii(%)1001)(%)100112 XIXXnXISSIiiA）（%100(%)100 XINSSSSXINSSAtote）（）（%100)(11212 XINXXnXXIiIiinjij（六）樣品穩(wěn)定性（六）樣品穩(wěn)定性（七）提取回收率（七）提取回收率1 1. . 測定法測定法）（%100STAAR2 2. . 限度要求限度要求2021-11