無菌檢查方法驗證告報告2015

1、編號：FAL-YZ-003.1無菌檢查方法驗證報告編制/日期審核/日期評審會簽姓名部門職務(wù)評審意見日期批準(zhǔn)/日期科技發(fā)展有限公司目 錄序號內(nèi)容頁號1目的12范圍13依據(jù)14職責(zé)權(quán)限15驗證方法26驗證結(jié)論57附錄6無菌檢查方法驗證報告1.目的通過對培養(yǎng)基無菌性檢查、靈敏度檢查，對產(chǎn)品的無菌檢查方法適用性進行試驗，證明該方法適用于產(chǎn)品無菌檢查日常檢測。2.范圍適用于本公司產(chǎn)品的無菌檢查方法的建立和確認(rèn)。3依據(jù)中國藥典（2015年版） GB/T14233.2-2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學(xué)實驗方法4. 職責(zé)權(quán)限姓名部門分工職責(zé)組長：組織確認(rèn)或驗證工作，批準(zhǔn)方案和報告負(fù)

2、責(zé)編制方案、實施、總結(jié)報告及微生物檢測負(fù)責(zé)設(shè)備樣品提供, 配合實施方案的工作負(fù)責(zé)微生物檢測5. 驗證方法實驗前的準(zhǔn)備a儀器設(shè)備設(shè)備名稱設(shè)備編號證書編號設(shè)備 狀態(tài)壓力蒸汽滅菌器10-11-53京海字第12004119號未檢定 己檢定在有效期內(nèi)激光塵埃粒子計數(shù)器Y09-3016H212C-O1040未檢定 己檢定在有效期內(nèi)溫濕度計JWS-A3B812Z-A0571號未檢定 己檢定在有效期內(nèi)微壓差表B10093624B712C-E0083號未檢定 己檢定在有效期內(nèi)微壓差表B10090070B712C-E0076號未檢定 己檢定在有效期內(nèi)細(xì)菌培養(yǎng)箱SPX-100B-Z京海字第11042604號未檢定

3、己檢定在有效期內(nèi)霉菌培養(yǎng)箱MLX-150-1京海字第11042605號未檢定 己檢定在有效期內(nèi)確認(rèn)人： 日期：b操作環(huán)境微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。檢驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進行潔凈度驗證。c稀釋液和試劑： PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 d器具 無菌注射器 儀液器 YT603集菌儀5.1培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本

4、檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽 批號20140408 生產(chǎn)廠家：青島日水生物技術(shù)有限公司胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基 批號20151023 生產(chǎn)廠家：青島尼賽欣合生物技術(shù)有限公司5.1.1無菌性檢查：每批培養(yǎng)基隨機取不少于 5 支（瓶），培養(yǎng) 14 天，應(yīng)無菌生長。5.1.2靈敏度檢查菌種：培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5 代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第 0 代），試驗用菌種應(yīng)采用適宜的菌種保存技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003銅綠假單胞菌

5、(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10 104枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501生孢梭菌(Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F) 98 001黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F) 98 0035.1.3菌液制備 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉微生物培養(yǎng)基質(zhì)控品,使用前注入1.1ml稀釋液充分溶解后,在漩渦混合器上震蕩混勻,制成10-100 cfu/0.1ml菌懸

6、液,3-5天內(nèi)用完。5.1.4培養(yǎng)基接種 取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100 cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3 天； 取每管裝量為9ml的胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基7支,分別接種小于100 cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5 天。逐日觀察結(jié)果。5.1.5結(jié)果判定 空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。見附件無菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄5.2無菌檢查方法驗證試驗5.2.1當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查法時，應(yīng)進行方法的驗證，以證

7、明所采用的方法適合于本產(chǎn)品的無菌檢查。若本產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變時，檢查方法應(yīng)重新驗證。驗證時，按“中國藥典2015版四部1101無菌檢查法”的規(guī)定進行操作。對每一試驗菌應(yīng)逐一進行驗證。5.2.2菌種及菌液制備 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉同培養(yǎng)基靈敏度檢查。5.2.3薄膜過濾法5.2.3.1FAL膠無菌檢測:使用YT603集菌儀，濾膜孔經(jīng)不大于0.45µ。A樣品組：取1ml醫(yī)用膠緩慢滴入100ml氯化鈉蛋白胨緩沖液中，使其固化成白色膠膜充分沖洗振蕩1分鐘，制成樣品組供試液，取一幅二聯(lián)式集菌培養(yǎng)器，將樣品組供試液平均通過每只集菌培養(yǎng)

8、器過濾，再用100ml氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗，然后通過集菌儀每只集菌培養(yǎng)器加入100ml胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基或硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，后每只加入10100cfu試驗菌，做為樣品組。B中和劑對照組：取一幅二聯(lián)式集菌培養(yǎng)器，將100ml氯化鈉蛋白胨緩沖液平均通過每只集菌培養(yǎng)器過濾，然后通過集菌儀每只集菌培養(yǎng)器加入100ml胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基、或硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，后每只加入10100cfu試驗菌，做中和劑對照組。C陽性對照組（菌液組）：取一幅二聯(lián)式集菌培養(yǎng)器，通過集菌儀每只集菌培養(yǎng)器加入100ml胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基、或硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，后每只加入10100cfu試驗菌，做為陽性對照組。D陰性對照：另取

9、一幅二聯(lián)式集菌培養(yǎng)器，通過集菌儀一只通過100ml胰胳大豆胨肉湯培養(yǎng)基，另一只通過100ml硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基， 作為陰性對照。5.2.3結(jié)果判斷 樣品組與中和劑對照組微生物生長濃度相似，表明中和劑的中和方式有效消除了樣品的抑菌性（即有效性），如對照組與陽性對照的微生物濃度相似，表明樣品預(yù)處理，消除樣品抑菌性的方法，檢測程序和培養(yǎng)條件等均不影響微生物生長（即無毒性）。陰性對照無菌生長。否則實驗無效。6.驗證結(jié)論 通過培養(yǎng)基無菌性檢查、培養(yǎng)基靈敏度檢查、無菌檢查方法驗證，結(jié)果表明，制定的無菌檢查方法適用本公司的產(chǎn)品。無菌檢查方法驗證試驗記錄編號：ZJ/JL-8.2.4-4-10 序號： 樣品名稱：

10、 樣品批號： 檢測日期：樣品數(shù)量：試驗方法：依據(jù)中國藥典2015年版 四部 1101 無菌檢查法：方法驗證試驗 薄膜過濾法 直接接種法硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：（3035 培養(yǎng)3天）1樣品組2中和劑對照組3菌液組現(xiàn)象描述培養(yǎng)天數(shù)123451234512345金黃色葡萄球菌銅綠假單孢菌生孢梭菌陰性對照注：“+”為生長，“-”為不生長胰酪大豆胨豆湯培養(yǎng)基：（2025 培養(yǎng)5天）1樣品組2中和劑對照組3菌液組現(xiàn)象描述培養(yǎng)天數(shù)123451234512345枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉陰性對照工作臺環(huán)境（CFU/皿）碟號24小時48小時平均菌落數(shù)結(jié)論123結(jié)論： 檢驗者： 復(fù)核者：復(fù)核日期：無菌培養(yǎng)基的適用

11、性檢查記錄編號：ZJ/JL-8.2.4-4-9培養(yǎng)基：1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 批號：_ 檢驗日期： 2. 胰酪大豆胨豆湯培養(yǎng)基 批號：_ 完成日期： 以上均為符合藥典規(guī)定的干燥培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)基的無菌性檢查培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 胰酪大豆胨豆湯培養(yǎng)基 培養(yǎng)基名稱管數(shù)培養(yǎng)時間（天）備注1234567891011121314硫乙醇酸鹽流體 培養(yǎng)基12345胰酪大豆胨豆湯培養(yǎng)基12345結(jié)論注：“+”為生長，“-”為不生長二、培養(yǎng)基的靈敏度檢查1. 菌液制備：（1）金黃色葡萄球菌新鮮肉湯培養(yǎng)物CMCC(B)26003 第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌

12、量_CFU/0.1ml（2）枯草芽孢桿菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1mlCMCC(B)63501第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌量_CFU/0.1ml（3）銅綠假單胞菌新鮮肉湯培養(yǎng)物1mlCMCC(B) 10104第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌量_CFU/0.1ml（4）生孢梭菌新鮮硫乙醇酸鹽培養(yǎng)物CMCC(B)64941第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌量_CFU/0.1ml（5）白色念珠菌新鮮改良馬丁培養(yǎng)物1mlCMCC(F)98001第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌量_CFU/0.1ml（6）黑曲霉新鮮孢子洗脫液1mlCMCC(F)98003第_代注入1.1ml稀釋液充分深解后，在漩渦混合器上震蕩混勻.至_含菌量_CFU/0.1ml2. 檢查結(jié)果細(xì)菌培養(yǎng)溫度_ 3天 霉菌及酵母菌培養(yǎng)溫度_ 5天菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）硫乙醇酸鹽