血吸蟲病診斷方法及研究進展

1、血吸蟲病診斷方法及研究進展長期以來，血吸蟲病診斷研究，一直是血吸蟲病研究的重點之一，并連續(xù)被列為國家醫(yī)藥衛(wèi)生科技七五、八五、九五、十五攻關項目，成為血吸蟲病防治中的熱門課題。血吸蟲病的診斷一般可以分為臨床診斷和實驗診斷。前者主要依據病史和體癥，雖有一定參考價值，但往往缺乏足夠的依據，不易和其他疾病相區(qū)別，難以確診病人。因此，必須依賴實驗診斷，實驗診斷可分為病原學診斷、免疫學診斷及其他輔助診斷方法。一、病原學診斷研究進展（一）病原學診斷的地位傳統(tǒng)的病原學檢查方法，有糞檢和直腸鏡檢。尼龍絹集卵法、水洗沉淀法及改良加藤氏法等糞檢方法，依然是基層疫區(qū)常用并首選的診斷方法。糞檢或無治療史者直檢，為確診血

2、吸蟲病人的最好依據。只要在受檢者糞便中或未經治療的患者活體組織內發(fā)現了血吸蟲卵，即可確診為血吸蟲病人，是確定感染的最直接、最可靠的指標。自從1903年Kasai氏首次在病人糞便中找到血吸蟲卵以來，糞便檢查一直是確診血吸蟲病和考核療效常用的方法。糞便檢查主要包括兩大內容即檢查蟲卵和孵化毛蚴兩種方法。檢查蟲卵：尼龍篩集卵法、沉淀法、透明法、改良加藤氏法；毛蚴孵化法：三角燒瓶法、塑料杯頂管法。由于新中國成立以來，黨和政府高度重視血吸蟲病的防治工作，我國血防取得舉世矚目的成績，無論是從病人的感染率或是感染度方面都顯著下降，病人糞便中蟲卵數大大減少，同其他檢查方法比較，糞檢的陽性率較低，漏診多，因而改進

3、糞檢方法，提高糞檢質量就一直是查病工作中的一個重要課題。事實上，糞檢方法隨著血防工作形勢的發(fā)展，一直在不斷的改進和提高，大量的現場查病工作也積累了豐富的經驗。此外，血吸蟲并非腸道內寄生蟲，故非所有的蟲卵都能隨便排出，在糞便中查到的蟲卵僅占雌蟲產卵數的16%。在成蟲排卵前期或者是非排卵期，就缺乏診斷價值，糞檢也就失去了意義。而在發(fā)病后期，腸壁組織纖維增生，腸壁增厚，蟲卵不易穿透腸壁而造成糞便中蟲卵數減少，糞檢時不易獲得陽性結果而導致漏檢。（二）Kato-Katz 法理想的病原學診斷方法應兼有簡單、快速、經濟、敏感性高、能確定感染度、重現性好、適于現場應用等優(yōu)點。Kato-Katz 法是當今WHO

4、 推薦的血吸蟲病定量檢測方法，我國多次血吸蟲病抽樣調查以及全國血吸蟲病疫情、病情監(jiān)測等都使用Kato-Katz 法。然而Kato- Katz法檢查糞量少，直接影響了該方法的敏感性，所以Kato-Katz法的漏檢，特別是低感染度的漏檢一直是大家關心的問題。為此，國內學者也做了一些新方法的探討。 表1 Kato氏法在不同流行區(qū)查病的漏檢率 作者 單位 集卵法 孵化法 Kato氏法 疫區(qū)人群 錢小洪等 四川 25.97 40.26 大山區(qū)陳大林等 安徽 24.53 55.66 重度流行區(qū)(EPG<20) 劉曉明等 安徽 10.57 52.85 急性病人黃希寶等 湖北 40.70 四個疫區(qū)村毛官

5、祥等 湖北 47.50 重疫區(qū)(7/41)羅建平等 江蘇 60 EPG<10 宋鴻燾等探討了糞便檢查在血吸蟲病低度流行區(qū)查病的現場應用價值。采用尼龍絹集卵孵化法和改良加藤氏法對463人進行檢查，兩法陽性8例，孵化法陽性加藤法陰性9例，加藤法陽性孵化法陰性1例，孵化法漏檢率為5.6%(1/18)，加藤法漏檢率為50.0 %(9/18)，尼龍絹集卵孵化法比改良加藤氏法陽性檢出率高，漏檢率低，經x2測驗，兩法差異有顯著性。（中血2003；15（3）：218）采用Kato法與糞便集卵孵化法在重疫區(qū)檢查了2513人，其中男性1503人，女性1010人，年齡最大者70歲，最小者三歲，均是農民和中小學

6、生。兩種方法共檢出血吸蟲陽性病例1027人，檢出率為41.20%，孵化法檢出率顯著高于Kato法(P<0.05)(表2)表2 2種方法診斷血吸蟲病的對比 方法 檢查例數 陽性數 檢出率(%) Kato法 2513 176 7.00 孵化法 2513 994 39.55 毛官祥等，湖北預防醫(yī)學雜志 6（2）：39 表3 不同感染者Kato法檢出率比較 感染度(EPG) 沉淀蟲卵計數法 Kato法 陽性例數 檢出數 檢出率(%)1 42 12 28.5910 10 7 70.0020以上 18 16 87.90 分析加藤法漏檢原因，可能與Kato法取糞量過少及經過反復查治，血吸蟲病人的EPG

7、低有關，另一方面， Kato法檢出率高低與疫區(qū)人群感染度高低有關。在感染度低的疫區(qū)，若選用定量方法查病，作者認為采用尼龍絹篩集卵孵化法較為適宜。當EPG為8時，kato-katz法的檢出率只有42.9%。用kato-katz法檢測EPG真值5時很難找到蟲卵,為10時其檢出率只有55%,以往資料顯示, kato-katz法在血吸蟲病中，輕度流行區(qū)查病要遺漏部分病人。四川吳子松等研究并經相關性分析，發(fā)現孵化出的毛蚴數與Kato-Katz法的檢出率呈正相關(r=0.9347)，作者認為在血吸蟲病流行區(qū)廣泛使用Kato-Katz法，進行流行趨勢動態(tài)監(jiān)測，針對群體而言，即使又部分漏檢的情況下，Kato-

8、Katz法優(yōu)于孵化法。實用寄生蟲病雜志1995；3（1）：21表4 Kato-Katz法對不同感染度的檢出率 孵化結果 平均毛蚴數 受檢例數 陽性例數 檢出率(%)+以下(15) 2.5 81 31 38.27+ (610) 7.5 144 83 57.64+ (1120) 15 98 59 60.20+ (2130) 25 81 51 62.96+ (>30) 40 63 52 83.87 四川作者近年探討Kato-Katz法診斷血吸蟲病時不同涂片數與檢出率的差異，對四川省血吸蟲病流行區(qū)的240人進行Kato-Katz法檢查，按順序制作4張涂片，鏡檢計數血吸蟲卵，結果1片至4片的檢出率

9、分別為15.83%，20.00%，22.92%，25.83%，檢出率隨涂片數增加而提高，3片與4片的病人EPG幾何均數差異無顯著性，建議血吸蟲病查病時使用3張Kato-Katz涂片。中血2002；14（6）：436表5 EPG涂片數與檢出率的關系 EPG組 檢查數 不同涂片數的檢出例數 1 2 3 4 6- 19 6 10 15 19 12- 20 11 15 17 2030- 10 8 10 10 1054- 13 13 13 13 13合 計 62 38 48 55 62 （三）集卵直檢法四川所在山丘型血吸蟲病流行區(qū)對2160人進行集卵直檢法、Kato-Katz法和集卵孵化法的對比試驗。樣

10、本感染度和感染率越低，集卵直檢法檢測性能越佳。集卵直檢法鏡下蟲卵形態(tài)清晰，基層血防技術人員容易掌握。方 法 檢出率（%） 材料費用（元） 集卵直接法 13.10 2.05 Kato-Katz法 8.29 2.02 集卵孵化法 7.36 2.47國家所錢珂等采用集卵薄涂片法檢測牛糞中血吸蟲卵，比較了薄涂片法和透明法的蟲卵回收率。結果表明，在三種蟲卵梯度，薄涂片法的蟲卵回收率，分別為透明法的18、4.2和3.5倍，現場檢查34頭孵化陽性黃牛的結果也證實薄涂片法優(yōu)于透明法。薄涂片法檢查半量糞渣(制6張涂片)的蟲卵估計值和標準差與全量糞渣結果相似，可以代替全量糞渣檢查。在感染度高的地區(qū)，可以檢查1/4

11、糞渣，制3張涂片，從而減少工作量。（四）尼龍絹集卵法尼龍絹集卵法已成為血吸蟲病普查的常規(guī)方法。但是，在流行區(qū)普查血吸蟲病工作中發(fā)現該方法也存在血吸蟲卵散失的現象。表6 49例陽性糞便尼龍絹不同淋洗次數檢查結果 組別 檢出毛蚴例數 檢出率(%) 檢出毛蚴只數 構成比(%) 44 89.8 2944 65.0 34 69.4 413 9.1 32 65.3 187 4.1 44 89.8 988 21.8合計 - - 4532 100.0 江蘇省血吸蟲病防治研究所曾有兩個類似的結果， 第一次是從已知的10份陽性糞便，共檢出毛蚴2101只，其中沉淀內檢出毛蚴1050只，棄去的糞渣中檢出毛蚴917只，

12、損失43.6。第二次現場試驗結果，糞渣中散失毛蚴38.1。浙江張雪娟等以尼龍篩法銅篩杯內的糞渣再進行孵化，并與尼龍篩內孵出的毛蚴數進行比較，結果毛蚴散失28.735.3，基本與上述結果一致。（五）毛蚴孵化法（耕牛血吸蟲病檢測）1、直孵法檢查的糞便既未經過銅篩杯過濾，也未經尼龍篩淘洗，糞渣多，色素濃，影響其毛蚴孵出。根據中國農科院上海家畜血吸蟲病研究室診斷組50次試驗結果，自然光照組比光照較弱組毛蚴孵出總數高出4倍多。有作者特意將已經孵化5小時后的糞渣保留，通過尼龍篩淘洗，再次加水孵化，2小時后孵出了大量毛蚴，說明許多蟲卵可能由于光線等原因未能孵出毛蚴。浙江農業(yè)學報2004；16（6）：3812

13、、頂管糞便孵化法 根據毛蚴具有向上性、向光性、向清性的特性，普憲光等將三角燒瓶孵化法改進為頂管孵化法，將耕牛糞便置于銅絲篩中，在一個盛滿水的茶缸中淘洗，取出銅絲篩，沉淀換水。在一個大于茶缸口的正方形木板中打孔插入玻璃管，加滿水后倒蓋在荼缸上（玻璃管口與茶缸內水面接觸）孵化，在玻璃管中觀察毛蚴。陳代榮、邵水康等對這一方法又作了進一步改進，設計了一種特制塑料杯和裝有玻璃管的塑料蓋。3、糞便沉淀孵化法該法最早用于診斷耕牛血吸蟲病，該方法是取牛糞50g，經40一60目銅絲篩在盛有500ml水的茶杯或量杯中淘洗，取出銅絲篩，分別沉淀30分鐘直至水清。濾去上清液將糞渣移入三角燒瓶中加滿水在適宜溫度(202

14、7)或溫箱中孵化，分別在孵化后1、3、5小時或 2、4、6小時各觀察一次，發(fā)觀毛蚴即判為陽性。4、尼龍兜淘冼孵化法糞便沉淀孵化法，需反復換水，很費時，費水，在高溫季節(jié)還必須用1%鹽水，以免毛蚴孵出倒掉。孫承銑等經反復試驗比較，選擇了一種孔目小于蟲卵而糞便中色素可以濾過，型號為N xl03的尼龍篩絹，將經鋼絲篩淘洗過的糞水，倒入用尼龍絹兜內在清水中淘洗，再將兜內糞渣移入三角燒瓶內加水孵化，觀察毛蚴。5、棉析糞便孵化法用尼龍絹兜淘洗法，免去多次換水的操作程序，縮短了工作時間，但用尼龍兜淘洗過的糞渣，其中一部分在孵化過程中將浮于三角燒瓶頸部，影響對毛蚴的觀察，如在瓶頸下部加一隔層，阻止糞渣上浮，使觀

15、察部位保持清晰。有人曾進行這樣有趣的試驗，用一根一端為球形的玻璃管，在球底部放入水和毛蚴，水面上加一脫脂棉層，棉層上再加水，毛蚴可從棉層下的水中，穿過棉層進入上層水中。 6、糞便濕管孵化法 由于隨糞便排出的蟲卵，成熟期各不相同，毛蚴孵出時間也有長有短，毛蚴逸出數量一般呈拋物線狀。觀察毛蚴選擇在孵化后1、3、5或2、4、6小時就是這個道理。有學者提出能否使成熟早的蟲卵抑制其孵出，而成熟晚的蟲卵促使其成熟，使毛蚴在同一時間內達孵出高峰。（六）直腸組織活檢人體感染血吸蟲病后，血吸蟲卵在體內腸粘膜沉積，引起腸粘膜一系列病理變化，以直腸和乙狀結腸尤為顯著。因此，直腸鏡、乙狀結腸鏡作為血吸蟲病病原學檢查的

16、一種方法可以補充糞檢血吸蟲孵化和集卵之不足。該法對無治療史患者易作出正確判斷。對有治療史的患者，由于血吸蟲卵在腸組織的演變形態(tài)較為復雜，需要一定識別蟲卵形態(tài)的經驗或進行染色才能作出較為正確的判斷。直腸鏡檢的主要副作用是損傷性出血和腸穿孔：強行插鏡與強行拔出鏡心所致損傷性出血；當直腸鏡筒與鏡心末端接觸腸壁粘膜過緊時，猛拉、急退、強行拔出鏡心，遠端勢必產生負壓，鏡筒進腔越深，負壓越大，致使腸壁粘膜與金屬鏡筒緣有力吸附，切割傷就越厲害；原病變處的潰瘍、息肉、孤立性小靜脈瘤容易損傷而致出血；活檢腸粘膜時未避開較大血管和深部有血管搏動的部位。（七）胃纖維鏡檢查慢性和晚期血吸蟲病患者的胃部病變尚未見胃纖維

17、鏡檢查的詳細報道。對109例慢性血吸蟲病和109例晚期血吸蟲病患者的胃粘膜病變作了內窺鏡觀察。纖維胃鏡檢查 :使用Olympus GiF-Q20GiF-K2和國產XS一4型前視斜視胃鏡觀察胃粘膜病變和晚血患者食道靜脈曲張情況。發(fā)現晚血的胃粘膜糜爛發(fā)生率明顯高于潰瘍（P0.01)，晚血和慢血患者的充血性(淺表性)胃炎發(fā)病率(86.2%和84.4%)均明顯高于非血吸蟲病患者的檢出率（61.0%）。晚血的胃粘膜病變發(fā)病率明顯高于慢血，特別是摩爛性胃炎的發(fā)病率高。晚血患者中胃粘膜病變有92.9%合并有幽門螺旋桿茵感染。（八）動物解剖檢查解剖檢查，即家畜尸體內收集血吸蟲蟲體，或在組織中檢獲蟲卵，這是診斷

18、血吸蟲病最為準確的方法。在收集蟲體時，首先必須了解血吸蟲在宿主體內的主要寄生部位是腸系膜靜脈、痔靜脈和直腸靜脈，有時在門靜脈、胃靜脈及肝臟也能找到少量蟲體。因此，在收集蟲體或檢查蟲卵時，主要對這些部位進行沖洗集蟲和作肝、腸組織壓片鏡檢蟲卵。1、沖洗集蟲檢查（1）胃腸道血管蟲體收集法牛宰殺后，為防止血液凝固，應組織多人盡快從速剝皮。事畢，將牛頭彎轉至牛體左側，使牛仰臥呈偏左傾斜姿勢，剖開胸腔和腹腔，除去胸骨。首先，分開左右肺，找出暗紅色的后腔靜脈，并進行結扎；其次，在胸腔緊靠脊柱的部位找到白色的胸主動脈，左手將其托起，右手用剪刀沿血管平行方向剪一開口，然后將帶有橡皮管的玻璃接管從離心方向插入，并

19、以棉線扎緊固定，而橡皮管的另一端與壓縮式噴霧器連接，以便進水；第三，在腎臟后緊貼脊柱處，將并列的腹主動脈及后腔靜脈同時結扎或以止血鉗夾緊，避免沖洗液流向后軀其他部位；第四，在膽囊附近，肝門淋巴背面，細心分離出門靜脈，向肝一端以棉線或用止血鉗扎緊，離肝一端取與血管平行方向剪一開口（盡可能貼近肝臟，以免接管進入肝靜脈的腸支，而影響胃支中蟲體的收集），插入帶有橡皮管的玻璃接管，并固定之。為防止血液凝固，接管內應事先裝滿5%的枸櫞酸鈉溶液，在插入接管時此溶液即會流入血管中，橡皮管的另一端接以銅絲篩，以備出水時收集蟲體。手術結束后，即可啟動噴霧器，注入0.9%加溫至3740的食鹽水進行沖洗，蟲體即隨血水

20、落入銅絲篩中，直至出水清晰，無蟲體沖出為止。如蟲體僅作為計數用，也可以將橡皮管直接接到自來水管上沖洗，不必應用0.9%食鹽水，而且壓力更大。為了方便，門靜脈可不必進行插管，可以直接剪斷，并在該處收采蟲體。（2）肝臟中的蟲體收集法胃腸血管內蟲體收集完畢后，從肝臟的后腔靜脈（位于胸腔內）離心端插入導管，結扎固定。同樣與噴霧器或自來水管相接，然后解開門靜脈（近肝臟端）的結扎線，裝置出水接管，將橡皮管導入銅絲篩中，沖洗。啟動噴霧器或打開自來水龍頭沖蟲，但是應該慢慢放水，以避免水壓過大，造成肝臟破裂，待至血水變清，無蟲體沖出為止。（3）痔靜脈內的蟲體收集法 試驗證明，人工感染血吸蟲病的動物、包括牛、羊、

21、豬等，大部分在痔靜脈內可檢獲到一定數量的蟲體，但是一般的沖洗方法，不能把痔靜脈內的蟲體沖洗出來，必須另作檢查。其方法是：剖開骨盆腔取出直腸，先排出直腸內殘余糞便，然后以左手伸入直腸中襯托腸壁，此時痔靜脈充分暴露，沿痔靜脈進行檢查，發(fā)現痔靜脈內有蟲體時（多半是雌、雄合抱，呈黑色），以剪刀剪斷血管，然后以鑷子輕輕將其擠出。其他動物可參照牛的方法進行。2、肝臟蟲卵檢查（1）蟲卵壓片檢查法 將肝臟上粟米大小的白色血吸蟲蟲卵結節(jié)，以眼科剪取下，置于載玻片上，再用另一張載玻片將其壓緊，然后以膠布或橡皮筋固定之，置于低倍鏡下檢查。陽性者可見到似腸黏膜上蟲卵結節(jié)樣的血吸蟲蟲卵。（2）蟲卵毛蚴孵化法 輕度血吸蟲

22、感染的動物，捕殺后，肝臟病變不甚明顯，任意取肝組織壓片檢查，往往得不到很好的結果。在這種情況下，為了確診血吸蟲病，可作肝組織毛蚴孵化檢查。方法：任意取肝組織1020g，剪碎，置于組織搗碎機內搗碎，加上適量水調勻，先通過40孔/25.4mm銅篩杯過濾，棄去濾渣，將濾液倒進260孔/25.4mm尼龍篩兜內淘洗干凈，然后將這些肝組織倒入三角燒瓶內，作毛蚴孵化。這種方法可以獲得較滿意的效果。（九）病原學檢查的注意事項 1、糞檢的注意事項 Ø 取材的部位：糞便中蟲卵的分布以外層多余內層，頭段多于尾段。Ø 糞檢的次數：1-5次糞檢的陽性率分別為65.4%，91.5%，97.2%：98.

23、8%，99.5%，第4次以后每次遞增不足1%。Ø 被檢的糞量：30-50克，糞卵（100克含10個卵）檢出率為100%，20克檢出率為80%，10克檢出率為40%。Ø 糞檢的季節(jié)：牛糞中毛蚴孵化以4-7月為最高，11-1月最低。Ø 糞便保存和運輸: 注意防高溫、干燥和暴曬，糞便外層蟲卵多于內層，因黏附易丟失蟲卵。2、改良加藤氏法與疫區(qū)的流行程度、病人的感染度以及糞便中蟲卵數密切相關。在低中度流行區(qū)注意增加涂片數或進行厚涂片法，可減少漏檢。3、集卵檢查的注意事項尼龍篩集卵法: 快捷、簡便、省時、省力、集卵效率高；缺點是黏附、交叉污染問題。沉淀法:糞便需調勻，以防銅篩

24、上層粗渣中蟲卵的丟失（有實驗報道可丟失38.1-43.6%）；換水速度間隔30分鐘為宜；涂片3-4張為佳，以疫情輕重作為參考。4、毛蚴孵化注意事項Ø 孵化用具：頂管法（毛蚴觀察容易）Ø 孵化用水：去氯水Ø 溫度與光線：要適宜Ø 毛蚴鑒別要點：三性、勻速直線運動5、血吸蟲病直腸鏡檢查注意事項Ø 直腸黏膜組織活檢方法：看清部位、避開血管、展平黏膜、固定鏡筒、控制組織鉗開口及被鉗組織的大小。Ø 鉗取組織的部位：10厘米位置、黏膜病變處陽性檢出率高Ø 對有治療史者組織中蟲卵死活的鑒別。二、免疫學診斷研究進展通過我國控制日本血吸蟲病策

25、略的實施，經反復化療，血吸蟲病的病例已明顯下降，病人數從50年代 1千多萬降到2002年82萬。在血吸蟲病的流行區(qū)，該病的感染率和感染度都有顯著下降。在血吸蟲病流行地區(qū)，特別是低感染度的居民，其糞便中蟲卵的排出常發(fā)生波動，寄生蟲學的診斷技術，如糞便檢查，敏感性低，而且費時、費力，成本/效率低，群眾對糞檢的依從性也越來越低。因此，寄生蟲學方法在有效檢測血吸蟲病方面的作用愈來愈差。而免疫診斷技術則具有較多的優(yōu)點，與寄生蟲學方法相比，更為敏感、特異性好、操作更簡便。特別是自上世紀80年代，高效、低毒的口服抗血吸蟲藥吡喹酮引入中國以來，免疫診斷逐漸被專家和疫區(qū)的群眾所認同，并整合入我國血吸蟲病防治策略

26、中。已有很多種免疫診斷技術在我國疫區(qū)廣泛用于對化療靶人群的確定，同時，在流行病學調查、防治效果評價等方面發(fā)揮著重要的作用。（一）我國血吸蟲病免疫診斷方法的發(fā)展史我國的科學家在日本血吸蟲的免疫診斷方面作出了巨大的努力。早在1936年，甘懷杰等采用以血吸蟲蟲卵作為抗原的皮內試驗（ID），成功地用于血吸蟲病的診斷。自20世紀50年代，這一試驗被大規(guī)模用于血吸蟲病的調查。在此以后，陳祜鑫等發(fā)展了一種尾蚴膜反應（CHR）的體外診斷方法。環(huán)卵沉淀試驗（COPT）是在我國研究較多，且應用時間較長的一種免疫診斷方法。我國自1958年，劉獻等首先應用完整的新鮮蟲卵檢測日本血吸蟲的感染。以后改用冷凍干卵或熱超聲干

27、卵代替鮮卵作為診斷抗原。在方法學上也作了一系列改良。陶義訓等首先在我國將間接血凝試驗（IHA）用于血吸蟲病的診斷。以后在抗原作了改進，楊贊元等（1976）采用凍干致敏紅細胞代替新鮮凍干紅細胞，使該方法更適合在現場應用。1978年嚴自助等首先在我國將ELISA方法用于診斷。自此以后，我國研究人員對ELISA方法做了大量的研究和改進，不僅應用SEA作為抗原，而且還應用純化抗原、組分抗原或抗個體基因型抗體等作為抗原。在此方法的基礎上，發(fā)展了酶標記抗原對流免疫電泳（ELACIE）、免疫酶染色法（IEST）和快速ELISA、DotELISA。1985年裘麗姝發(fā)展了另一種免疫診斷方法膠乳凝集試驗（LA）。

28、朱蔭昌及其同事研制成功了膠體染料試紙條法（DDIA），更適合大規(guī)模的現場應用。從上世紀80年代起，我國的研究人員已經成功研制了多種單克隆抗體，如3D8A、NP285B、D10、8SE4和AT1。并應用這些單克隆抗體建立了多種檢測方法。但遺憾的是，通過1993年和1995年二次全國性合作研究顯示，這些方法并不令人滿意，對慢性病例，特別是低感染者，敏感性較低，特異性差。最近在我國發(fā)展了應用重組抗原，如rSj26GST、rSj23HD、rSj32、rSj31b，或者是抗重組抗原的單克隆抗體，如AT1，檢測血吸蟲病的抗體或抗原的方法。（二）我國應用的主要免疫診斷方法在我國應用較廣泛的免疫診斷方法主要是

29、皮內試驗、環(huán)卵沉淀試驗、間接血凝試驗、酶標免疫吸附試驗和試紙條快速診斷試驗。1、皮內試驗（ID）該法具有操作簡便、判斷結果快速以及價廉等優(yōu)點，其敏感性與糞檢蟲卵陽性的符合率可達到96以上。該法在50年代曾為全國血吸蟲病的調查發(fā)揮了重要的作用。但由于其抗原無法達到體內用藥的標準，且在流行區(qū)一旦病人出現陽性，即使已經治愈，幾乎不會轉陰。因此，該方法目前在我國已不再使用。2、環(huán)卵沉淀試驗（COPT）自從1958年我國應用COPT法診斷血吸蟲病以來，研究人員在該方法的抗原和方法學方面不斷進行了改進。冷凍干卵和熱超聲干卵的制備已經達到標準化。改良的COPT方法例如雙面膠紙條法（DGSCOPT）、PVC膜

30、片法、塑料管法等，使COPT的操作更方便。該方法具有較高的敏感性和特異性。其敏感性與糞檢陽性的符合率達到94.198.6。非流行區(qū)健康人的假陽性率為2.53.6。通過有效治療38年后，經COPT檢測陰轉率分別為82.5和8083。然而，在病情控制的地區(qū)，經過反復治療，其感染率和感染度都很低，COPT的檢出率明顯下降，僅為7080。COPT的另一些缺點是操作繁瑣且判斷結果耗費時間長（一般為4872小時），而且需要使用顯微鏡。所以這些就限制了該方法在我國現場進一步的推廣應用。3、間接血凝試驗（IHA）IHA是繼COPT后在我國廣泛應用的一種免疫診斷方法。楊贊光等（1976年）首次在現場采用凍干致敏

31、紅細胞用于IHA試驗。吳福東等以Sephadex G 100 純化蟲卵抗原代替粗抗原，提高了該方法的特異性。該方法與糞檢的符合率達到93100，非疫區(qū)健康人的假陽性率為1.713.0。與肺吸蟲的交叉反應分別為6484（粗抗原）和31.3（純化抗原）。有效治療后3年或者3年以上，大多數病人IHA可以轉陰。由于該方法簡便、快速，可用于血吸蟲病疫區(qū)（人群）的診斷以及在疫區(qū)對化療靶人群進行篩查。然而，該方法在結果判定時存在著主觀性。4、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）用于血吸蟲病診斷的常規(guī)ELISA常使用可溶性蟲卵抗原，其敏感性與糞檢陽性的符合率可達到95以上，非疫區(qū)健康人群的假陽性率為1.33.3。在

32、有效治療12年后，陰轉率可以達到58.559.8。該方法具有良好的敏感性和特異性。然而，操作過程需花費23小時，而且需要ELISA檢測儀，這在疫區(qū)大規(guī)模的現場應用存在一定困難。隨著抗原的改進，該方法擴展了其應用領域。例如，應用1可溶性抗原和尿素溶解性抗原的混合物代替可溶性抗原作為快速ELISA的診斷抗原，其敏感性和特異性均與常規(guī)ELISA相似，但操作相對簡便、快捷，這有利于在疫區(qū)現場的應用。當用NP30（一種抗個體基因型抗體）作為“內影像抗原”時，該方法對急性血吸蟲病人的檢出率與常規(guī)ELISA相似（陽性率為95100），但在慢性病例中的陽性率只有6173，低于常規(guī)ELISA。然而，對于有效治愈

33、后1年的血吸蟲病人的陰轉率可達42.5100，似具有療效考核價值。用血吸蟲的蟲卵組分抗原（107121KDa）作為檢測抗原檢測抗血吸蟲短期抗體，建立了FAELISA，該方法有較高的敏感性（9195）和特異性（96.7），均與常規(guī)ELISA相似，并且有較好的療效考核價值，經過一年半的有效治療后，陰轉率可以達到90以上。另外，該方法與肺吸蟲、肝吸蟲以及姜片蟲幾乎沒有交叉反應。這明顯優(yōu)于常規(guī)的ELISA方法。5、膠體染料試紙條法（DDIA）為了發(fā)展一種快速、簡便的免疫學方法以用于疫區(qū)的現場應用，朱蔭昌及其同事發(fā)展了一種新穎的診斷方法膠體染料試紙條法。這種方法采用國產染料標記可溶性抗原，以硝酸纖維膜為

34、支架，通過層析技術檢測血吸蟲病人的抗體。檢測日本血吸蟲病具有很高的敏感性和特異性：檢測急性和慢性血吸蟲病的敏感性分別達到96.7%和94.1%-97.2%，非流行區(qū)健康人的特異性達98%以上，具有較高的診斷效能。檢測湄公血吸蟲病的敏感性達97.0%(33/34柬埔寨)和98.6%(69/70老撾)，特異性（非流行區(qū)健康人）達100.0%(0/114)。檢測曼氏血吸蟲?。ò＜埃?6例糞檢陽性的曼氏血吸蟲病人DDIA全部陽性，5例健康者全部陰性。檢測家畜血吸蟲?。号?、豬的敏感性達95.7%-100.0%，特異性達94.0-95.7%。該方法的特點是快速：整個試驗僅需5-10分鐘即可判定結果；簡便：

35、操作簡單，不需專業(yè)培訓即可操作，不需任何特殊的儀器設備；試劑可在室溫保存，運輸中不需冷藏，但酶在運輸中必須冷藏；價廉：染料的價格要比酶和膠體金低幾十倍。該方法本身的特點是：由于應用層析法，反應背景很清晰（較Dot法清晰）；而且在每張試紙條上均設有質量控制對照帶，保證了每份試驗的可靠性。本方法不僅可檢測血吸蟲病人，還可以檢測感染血吸蟲的家畜。該方法既可以檢測日本血吸蟲病，而且還能檢測其他血吸蟲病，例如湄公血吸蟲病和曼氏血吸蟲病。6、DotELISA嚴自助等（1990）建立了應用抗CCA的單克隆抗體檢測血吸蟲循環(huán)抗原的DotELISA方法。這種方法在急性、慢性病人的敏感性分別達到90.6和83.2

36、。非疫區(qū)健康人群無假陽性反應。除與肺吸蟲有交叉反應外（10），與其他寄生蟲的交叉反應較低。大多數病人治愈后1年可轉為陰性，該方法有較好的療效考核價值。以上的免疫診斷方法是目前在我國各地常用的免疫診斷方法，但在我國已建立的方法遠遠不止這些，在實際應用中，需要根據不同的防治目標來選擇不同的免疫診斷方法或不同診斷方法組合。三、免疫學診斷技術在日本血吸蟲病流行病學中的作用在血吸蟲病流行病學調查中，隨著血吸蟲病流行區(qū)的人群感染率和感染度普遍下降，而原有的糞檢篩查方法因其操作繁瑣、漏檢率高而無法滿足流行病學調查的需要時，免疫學方法因其較糞檢敏感且能反映感染的累積狀態(tài)和近期流行情況而逐漸受到重視。憑借著抗原

37、抗體反應的特異性，血吸蟲病的免疫學檢測技術為該病的流行病學調查研究提供了許多有力的測量手段。籍此，血吸蟲病流行病學將現場調查和實驗室免疫學檢測有機的結合起來，大大提高了研究的客觀性與精確性。本節(jié)主要從血吸蟲病血清流行病學調查方法、血清學檢測方法的選擇與評價以及血清流行病學調查的應用等方面作一綜述。（一）調查方法以往的血吸蟲病血清流行病學調查方法主要采用橫斷面調查和重復橫斷面調查。前者大多是對不同程度流行區(qū)或防治結果有差異的地區(qū)不同人群血清中的特異性抗體水平作一橫向比較，以期獲得血清抗體水平與流行狀況之間的關系。后者主要是縱向觀察同一或不同地區(qū)人群血清中特異性抗體水平隨化療等防治措施的開展而動態(tài)

38、變化的情況，以期通過抗體水平的波動規(guī)律反映和評價防治措施的效果。1、橫斷面調查陳淑貞等應用日本血吸蟲腸相關抗原的間接血凝試驗（IHA），對一個現存的和兩個已經基本控制傳播的歷史流行程度不同的血吸蟲病流行區(qū)人群進行血清流行病學的調查。結果發(fā)現，現存流行區(qū)的人群抗體陽性率（67.4%）和陽性抗體滴度平均水平GMRT(119.3)明顯高于基本控制傳播的歷史重流行地區(qū)（21.7%、32.2）和歷史輕流行區(qū)（4.6%、12.6）；現存流行區(qū)低年齡組抗體陽性者的GMRT較高年齡組為高，而已經控制傳播的地區(qū)低年齡組抗體水平則為0；在基本控制傳播地區(qū)，歷史重流行區(qū)高年齡組的抗體陽性率和陽性GMRT均高于歷史輕

39、流行區(qū)。研究者認為，三個地區(qū)的抗體陽性率差異因其選擇的類型不同且調查點較少，不能代表各種典型的流行狀態(tài)，所以難以通過橫向比較來闡明人群抗體水平與當地血吸蟲病流行程度之間的關系。但現存流行區(qū)人群陽性GMRT隨年齡增加而下降的趨勢，與人體對曼氏和埃及血吸蟲特異的成蟲腸相關抗原的體液免疫反應調變現象抗體滴度隨感染持續(xù)時間的延長而下降相一致。這一點在日本血吸蟲病兔模型的連續(xù)觀察中也曾得到證實。因此，在某一特定地區(qū)內，分析當地低年齡組人群的抗體水平，似可作為評價傳播是否阻斷的依據并作為監(jiān)測流行趨勢的工具。而傳播基本控制流行區(qū)內高年齡組人群的抗體反應似可反映當地以往的傳播和感染，且其抗體水平的高低似可作為

40、回顧一個地區(qū)血吸蟲病流行程度的參考指標。在另一對不同流行情況的8個點的橫向血清流行病學調查中，研究者觀察了高度流行區(qū)、中度或低度流行區(qū)和基本控制或基本消滅地區(qū)三種人群抗體反應。結果顯示，在高度流行區(qū)，人群抗體陽性率和總GMRT均高；在傳播已得到一定程度控制的中度或低度流行區(qū)，人群抗體陽性率較高度流行區(qū)的為低，而總GMRT的低水平更為顯著；在基本控制或基本消滅地區(qū)，人群抗體陽性率和總GMRT的水平更低，甚至低年齡組為0。提示總GMRT的低水平可作為傳播頻度下降的指標，而抗體陽性率和總GMRT的年齡分布曲線則反映了傳播和流行程度。流行程度愈高，高峰值的位置愈偏向低年齡組，反之亦然。在云南洱源縣，楊

41、錦亮等對5個不同流行程度地區(qū)亦開展了類似的血清流行病學調查。結果顯示，5個調查點的抗體水平與流行程度相關顯著。與湖區(qū)同類地區(qū)相比，該縣抗體陽性率和高滴度出現率較高而總GMRT較低。作者認為這可能與云南血吸蟲病的高感染率、低感染度的特點有關。研究還顯示，年齡組抗體水平的高峰位置較湖區(qū)同類地區(qū)推遲，且重流行區(qū)抗體反應的全頻率分布曲線與湖區(qū)亦不同。此外，對基本消滅血吸蟲病7年和12年的地區(qū)人群采用間接血凝試驗（IHA）進行檢測，并與正在流行的地區(qū)和非流行區(qū)比較。結果顯示，前者仍維持較低的血凝抗體水平，而后者已下降到正常人群的水平。對年齡分組資料的進一步分析似也證明了低年齡組人群的IHA陽性率和GMR

42、T在一定程度上可反映流行區(qū)控制血吸蟲病的狀況，而高年齡組人群的抗體水平似可反映該地控制感染時間的長短。2、重復橫斷面調查姜耀明等用環(huán)卵沉淀試驗（COPT）對處于重、中、輕度流行的開化縣莊埠村人群血吸蟲病血清抗體進行防治初期、控制及阻斷流行全過程的縱向觀察。結果表明，從1983年到1987年，不同流行程度地區(qū)各年齡組人群的COPT陽性率、總環(huán)沉率幾何均數和高環(huán)沉率的陽性率三項指標值均呈逐年下降趨勢。而且環(huán)沉率全頻率分布曲線也顯示，環(huán)沉率30%的頻率逐年下降，0%組的頻率逐年上升，重、中度流行地區(qū)的環(huán)頻曲線由原先的起點低于尾端的重度型環(huán)頻曲線和起始部顯著高于尾端的中度型環(huán)頻曲線有規(guī)律地轉變成中度型

43、和輕度型環(huán)頻曲線（起點很高，急劇下降而趨于平坦），至1987年各地均呈輕度型。提示COPT檢測人群血吸蟲病抗體水平的消長和環(huán)頻曲線形式及其變化能反映血吸蟲病流行程度及其受控趨向。這與在湖沼地區(qū)的4個不同類型血吸蟲病流行區(qū)連續(xù)3年的縱向調查結果相一致。（二）血清學試驗方法的選擇和質量評價在過去的50多年時間里，血吸蟲病的免疫學診斷方法和技術層出不窮，如COPT、IHA、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、細胞凝集試驗、酶聯免疫印漬技術和膠體染料標記技術等。然而，由于受價格、反應時間和操作要求等多種因素的影響，有很多方法目前僅限于實驗室研究或現場小規(guī)模應用，而真正在大規(guī)模的血清流行病學調查中得以推廣的試驗方法并不多。在血清流行病學調查過程中，血清標本檢測的工作量大，影響因素多。因此，血清學試驗方法的一般選用原則為靈敏度和特異度高、重復性好、操作簡單、經濟安全。同時，大量血清標本的檢測往往需要多個實驗室或較多的實驗員參與。因此，須對實驗條件和操作規(guī)程等進行嚴格的質量控制，同時須對所選用的實驗方法及其檢測結果的真實性與可靠性進行質量評價。為了解我國血吸蟲病防治工作中使用的免疫診斷試劑的綜合質量，許靜等采用單盲法對4種間凝試劑盒、3種ELISA試劑盒、1種層析法試劑盒和1種斑點