TLC展開劑選擇及顯色劑的總結(jié)

1、選擇適當(dāng)?shù)恼归_劑是首要任務(wù)一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概 為:右油迷己烷苯乙«<thf<乙酸乙酯丙酮乙醇petroleumether/ethylacetate, petroleumether/acetone, petroleumether/eth er, petroleumether/ch2cl2, ethylacetate/meoh, chc13/ethy1acetate展開劑的比例要靠嘗試一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開 劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效杲好 的展開劑。展開劑的選擇條件：對的所需成分冇良好的溶解

2、性；可使成分間 分開；待測組分的rf在0.20.8之間，定量測定在0. 30.5之間；不與待 測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點適屮，黏度較??；展開后組分斑點圓且 集中；混合溶劑最好用新鮮配制。一般來說，弱極性溶劑體系的基木兩相由止己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、 乙醇，乙酸乙酯來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達到好的分離效果，適合于生物堿、 黃酮、話類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、 乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合于蔥釀、香豆素，以及-些極性較大的木脂素和 菇類的分離；強極性溶劑，曲正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來 調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很

3、多時候，展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們 在實驗中，為了實現(xiàn)一個配休與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組 合，最后才找到石油瞇etoachc00h （5.5： 3.5： 0. 1）混合溶劑。一般把兩 種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑，如果有分開的跡 象，再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑），達到最佳效果；如杲?jīng)]有分開的跡象（斑 點較“拖”），最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在 展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，毗陀等堿性物質(zhì)來中和硅膠的酸性。（選 擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品屮除去，氨水無疑是較好的選擇

4、。） 分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很冇關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含 水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分 離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對分離效果都 有明顯的影響。溫度，濕度對分離效果影響也很明顯，在實驗中我們發(fā)現(xiàn)有時同 一展開條件，上下午的rf截然不同展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮在進行薄層層析時，首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型，其極性的大致歸屬，從 提取液或從色譜柱的流動相極性可知，另外某樣品里含多種化學(xué)成分先按極性不 同大致分，然后細分，對于分離未知的化學(xué)物質(zhì)，展開劑的選擇也是一個摸

5、索的 過程，不應(yīng)該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程屮溶劑的選擇，對組分分離關(guān)系極大。在柱層析時所用的溶劑（單 一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的 選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極 性吸附劑進行層析時，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，-般選用弱極性溶劑為洗脫 劑；被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如杲對某一極性物 質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦 須相應(yīng)降低。在柱層操作吋，被分離樣品在加樣吋可采用于法，亦可選-適宜的溶劑將樣 品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇

6、極性較小的，以便被分離的成分可以被吸 附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯 度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度 太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有吋可以用溶劑的介電常數(shù) （e ）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附 劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則止好與上述順序相反，在 水或親水住溶劑屮所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑屮為強。3.被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析 屮的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的 分離

7、情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)冇關(guān)。對極性吸附劑而言，成分的極 性大，吸附住強。當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數(shù)目愈多，被吸附 的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊灰?兩個成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分 離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮。首 先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的茹烯，或雖含氧 但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如右油酉迷或苯進 行洗脫。但多數(shù)中拔成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般 iiiiv級

8、）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析 以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還 與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品 極性z間的關(guān)系。如冇多組分的混合物，彖植物油脂系由烷坯、烯坯、舀醇酯類、 廿油三酸醋和脂肪酸等組份。當(dāng)以硅膠為吸附劑時，使油脂被吸附后選用一系列 混合溶劑進行洗脫，油脂屮各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。又如對于c-27笛體皂貳元類成分，能因其分字中疑基數(shù)目的多少而獲得分離: 將混合皂貳元溶于含有5%氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶 劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱

9、的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附 性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含5%氯仿的苯，即可將一元 甕基皂貳元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的屮草藥成分在不同的吸 附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶 劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。（-）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱 層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層 析。其原理與柱層析基木相似。1 薄層層析的特點：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點與柱層析的比較。2. 吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要 區(qū)別在于薄層

10、層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應(yīng)小丁 250目，并要 求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過高，以iiiii級 為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應(yīng)縮短, 一般不超過10厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。3. 展開劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時（如ii或iii級）， 對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定丁展開劑的選擇。屮草藥化洋成分在 脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。 但在實際工作中，顯色劑：碘：扭用于不飽和或者芳香族化合物配制方法：在100ml廣口瓶屮，放入一張濾紙，少許碘粒?；?/p>

11、者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅膠高錨酸鉀適用于含還原性基團化合物，比如疑基，氨基，醛配制方法：l5g kmno4 + 10g k2c03 + 1. 25ml 10% naoh + 200ml水.使用期3個月磷鉗酸（pma）廣譜配制方法：10 g of磷鉗酸+100 ml乙醇紫外燈適用于含共輒基團的化合物，芳香化合物硫酸肺：生物堿配制方法:10%硫酸飾（iv） +15%硫酸的水溶液氯化鐵苯酚類化合物配制方法：1% fec13 + 50%乙醇水溶液.桑色素（輕基黃酮）廣譜，冇熒光活性配制方法:0. 1%桑色素+甲醇前三酮適用于氨基酸配制方法:1.5g苗三酮+ looml of正丁醇+ 3.0ml醋酸二硝基苯月井（dnp）適用于醛和酮配制方法:12g二硝基苯腓+ 60ml濃硫酸+ 80ml水+ 200ml乙醇香草醛（香蘭素）廣譜配制方法:15g香草醛+ 250ml乙醇+2. 5ml濃硫酸渙甲酚綠適用于竣酸，pka<=5. 0配制方法：在100ml乙醇中，加入0. 04g浪甲酚綠，緩慢滴加0.1m 的naoh水溶液，剛好岀現(xiàn)藍色即至。鋁酸肺廣譜配制方法：235 ml水+ 12 g創(chuàng)酸氨+ 0. 5 g創(chuàng)酸肺氨+ 15 ml 濃硫酸茴香醛（對卬氧基苯