醫(yī)學(xué)檢驗畢業(yè)論文78027

1、華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試畢業(yè)論文題目 三種肺炎支原體檢測法的臨床應(yīng)用分析地市 :學(xué)校 :準(zhǔn)考證號:考生姓名:指導(dǎo)老師:年月日華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試辦公室- 2 -三種肺炎支原體檢測法的臨床應(yīng)用分析摘 要目的 探討肺炎支原體（ MP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）法和血清 MP被動凝集法（ MP-Ab）等方法在兒童 MP感染診斷治療過程中的敏感性方法 采用 3MP檢測法對 362 例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進行配對研究， 每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和 PCR，同時取血清做 MP-Ab檢測，對 3 種方法的檢測結(jié)果與臨床診斷治療病例進行回

2、顧性分析。結(jié)果回顧臨床病例診斷MP感染患兒 152 例。 MP快速培養(yǎng)法檢出陽性78 例，陽性率為 51.3%，病程為（ 4.5 ±2.6 ）天； PCR法檢測出陽性 103 例，陽性率為 67.8%，病程為（6.2 ± 3.5 ）天；MP-Ab法檢測出陽性 127 例，陽性率 83.5%，病程（ 8.1 ±4.5 ）天。結(jié)論 3 種 MP檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。關(guān)鍵詞肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)，血清抗體，配對研究華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 3 -目 錄前 言5第一

3、章文獻綜述6§1.1 肺炎支原體的定義6§1.2 肺炎支原體的發(fā)病機制6§1.3 肺炎支原體的分類6§1.4 肺炎支原體的臨床表現(xiàn)6§1.5 肺炎支原體的臨床診斷7§1.6 肺炎支原體的實驗室檢查7第二章材料和方法8§2.1 樣本8§2.2 方法概述8§2.3 臨床診斷 MP 感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)8§2.4 實驗方法9§2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 .9第三章結(jié)果10第四章討論11華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 4 -結(jié) 論12參考文獻12致 謝13附錄14錯誤！未定義書簽。華北理工大學(xué)高

4、等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 5 -前 言肺炎支原體（ mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之，臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約3%10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3 種 MP檢測法對 362 例臨床擬診為呼吸道 （非細菌性） 感染患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準(zhǔn)確做出診治。華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 6 -第一章文獻綜述§1.1 肺炎支原體的定義小

5、兒肺炎支原體肺炎多見于 515 歲兒童，嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細支氣管炎。多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。 X 線改變明顯，多為單側(cè)病變，也可見雙側(cè)病變，以下葉為多見，有時病灶呈游走性，少數(shù)呈大葉性陰影；病程 23 周不等， X 線陰影完全消失比癥狀消退更延長 23 周之久，偶有延長至 6 周者。§1.2 肺炎支原體的發(fā)病機制肺炎支原體肺炎（ Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia， MPP）的發(fā)病機制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、 MP 直接侵入和免疫學(xué)發(fā)病機制等學(xué)說，其中免疫調(diào)節(jié)異常在

6、 MPP的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用§1.3 肺炎支原體的臨床表現(xiàn)1. 多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。2. 可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害，皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見非特異性肌痛和游走性關(guān)節(jié)痛； 也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、 神經(jīng)系統(tǒng)損害、 血尿及溶血性貧血等。3. 全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低及少許干濕羅音者§1.4 肺炎支原體的臨床診斷病原學(xué)診斷肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于被動凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 7 -可提供重要的依據(jù)，可做

7、為臨床診斷MP 感染的優(yōu)先試驗 8 ；氣管肺泡灌洗液MP-DNA測定不僅能診斷MP感染 , 且支氣管肺泡灌洗術(shù)可促進呼吸道癥狀的改善及體征恢復(fù)，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液MP-DNA，痰液 MP-DNA及血清 MP抗體檢測陽性率沒有差異。 CRP的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法，一定程度可區(qū)分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)技術(shù)檢測 MP具有可靠、特異性高的特點，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。§1.5 肺炎支原體的實驗室檢查急性期 MPP患兒血清 hs-CRP、C3、 CA、IgM、IgG 明顯升高， IgA 明顯降低；而恢復(fù)期 hs-CR、IgG 仍然

8、較高，而 IgM 和 IgA 均沒有明顯變化，補體 C3、C4在恢復(fù)期內(nèi)也沒有明顯變化，因此血清C-反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監(jiān)測對診斷急性期或恢復(fù)期MPP有重要意義。 MP-IgM 和冷凝集試驗同時檢測可提高小兒支原體肺炎實驗診斷的準(zhǔn)確率；支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占80%，中性粒細胞增高占61%；65.6%患兒 C-反應(yīng)蛋白增高； 53.6%患兒血沉增快；58.4%患兒心肌酶譜增高； 24.0%患兒肝酶增高； 16.8%患兒尿酸增高。 5 流行病學(xué)特點及進展MP 肺炎發(fā)生率約為 22.3%，9 12 歲感染率最低 ,3 6 歲最高 ,10 12 月是發(fā)病高峰月 , 小兒支原休

9、肺炎發(fā)病率有所上升 , 發(fā)病年齡有趨小傾向 , 秋冬季發(fā)病率高 , 肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播，尤其發(fā)病率較高的地區(qū)，局部區(qū)域每隔 3-5 年可發(fā)生一次肺炎支原體感染， 每 2-6 年可發(fā)生一次大范圍的肺炎支原體感染，每次感染的時間都持續(xù)較長，有的感染可持續(xù)一年左右，因此，有關(guān)部門一定要采取相應(yīng)的預(yù)防措施， 切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發(fā)生和流行具有重大意義?？刂浦гw感染的發(fā)生和流行。華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 8 -第二章材料和方法§2.1樣本收集黃河中心醫(yī)院檢驗科 2013 年 1 月 1 日 8 月 6 日在兒科就診住院患兒病例，有呼吸道感染癥狀，已

10、經(jīng)初診為非細菌性感染的患兒 362 例作為研究對象，其中男 175 例，女 187 例；年齡為 2 個月 12 歲，病程為 1 90 天。§2.2 方法具體方法有：（1）用 MP快速培養(yǎng)法、 PCR法和 MP-Ab法等 3 種 MP檢測法對362 例研究對象同時進行檢測，記錄結(jié)果。 （ 2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP感染的例數(shù)，并按年齡、病程和3 種 MP檢測法結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。§2.3 臨床診斷 MP感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)按文獻 1、臨床癥狀、體征標(biāo)準(zhǔn)，包括回顧性診斷即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、 頭孢菌素治療無效者等； 以及實驗室檢查 3 種檢測法至少有一種陽性。病程計

11、算方法： 以病歷本記錄為準(zhǔn)， 即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文- 9 -§2.4 MP 快速培養(yǎng)法支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術(shù)有限公司提供。清晨患兒未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，嚴(yán)格按說明書進行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預(yù)溫的培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時，瓶底有藍色顆?；蛭镔|(zhì)沉淀為陽性，5 天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍色顆粒或物質(zhì)沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學(xué)達安基因股份有限公司提供。應(yīng)用PCR法檢測 MP-DNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書進

12、行，以在紫外燈下 出現(xiàn) 180 bp擴增 帶 結(jié)果判 為陽 性。 每次 試驗 均設(shè) 陽性 、 陰性對照（陽性對照為 MP質(zhì)粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進行操作， 質(zhì)量 控制 。 MP-Ab 法：試劑 為日 本瑞 必歐 株式 會社 MP-Ab 檢測試劑SERODIA-MYCO 凝集試驗試劑盒，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，抽 取患 兒靜 脈 血3 ml ，采 用明 膠 顆粒 被動 凝集 法， 用血 清檢 測 ，結(jié)果以140 判斷為陽性。每 次試驗均設(shè)未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進行測定。§2.5統(tǒng)計學(xué)方法計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）表示，各年

13、齡組與 3 種檢測方法結(jié)果比較華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文-10-用 Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用2 檢驗；3 種檢測方法陽性結(jié)果與病程之間的比較用q 檢驗。第三章結(jié)果§3.1陽性樣本經(jīng)過回顧性診斷，在配對研究組 362 例研究對象中有 152 例符合 MP感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即有 152 例確診病例，其中肺炎 45 例，支氣管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支氣管哮喘 2 例。 MP快速培養(yǎng)法檢測出 78 例陽性， PCR法檢測出 103 例陽性， MP-Ab法檢測出 127 例陽性。§3.2結(jié)果分析各確診病例的年齡分布，見表1。表

14、1 顯示兒童 MP感染的年齡以 34 歲年齡段的病例最多，為 46 例，陽性率最高，為 70.77%，與其余年齡組段比較P<0.05。3 種檢測法的陽性檢測結(jié)果與年齡分布見表1，表 1 顯示 3 種檢測法與年齡之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義， 以 34 歲的年齡段與其余年齡組段比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。不同病程患兒3 種檢測法的檢測結(jié)果，見表2，表 2 顯示 MP快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為（4.5 ±2.6 ）天， PCR法為陽性的患兒病程均值為（ 6.2 ±3.5 ）天， MP-Ab 法為陽性的患兒病程均值較長為（8.1 ±4.5 ）天。

15、3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。表 1 不同年齡組MP感染確診病例和 3 種檢測方法結(jié)果對比分析注：代表與年齡組34 歲組段比較結(jié)果表 2 不同病程患兒 3 種檢測方法陽性結(jié)果對比分析注：代表三組之間的兩兩比較華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文-11-第四章討論1 MP 感染的臨床表現(xiàn)常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀： （ 1）發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰，偶帶血絲。（2）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。 （3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。 （4） WBC正?；蛏?。（

16、 5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有效。（ 6）實驗室 MP檢驗有 1 項或 1 項以上陽性具備以上 2 個條件或以上者可初步診斷為 MP感染。多時候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)患兒的癥狀、體征和病史做 MP感染的診斷性治療，但應(yīng)與肺結(jié)核相互鑒別。2 近年來由于診斷技術(shù)的提高， MP感染報道日漸增多， 一般認為 MP感染以年長兒發(fā)病較多，本文表 1 資料顯示， 28 歲年齡段是發(fā)病的高峰期 2。占同期呼吸免疫科住院患兒的 9.3%，比有關(guān)文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的 10%20%低。說明 MP感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不

17、典型。3 臨床實驗室檢測 MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷MP感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響 3。本文采用配對資料研究，對疑為 MP 感染的患兒進行 3 種 MP檢測法，以探討 MP快速培養(yǎng)法、 PCR法和 MP-Ab法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。 提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。4 MP快速培養(yǎng)法是利用 MP生長代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中指示劑顏色發(fā)生改變來判斷 MP生長；標(biāo)本中的其他支原體和細菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結(jié)果可48 h檢出。結(jié)果顯示，培養(yǎng)法陽性率為51.3%（ 78/15

18、2 ），低于另外兩種方法的陽性率。 可能與在檢測前患兒已經(jīng)用了 MP敏感藥物有關(guān)。表 2 結(jié)果顯示， 該法陽性病例病程最短。 提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。 MP培養(yǎng)是診斷 MP的金標(biāo)準(zhǔn) 4。5 咽拭子 PCR法檢測質(zhì)粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術(shù)可從患兒痰中檢測 MP-DNA。由于此方法相當(dāng)敏感，易受污染，故實驗室操作時應(yīng)特別小心。統(tǒng)計結(jié)果顯示，該法的陽性率為 67.76%（103/152 ），高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的 MP不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表 2 結(jié)果顯示，該法陽性病例，病程為（ 6.2 ± 3.5 ）天。詳細資料顯示，有病程在 30 天以上的患兒經(jīng)抗 MP治療，該法仍可為陽性， 說明 MP的生存力相當(dāng)強， 要系統(tǒng)化治療。華北理工大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科畢業(yè)論文-12-血清 MP-Ab法陽性率是 3 種檢測方法中最高的，為 83.55%（ 127/152 ），該法是檢測患兒血清中的 MP抗體，而非直截了當(dāng)檢測 MP本身，因而陽性結(jié)果并不能確診是 MP感染。對患兒狀態(tài)的綜合評估應(yīng)包括對患者臨床癥狀和試驗結(jié)果的嚴(yán)謹(jǐn)分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些 MP感染的患者不產(chǎn)生抗體或只產(chǎn)生少量的抗體， 高抗體滴度的樣品要出現(xiàn)前