腫瘤生物治療-------戰(zhàn)勝癌癥的希望

1、腫瘤生物治療-戰(zhàn)勝癌癥的希望劉華 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院腫瘤生物治療研究室主任，客座教授惡性腫瘤的危害盡管我國和許多發(fā)達(dá)國家花費(fèi)巨額資金和大量人力進(jìn)行研究攻克癌癥，但至今尚未取得根本性的進(jìn)展，總體療效很不理想，許多癌癥患者的長期生存率仍然很低。據(jù)美國癌癥學(xué)會(huì)（American Cancer Society）分析，2007年全世界約有腫瘤患者 1200萬，其中760萬人死亡，每天達(dá) 2 萬人。而在2050年全世界將有腫瘤病人2700 萬，其中有1700 萬患者死亡。過去的三十年中，我國的癌癥發(fā)病率增加了80%。每年有260萬人被診斷為癌癥，同時(shí)有180萬病人死于惡性腫瘤。近幾年來，惡行腫瘤發(fā)病率在

2、中國呈明顯上升和年輕化的趨勢，嚴(yán)重威脅人民的生命和健康。惡性腫瘤治療十分困難的主要原因?yàn)槭侵挥猩贁?shù)患者能夠在早期被發(fā)現(xiàn)，接受手術(shù)根治性治療。而大多數(shù)惡性腫瘤病人在診斷時(shí)已屬于中晚期，喪失了手術(shù)機(jī)會(huì)或手術(shù)不能全部切除，或手術(shù)后仍有殘留的腫瘤細(xì)胞。這些病人常選擇采用化療和放療。數(shù)十年的經(jīng)驗(yàn)證明，化療和放療是行之有效的治療方法，但也有一些不足之處?；熀头暖煹耐ú∈牵旱谝?，療效不夠理想，例如不能殺滅腫瘤干細(xì)胞。第二，容易產(chǎn)生耐藥性，以致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。第三，毒副作用嚴(yán)重，極大地影響了腫瘤患者的生活質(zhì)量。第四，損傷患者的免疫功能，放化療常導(dǎo)致腫瘤患者機(jī)體免疫力明顯降低，不利于腫瘤的控制。較新的靶向治療

3、藥物雖能減輕一些副作用，但同樣有療效不夠理想和不持久，容易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)，而且治療費(fèi)用昂貴。因此，臨床上迫切需要有一種療效確切，對防止腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有很好的作用，不容易產(chǎn)生耐藥性，安全可靠，毒副作用輕微，同時(shí)能提高腫瘤患者自身的抗腫瘤的免疫功能的新型治療方法。什么是腫瘤生物治療腫瘤生物治療是以現(xiàn)代免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等前沿學(xué)科為基礎(chǔ)，利用機(jī)體對腫瘤的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，通過生物手段或使用生物制劑來提供主動(dòng)或被動(dòng)免疫以期激活機(jī)體對腫瘤的主動(dòng)免疫排斥反應(yīng)，進(jìn)而達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞和根治腫瘤的比較理想的新療法。對控制免疫系統(tǒng)的細(xì)胞和分子調(diào)控機(jī)制的深入了解為我們提供了尋找更多的新型且前途廣闊的

4、癌癥免疫新療法的有利條件。免疫療法已成為多種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)治療方法。例如：單克隆抗體、免疫佐劑以及致癌病毒疫苗已經(jīng)成為行之有效的抗腫瘤療法。美國國家食品與藥品管理局于2010年4月29日正式批準(zhǔn)了腫瘤生物治療藥物 Provenge 的臨床應(yīng)用。Provenge 是美國西雅圖的一家公司 (Dendreon Corp.) 的產(chǎn)品。臨床應(yīng)用于前列腺癌患者的治療。2011年3月25日，美國國家食品與藥品管理局又批準(zhǔn)了Yervoy作為治療晚期惡性黑色素瘤的藥物。這一藥物可以阻礙CTLA-4分子，增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)抗腫瘤的功能。腫瘤生物治療本質(zhì)上屬于一種生理性治療措施，這些以細(xì)胞和免疫為基礎(chǔ)的治療方法是通過和化

5、療或放療治療不同的作用機(jī)理，代表了一個(gè)非交叉性的耐藥性，而且其毒性也與化療和放療完全不同。其抗腫瘤的特異性和免疫記憶是其它方法所不能比擬的。由于生物治療具有安全性好、毒副作用低、可反復(fù)多次使用，是一種治療惡性腫瘤的人性化的治療方法。在防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移方面，生物治療的地位更為重要。腫瘤生物治療的基本假設(shè)是，在適當(dāng)?shù)臈l件下，惡性細(xì)胞是能夠被人體的免疫系統(tǒng)識別和攻擊的。在過去的50年中，人們主要采用了二種不同的方法來激發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。第一種方法是主動(dòng)性免疫治療。主動(dòng)免疫治療的目的是恢復(fù)和增強(qiáng)宿主受損的抗腫瘤的免疫反應(yīng)，包括使用腫瘤疫苗，細(xì)胞因子和共刺激因子。另一種方法是被動(dòng)性免疫治療。被

6、動(dòng)免疫包括轉(zhuǎn)輸經(jīng)體外培養(yǎng)的免疫效應(yīng)細(xì)胞（稱為過繼性免疫治療）或應(yīng)用具有抗腫瘤活性的抗體。惡性腫瘤細(xì)胞至少具有六個(gè)特點(diǎn)：1，具有足夠的自我生長信號。2，對生長抑制信號具有耐受性。3，對細(xì)胞凋亡有耐受性。4，具有無限制生長能力。 5，持續(xù)的血管生成能力。 6，有細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力。與這些腫瘤細(xì)胞特征有關(guān)的蛋白質(zhì)組分代表了對治療干預(yù)的理想的靶點(diǎn)。具有重要意義的是，這些靶點(diǎn)是所有威脅生命的惡性腫瘤細(xì)胞共同的本質(zhì)上的特征。因此基于這些特征的分子靶點(diǎn)治療可用于絕大多數(shù)腫瘤，甚至是全部腫瘤的治療。已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)的與這些腫瘤特征有關(guān)的幾個(gè)蛋白質(zhì)歸納如下：1，與細(xì)胞分裂有關(guān)的蛋白質(zhì) (端粒酶, Cyp1B1 和 sur

7、vivin)。2，與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白質(zhì)(survivin, ML-IAP, Bcl-2, Bcl-X(L), 和 Mcl-1)。3，與細(xì)胞轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白質(zhì) (Heparanase)。4，與血管生存有關(guān)的蛋白質(zhì)(survivin, Bcl-2 和 VEGFR)。5，與藥物耐受有關(guān)的蛋白質(zhì) （細(xì)胞色素 P450 CYP 1B1和P-glycoprotein）。這些蛋白質(zhì)都是潛在的腫瘤抗原。已有研究表明，在卵巢癌和直腸結(jié)腸癌等多種癌癥患者中，免疫細(xì)胞在腫瘤中的浸潤程度是一個(gè)很好的判斷預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。研究癌癥患者其腫瘤伴隨的免疫細(xì)胞浸潤和預(yù)后的關(guān)系也表明，在腫瘤病灶中有大量免疫細(xì)胞浸潤的患者（尤其

8、是活化的CD8+T細(xì)胞），治療后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移明顯減少。以過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞和其它生物技術(shù)為基礎(chǔ)的治療方法已被廣泛用于在不同的臨床和實(shí)驗(yàn)室條件下治療各種惡性腫瘤并取得了良好的療效?；剌?shù)拿庖咝?yīng)細(xì)胞可以主動(dòng)地識別和消滅腫瘤細(xì)胞，然后以記憶細(xì)胞的形式在體內(nèi)長期生存，監(jiān)視和清除體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。腫瘤生物治療具有以下的優(yōu)點(diǎn)：n 選擇性高，可以區(qū)分自體和非己的組織和細(xì)胞n 毒副作用輕，例如可用自體的淋巴細(xì)胞。n 對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用徹底，包括可消滅腫瘤干細(xì)胞n 作用多樣性，例如特異性和非特異性免疫、細(xì)胞和體液免疫等n 有記憶性（記憶和中央記憶效應(yīng)細(xì)胞）n 通過細(xì)胞因子的作用放大治療效果n 細(xì)胞毒

9、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷具有自我限制性n 不容易產(chǎn)生耐藥性 （Antigen Spreading）生物治療作為繼手術(shù)、放療和化療后治療腫瘤的第四模式，是目前腫瘤綜合治療模式中最活躍、最有前途的手段，也是今后癌癥治療的一個(gè)主要方向。生物治療有望達(dá)到完全消滅根治癌細(xì)胞的目的，并將逐漸取代其他方式成為未來癌癥治療的主要方向。目前用于抗腫瘤治療的免疫細(xì)胞有以下一些種類：1. LAK細(xì)胞1982年Grimm等首先報(bào)道外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中加入IL-2體外培養(yǎng)4-6天，能誘導(dǎo)出一種非特異性的殺傷細(xì)胞，這類細(xì)胞可以殺傷多種對CTL、NK不敏感的腫瘤細(xì)胞。目前尚未發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞特有的表面標(biāo)

10、志，許多實(shí)驗(yàn)表明，LAK細(xì)胞的前體細(xì)胞是NK細(xì)胞和T細(xì)胞。1984年11月Rosenberg研究組經(jīng)美國食品和藥品檢驗(yàn)局（US Food and Drug Administration,FDA）批準(zhǔn)下，首次應(yīng)用IL-2與LAK協(xié)同治療25例腎細(xì)胞癌、黑素瘤、肺癌、結(jié)腸癌等腫瘤患者。治療用LAK細(xì)胞數(shù)量在0.6-18.4×1010，IL-2用量2.8×105-3.32×106U/kg。其中11例腫瘤縮小超過50%，1例黑素瘤完全消退。1988年該研究組總結(jié)了IL-2與LAK細(xì)胞協(xié)同治療222例腫瘤患者，其中16便患者腫瘤轉(zhuǎn)移灶完全消退，26例患者腫瘤消退50%以上，

11、該療法對轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌、黑素瘤、結(jié)腸癌和非何杰金氏淋巴瘤患者的療效較顯著。有報(bào)道乳腺癌、膀胱癌局部應(yīng)用IL-2進(jìn)行治療也獲得明顯療效。由于IL-2用量大，在治療過程中可出現(xiàn)毒副反應(yīng)，最常見和最嚴(yán)重的毒副作用是出現(xiàn)毛細(xì)血管滲漏綜合征（Capillary Leak Syndrome, CLS）。2. TIL細(xì)胞1986年Rosenberg研究組又首先報(bào)道了腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞 （Tumor Infiltrating Lymphocyte, TIL）。用機(jī)械處理和酶消化方法，從腫瘤局部分離出腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞，加入高劑量IL-2體外培養(yǎng)，殘存的腫瘤細(xì)胞7-13天全部死亡，擴(kuò)增的淋巴細(xì)胞可供治療。TIL細(xì)

12、胞表型具有異質(zhì)性，絕大多數(shù)為CD3陽性。不同腫瘤來源的TIL細(xì)胞中，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞的比例有差異，大多數(shù)情況下以CD8+T細(xì)胞為主。新鮮分離的TIL中CD25+細(xì)胞百分率較低，隨著體外加IL-2培養(yǎng)時(shí)間的延長，CD25+細(xì)胞百分率逐漸升高。NK細(xì)胞的標(biāo)記（CD16，CD56）在TIL體外加IL-2培養(yǎng)過程中有先增高后降低的趨勢。經(jīng)IL-2活化的TIL與來自PBMC的LAK細(xì)胞比較，其特點(diǎn)是：（1）在治療中可以減少效應(yīng)細(xì)胞和IL-2的用量，而且對LAK治療無效的晚期腫瘤仍有一定治療效果；（2）主要由CD8陽性細(xì)胞誘導(dǎo)而來，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TIL殺傷腫瘤作用具有特異性；（3）宿主的抑

13、制狀態(tài)有利于TIL的殺傷作用，因此治療時(shí)加用環(huán)磷酰胺（Cy）100mg/kg可明顯提高療效，可能與免疫抑制藥能消除抑制性細(xì)胞或因子，增強(qiáng)過繼免疫治療作用有關(guān)，因而可減少IL-2的用量，降低毒副反應(yīng)；（4）可從手術(shù)切下腫瘤組織、腫瘤引流淋巴結(jié)、癌性胸腹水中獲得淋巴細(xì)胞，經(jīng)加IL-2培養(yǎng)后，其生長、擴(kuò)增能力強(qiáng)于LAK細(xì)胞。已有報(bào)道應(yīng)用TIL治療14例轉(zhuǎn)移性肺癌等晚期腫患者，其中4例腫瘤縮小50%以上，副作用明顯低于IL-2/LAK療法。3. CIK細(xì)胞1991年美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院骨髓移植研究中心報(bào)道了具有高增殖能力和高細(xì)胞毒性的細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞（CIK，Ccytokine-Induced K

14、iller）細(xì)胞，受到了人們的高度重視和很大的興趣。 Wolf等人研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞15天的培養(yǎng)細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)為754倍，而LAK細(xì)胞僅增長19倍。30天的培養(yǎng)CIK細(xì)胞可增長1000倍以上。在體外實(shí)驗(yàn)中，比較CIK細(xì)胞和LAK細(xì)胞的殺傷活性發(fā)現(xiàn)，CIK細(xì)胞在第10-28天時(shí)，可殺傷2.5-3.5個(gè)對數(shù)級的腫瘤細(xì)胞，而LAK細(xì)胞僅能殺傷0.5-1.5個(gè)對數(shù)級的腫瘤細(xì)胞。CIK細(xì)胞對多藥耐藥的腫瘤細(xì)胞系同樣有殺傷作用和高的敏感性。在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）鼠/人淋巴瘤模型的CIK細(xì)胞體內(nèi)抗腫瘤研究中，SCID鼠未注入CIK細(xì)胞和注入LAK細(xì)胞組的小鼠在40天內(nèi)全部死去，而注入CIK

15、細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞株組80%以上的小鼠在100天也未見長腫瘤。美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院骨髓移植研究中心（Verneris）進(jìn)行了I和II期臨床試驗(yàn)，并取得了有意義的結(jié)果。1998年斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院和Becton Dickinson公司BDIS免疫中心，在臨床試驗(yàn)中，檢測到病人的激活的CIK細(xì)胞能分泌多種細(xì)胞因子，如IL-2、IFN-r、TNF-a等。在2000年斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院又報(bào)道了惡性腫瘤表達(dá)的Fas配體（FasL）誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞凋亡對細(xì)胞免疫治療影響的臨床研究，CIK細(xì)胞能克服該影響。在1999年，德國洪堡大學(xué)醫(yī)學(xué)院也進(jìn)行了應(yīng)用IL-2基因轉(zhuǎn)染的自體CIK細(xì)胞在患有腎癌、黑色素瘤和淋巴瘤轉(zhuǎn)移病人

16、的I期臨床試驗(yàn)，取得了較好的臨床結(jié)果，IL-2基因轉(zhuǎn)染的自體CIK細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后，在2周后，用PCR檢測法仍能在外周血中檢測到IL-2基因轉(zhuǎn)染的自體CIK細(xì)胞的存在，在取得初步的結(jié)果的基礎(chǔ)上，將作進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)。4. 樹突狀（DC）細(xì)胞 1973年Steiman和Cohn首次從脾臟中分離出樹突狀細(xì)胞 (Dendritic Cells，DCs)。 它是機(jī)體功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞(Antigen Presenting Cells, APC)，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原。未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。DC與腫瘤的

17、發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系，大部分實(shí)體瘤內(nèi)浸潤的DC數(shù)量多則患者預(yù)后好。有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)的核心是產(chǎn)生以CD8+ T細(xì)胞為主體的細(xì)胞免疫應(yīng)答，這也是DC作為免疫治療手段的基礎(chǔ)。最新研究顯示DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后,提高了細(xì)胞的增殖速度和殺傷活性,且使其對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用更具特異性。而且DCCIK細(xì)胞對于血液、消化、呼吸、泌尿及生殖系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞均有殺傷作用。Steiman也因他在“樹狀細(xì)胞及其在適應(yīng)性免疫系統(tǒng)方面作用的發(fā)現(xiàn)”取得的成就，與Hoffmann、Beutler共同獲得了2011年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。值得一提的是，Steiman 2006年就查出胰腺癌晚期。在醫(yī)學(xué)上，晚

18、期胰腺癌的惡化程度高，生存期不會(huì)超過6個(gè)月。然而，Steiman教授正是應(yīng)用了自己的研究成果，使用DC細(xì)胞療法，成功地將生命延長了四年。5. 細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞1996年，美國西雅圖生技公司曾經(jīng)開發(fā)出了T細(xì)胞治療方法，希望通過加快淋巴細(xì)胞恢復(fù)來提高腫瘤的治療效果。為此Xcyte公司獲得了該T細(xì)胞治療方法的專利技術(shù)。但是由于該產(chǎn)品的抗腫瘤特異性效果不理想，導(dǎo)致腫瘤的殺傷效果不強(qiáng)，該公司已在2005年宣告解體。針對人類的惡性腫瘤一般具有抗原性弱、不容易為免疫細(xì)胞所識別；目前臨床所用的具有免疫活性的致敏淋巴細(xì)胞的治療方法都有難以獲得足夠數(shù)量的具有高度特異性抗腫瘤生物學(xué)效應(yīng)的淋巴細(xì)胞；以及普遍存在的腫瘤

19、疫苗的特異性效應(yīng)不強(qiáng)，臨床效果不確切這三大缺點(diǎn)，我們首創(chuàng)了一種獨(dú)特的方法來制備具有強(qiáng)大和多種抗腫瘤生物學(xué)效應(yīng)的免疫效應(yīng)細(xì)胞。我們所提出的新概念和新方法主要是改善腫瘤細(xì)胞的抗原性，提高免疫細(xì)胞的致敏性并促進(jìn)其分化和增生，以及增強(qiáng)致敏免疫細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。較好地克服了各種目前常用的免疫治療方法的不足之處。2006年，我們在創(chuàng)建體外三維腫瘤生物模型和利用其觀察細(xì)胞免疫治療方法的基礎(chǔ)上，提出了一個(gè)制備新一代抗腫瘤免疫細(xì)胞的新概念和新方法。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在三維模型中將免疫細(xì)胞與滅活的腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)可以誘導(dǎo)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的顯著殺傷作用，同時(shí)伴有免疫細(xì)胞的顯著增生。這提示三維腫瘤模型不僅有利于模擬體

20、內(nèi)腫瘤生長方式，更為重要的是，其所形成的微環(huán)境有利于免疫細(xì)胞的增生和效應(yīng)發(fā)揮，最終消滅腫瘤。與目前所采用的其他方法比較，腫瘤細(xì)胞在三維培養(yǎng)狀態(tài)下較全面地體現(xiàn)了體內(nèi)實(shí)體腫瘤所具有的生物學(xué)特性和基因表達(dá)，較好地表達(dá)了腫瘤細(xì)胞的抗原性。因此，三維腫瘤生物模型可增加腫瘤抗原的數(shù)量和提高抗原的質(zhì)量，提供一個(gè)與體內(nèi)實(shí)體腫瘤類似的抗原的來源。同時(shí)，三維環(huán)境也為免疫效應(yīng)細(xì)胞充分發(fā)揮功能提供了一個(gè)理想的場所。通過類似于體內(nèi)細(xì)胞免疫的三維環(huán)境，免疫細(xì)胞可以有效地識別和采集抗原，充分調(diào)動(dòng)以T細(xì)胞對靶細(xì)胞的特異性識別為前提的各種免疫細(xì)胞協(xié)調(diào)的抗腫瘤免疫應(yīng)答。體外三維環(huán)境不僅可供腫瘤細(xì)胞充分表達(dá)具有異質(zhì)性的腫瘤抗原，也

21、提供了激活抗原所需的共刺激因子和細(xì)胞因子的環(huán)境，同時(shí)還有助于克服體內(nèi)可能的不利環(huán)境。通過剔除一些不相關(guān)的和可能抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì)，消除對免疫細(xì)胞的負(fù)面調(diào)節(jié)作用，有利于更好地制備抗腫瘤的免疫效應(yīng)細(xì)胞。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞是一類可殺傷表達(dá)特異性抗原靶細(xì)胞的T細(xì)胞亞群。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞是抗細(xì)胞內(nèi)感染、急性同種異型移植物排斥反應(yīng)和殺傷腫瘤的主要效應(yīng)細(xì)胞。研究人員發(fā)現(xiàn)，機(jī)體內(nèi)抵御病毒和腫瘤的細(xì)胞有 “立刻保護(hù)” 和 “長期保護(hù)”的分工：一類帶有 “戰(zhàn)士” 分子標(biāo)記，能直接殺滅腫瘤細(xì)胞或病毒；另一類則顯示 “記憶細(xì)胞” 的特征，能潛伏多年以防未來的腫瘤復(fù)發(fā)或病毒再次入侵。我們所獲得的免疫細(xì)胞在早期幾天內(nèi)就

22、具有免疫學(xué)活性，表現(xiàn)為免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞抗原的采集和傳遞、阻止腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、以及直接殺傷和裂解腫瘤細(xì)胞等多種多樣的生物學(xué)效應(yīng)。例如我們可以觀查到大量致敏淋巴細(xì)胞黏附和覆蓋于腫瘤細(xì)胞的表面或者其邊緣，阻止腫瘤細(xì)胞的生長；或在腫瘤邊緣監(jiān)視腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)；或是形成一道由淋巴細(xì)胞組成的屏障阻止腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。如發(fā)生腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移時(shí)，免疫效應(yīng)細(xì)胞會(huì)對這些轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行攻擊以殺滅這些轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺滅的整個(gè)過程表現(xiàn)為免疫效應(yīng)細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行穿孔、然后腫瘤細(xì)胞的胞漿從穿孔處流出、接著其他淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞以接觸的形式進(jìn)行攻擊、對部份細(xì)胞膜進(jìn)行剝離、最后由致敏活化的巨噬細(xì)胞吞噬整個(gè)腫瘤

23、細(xì)胞。亦可觀察到致敏的小淋巴細(xì)胞和肝癌細(xì)胞進(jìn)行接觸后，腫瘤細(xì)胞在數(shù)分鐘內(nèi)就被完全溶解。巨噬細(xì)胞對于腫瘤細(xì)胞的殺傷作用和過程表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞首先和腫瘤細(xì)胞發(fā)生接觸，通過一定時(shí)間，推測是觸發(fā)應(yīng)答，啟動(dòng)興奮和激活階段，最終將腫瘤細(xì)胞吞噬消滅。在體外我們還觀察到實(shí)體腫瘤被致敏的免疫效應(yīng)細(xì)胞攻擊，最終明顯縮小和消失的過程。CD8 T細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn)：n 能特異性的識別腫瘤細(xì)胞n 與腫瘤細(xì)胞可發(fā)生緊密的接觸和黏附從而產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)n 通過多種途徑殺滅腫瘤細(xì)胞n 對白細(xì)胞介素-2的依賴低n 長效的記憶細(xì)胞有利于發(fā)揮抗腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用我們已治療了近500例多種實(shí)體腫瘤如肝癌、腸癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵

24、巢癌、淋巴瘤和胰腺癌等，以及白血病患者。我們治療的病人大多為晚期腫瘤，患者多數(shù)有各種臨床癥狀和多處轉(zhuǎn)移，包括癌性胸水和腹水。接受我們的免疫效應(yīng)細(xì)胞治療后多數(shù)患者的臨床癥狀有明顯改善，伴隨著腫瘤的縮小和腫瘤標(biāo)志物的明顯下降或恢復(fù)正常，以及生存期的延長。另外，我們還觀察到這一治療方法可激活晚期腫瘤患者的細(xì)胞和體液免疫功能，表現(xiàn)為外周血中的單核細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著增多以及免疫球蛋白IgG和IgA的明顯升高。此外，治療后患者腫瘤組織中可見大量激活的淋巴細(xì)胞的浸潤。我們研制的免疫效應(yīng)細(xì)胞的臨床應(yīng)用安全、有效。接受免疫效應(yīng)細(xì)胞治療的病人通常僅有輕到中等度的發(fā)熱，未見有其他明顯的毒副反應(yīng)。我們的方法具

25、有整體和系列的創(chuàng)新性及相關(guān)的自主知識產(chǎn)權(quán)。包括三維細(xì)胞培養(yǎng)裝置、體外腫瘤生物模型、高效的免疫細(xì)胞。我們部分研究結(jié)果已經(jīng)在第七屆亞洲臨床腫瘤學(xué)大會(huì)暨第九屆全國腫瘤學(xué)大會(huì)、腫瘤多學(xué)科綜合治療暨首屆腫瘤靶向治療東方國際論壇、2006亞太地區(qū)國際腫瘤生物學(xué)和醫(yī)學(xué)會(huì)議和 “第18屆歐洲癌癥學(xué)會(huì)-美國國立癌癥研究所-美國癌癥研究學(xué)會(huì)聯(lián)合大會(huì)“（18th EORTC-NCI-AACR Symposium）和2007年AACR等國內(nèi)外學(xué)術(shù)會(huì)議上報(bào)告。我們的一些論文和文章摘要刊登在 ”腫瘤”、“歐洲癌癥雜志” 和中國臨床腫瘤學(xué)教育專輯（2006）等期刊上。其中“三維腫瘤生物模型的創(chuàng)建從體外腫瘤生物學(xué)研究到臨床應(yīng)

26、用“ 被評為2006 年度中國臨床腫瘤學(xué)優(yōu)秀論文，榮獲中國臨床腫瘤學(xué)科學(xué)基金的獎(jiǎng)勵(lì)。2007年我國權(quán)威官方新聞機(jī)構(gòu)新華網(wǎng)對我們的工作進(jìn)行了專門報(bào)道，題為我國科學(xué)家首次成功構(gòu)建三維腫瘤模型，將原本在人體內(nèi)生長發(fā)展的癌細(xì)胞放到體外觀察培養(yǎng)，直至消滅，有望成為我國在國際腫瘤科學(xué)研究領(lǐng)域的新突破口。解放日報(bào)、文匯報(bào)以及國內(nèi)的眾多媒體都進(jìn)行了轉(zhuǎn)載。我們的研究工作也被列為2007年度中國國內(nèi)十大醫(yī)學(xué)新聞評選的候選第五條新聞。我們的項(xiàng)目也得到了上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)和國家自然科學(xué)基金會(huì)的寶貴支持和資助。什么病人適合于腫瘤生物治療過繼性細(xì)胞免疫治療可用于絕大多數(shù)腫瘤患者，如淋巴瘤、肝癌、肺癌、腎癌、乳腺癌、胃癌

27、、大腸癌、卵巢癌、惡性黑色素瘤等。治療的主要適應(yīng)癥包括：n 手術(shù)后患者，用于清除微小轉(zhuǎn)移病灶，防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移n 已經(jīng)喪失手術(shù)機(jī)會(huì)的患者n 放療、化療失敗的患者和無法進(jìn)行放療、化療的中晚期患者n 接受放化療后出現(xiàn)嚴(yán)重毒副反應(yīng)，不能繼續(xù)耐受的病人n 局部或介入治療后病人n 接受靶向治療患者n 癌性胸、腹腔積液、心包積液患者n 其他沒有禁忌癥的患者如有以下情況，應(yīng)該慎用或禁用生物治療：n 懷孕婦女n 有其他免疫缺陷疾病或器官移植史者n 一周內(nèi)使用過大劑量糖皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑者 ( 包括化療 )n 心、肺、肝、腎或骨髓功能明顯低下者n 有嚴(yán)重過敏史或活動(dòng)性感染者n 重度黃疸什么時(shí)候和如何進(jìn)

28、行腫瘤生物治療：根據(jù)每個(gè)患者的具體病情，醫(yī)生與患者或家屬討論并擬定抗腫瘤治療方案采集患者外周血50毫升，分離單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增。腫瘤生物治療應(yīng)在醫(yī)院進(jìn)行，醫(yī)院提供相應(yīng)的醫(yī)療條件，確保遵循GCP（Good Clinic Practice) 的準(zhǔn)則提供精心的臨床治療。同時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室遵循GTP (Good Tissue Practice) 的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行優(yōu)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)。n 細(xì)胞數(shù)量不低于5×109 /次。每周 1 次, 連續(xù) 4 次為 1個(gè)療程 ；病情嚴(yán)重者也可每周 2 次, 連續(xù) 8 次為 1個(gè)療程。n 毒副作用及處理: n CTL 細(xì)胞治療中出現(xiàn)的主要副作用是畏寒或寒戰(zhàn)、發(fā)熱、

29、乏力等。發(fā)熱常常出現(xiàn)在治療后 48小時(shí), 體溫一般 38 左右 , 發(fā)熱在 24小時(shí)內(nèi)?？删徑? 不需特殊處理。對體溫超過 38 的患者可用物理降溫或解熱藥物對癥處理。n 少數(shù)患者可能出現(xiàn)輕度頭痛、四肢酸痛、乏力、和惡心等消化道癥狀，可做相應(yīng)對癥處理。 生物治療的療效包括：有效地殺滅腫瘤細(xì)胞，減輕臨床癥狀，改善生活質(zhì)量，提高免疫機(jī)能，延長生存期。具體可見各種臨床癥狀的改善，包括食欲增加，體力增強(qiáng)，疼痛減輕，體重增加。腫瘤的體積縮小或消失，血中腫瘤標(biāo)志物降低或恢復(fù)正常，轉(zhuǎn)移性腫大淋巴結(jié)消退，癌性胸腹水減少或完全吸收，機(jī)體免疫功能的增強(qiáng)等。以免疫干預(yù)為基礎(chǔ)的腫瘤治療新策略臨床療效評價(jià)的一個(gè)重要發(fā)展

30、領(lǐng)域是評估常規(guī)和免疫治療相結(jié)合的協(xié)同治療方式，從而解決個(gè)性化治療的局限性問題，獲得更多的臨床益處。若干能在臨床前和臨床研究中應(yīng)用的免疫治療且與傳統(tǒng)的治療起協(xié)同作用的獨(dú)特的策略已經(jīng)被提出（例如與手術(shù)、局部和靶向性治療以及與使用化療藥物或放療為基礎(chǔ)的治療的聯(lián)合）。這些研究結(jié)果與開發(fā)聯(lián)合疫苗、T細(xì)胞、化療和單克隆抗體治療的新方法有很密切的聯(lián)系，預(yù)示著普遍適用于各種癌癥的協(xié)同治療具有驚人的發(fā)展前景。由于免疫療法及癌癥藥物的復(fù)雜性，為了在不久的將來實(shí)現(xiàn)對癌癥的控制提供更有效的治療方法，癌癥免疫學(xué)家和臨床醫(yī)師有必要進(jìn)行緊密的合作。表1. 免疫治療結(jié)合手術(shù)治療增強(qiáng)療效的基礎(chǔ)l 手術(shù)治療減少腫瘤負(fù)荷，相對增加

31、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞，更好的控制殘余腫瘤或癌細(xì)胞。l 手術(shù)減少抑制性調(diào)節(jié)T細(xì)胞和其他免疫抑制因子。 l 手術(shù)去除腫瘤，減少腫瘤抗原的慢性刺激，避免免疫細(xì)胞應(yīng)答的無能。 l 免疫治療針對性地消除潛伏的或殘余的腫瘤細(xì)胞，預(yù)防手術(shù)后的腫瘤復(fù)發(fā)。 l 以免疫細(xì)胞為基礎(chǔ)的治療可在手術(shù)后恢復(fù)期的早期進(jìn)行，不必顧慮對傷口愈合的不良影響。 l 免疫治療可從手術(shù)標(biāo)本中的腫瘤中提取自身腫瘤抗原，同時(shí)也可擴(kuò)增腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞供臨床治療。l 生物治療導(dǎo)致腫瘤局限并縮小，為手術(shù)創(chuàng)造條件。腫瘤的形成和發(fā)展需要有癌細(xì)胞作為種子，也伴有環(huán)境的改變，尤其是免疫調(diào)控機(jī)制的異常，為腫瘤的生存提供了有利的環(huán)境。目前常用的放化療方法常常是

32、在殺傷了癌細(xì)胞種子的同時(shí)也損傷了機(jī)體防御功能的環(huán)境。將放化療和生物治療科學(xué)地結(jié)合在一起，可起到協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞的效果，同時(shí)保護(hù)和改善患者的免疫功能。為更好地控制腫瘤提供一個(gè)良好的環(huán)境。表 2. 化療或放療結(jié)合免疫治療的優(yōu)點(diǎn)l 化療和放療能殺死腫瘤細(xì)胞，包括對免疫耐受腫瘤細(xì)胞并提供腫瘤抗原的交叉遞呈。l 放療和化療去除免疫抑制細(xì)胞。l 減少細(xì)胞因子的競爭。l 增加可供利用的抗原遞呈細(xì)胞并改善功能。l 免疫治療殺傷對化療、放療耐藥的腫瘤細(xì)胞。l 免疫治療提供效應(yīng)細(xì)胞來接受交叉遞呈的腫瘤抗原和其他危險(xiǎn)信號。l 免疫治療減輕放化療的毒性作用，增強(qiáng)對放化療的耐受性.l 激素治療誘導(dǎo)抗腫瘤細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。惡性腫瘤是一種非常復(fù)雜的疾病，但也可以把癌癥的治療簡單化，體內(nèi)腫瘤主要以兩種形式存在，一種形式是實(shí)體腫瘤，另一種是微小的轉(zhuǎn)移病灶。我們可以利用各種不同的局部治療的有效手段，如射頻、伽瑪?shù)?、超聲刀等對?shí)體腫瘤進(jìn)行積極的治療。同時(shí)進(jìn)行生物治療來控制散在性的或殘留的腫瘤細(xì)胞，為腫瘤病人提供全方位的治療。表3. 免疫治療結(jié)合局部靶向治療增強(qiáng)療效的策略l 局部治療打破腫瘤屏障和克服免疫耐受。l