布魯克核磁培訓(xùn)電子版

1、核 磁 應(yīng) 用 培 訓(xùn) 筆 記一、一維H譜實(shí)驗(yàn)操作流程1、 新建一個(gè)實(shí)驗(yàn)，可以直接輸入 New命令，name：樣品名稱；PROCNO:處理 號(hào)；Solvent:不代表鎖場(chǎng)的溶劑，只影響最后打印譜圖參數(shù)中溶劑項(xiàng)的顯示；ExpenrimentDirs：標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，不代表脈沖系歹0;User下，可以建立自己的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)；H譜的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱是：proton2、getprosol:把相關(guān)的脈沖參數(shù)保存在 Acqupars表中:AcquparsPL13、 鎖場(chǎng)，可以直接點(diǎn)擊Lock圖表選擇溶劑后鎖場(chǎng)，或者輸入命令 LOCK空格 溶劑名稱直接鎖場(chǎng)；鎖場(chǎng)的目的？4、atma： topshim5、NS輸入數(shù)值6、r

2、ga7、za即zerogo的簡(jiǎn)寫Notice：(1) 調(diào)諧：做同一樣品的不同譜圖時(shí)需要重新做一次調(diào)諧。(2) 當(dāng)?shù)谝淮蝿驁?chǎng)不好的時(shí)候，可以輸入命令topshim+空格+tunea進(jìn)行二次勻 場(chǎng)，若多次勻場(chǎng)后仍然不能達(dá)到好的狀態(tài)則需要做三維勻場(chǎng)。(3) 同一溶劑的樣品，建議在同一時(shí)段做譜，有利丁勻場(chǎng)。(4) 勻場(chǎng)不好的原因有以下幾個(gè)方面：樣品中含有順磁性金屆離子高粘度樣品溶液高度太低。8、部分參數(shù)的設(shè)置(1) eda采樣參數(shù)設(shè)置：可以輸入命令 ased進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面； PULPROG:脈沖系列名稱，zg30:30度角激發(fā)，zg： 90度角激發(fā)； AQ-mod:采樣模式 TD:采樣點(diǎn)數(shù) NS:采

3、樣次數(shù) DS:空掃：真正開始采樣前先采集的次數(shù)，做一維譜時(shí)可設(shè)為0,二維譜空掃的次數(shù)設(shè)置非常重要。 TD0,真正采樣次數(shù)，NS*TD0，如TD0設(shè)為10, NS為1024,則總采樣次數(shù)為 1024*10 SW譜寬，用默認(rèn)的譜寬即可，其中 SW與AQ成反比 O1P, O1,中心頻率，其中前者是以ppm為單位，后者是以HZ為單位。最右邊：譜寬/2+O1P(2) 和脈沖系列有關(guān)的參數(shù) DE值，采樣結(jié)束后等待衰減的時(shí)間。做雜核時(shí)需要更改。 D1:弛豫延遲，做定量H譜時(shí)需要更改 P1激發(fā)脈寬；PL1 (dB):激發(fā)功率；9、譜圖處理(1) Procpars：窗口函數(shù) efp ：指數(shù)函數(shù)，em ft、pk

4、三個(gè)命令的組合 gfp ：高窗函數(shù)：gm ft、pk三個(gè)命令的組合 apk：根據(jù)當(dāng)前的樣品來調(diào)PHC,PHC,1當(dāng)譜峰有很多鼓包時(shí)使用效果不好。Notice : LB值越大信噪比越好，分辨率越差，LB值越小，分辨率越好。LB0是相對(duì)于efp函數(shù)而言的，當(dāng)調(diào)節(jié)LB值為負(fù)，信噪比仍然不好時(shí)，可用gfp 函數(shù)，先更改GB值，再輸入GFMr令沖零也可以提高分辨率。(2) 定標(biāo)(3) 直接輸入plot命令，進(jìn)入打印界面。(4) 如何創(chuàng)建棋板？C:BrukerTopspinPlotLayouts,先另取名字創(chuàng)建模板，再將棋板文件夾下的默認(rèn)棋板刪除，如H譜的默認(rèn)棋板是：1D-Hxwp先刪除該棋板，再將自己

5、創(chuàng)建的棋板改為默認(rèn)棋板的名字。二、如何做H譜的定量？與標(biāo)準(zhǔn)一維氫譜相比，需要做一下變換1、將脈沖系歹0 zg30改為zg,2、找內(nèi)標(biāo)，兩個(gè)峰挨的很近且基線分離，一般很難找到合適的內(nèi)標(biāo)物。3、調(diào)整O1P使得O1Pft兩個(gè)峰之間4、NS要足夠大，為了保證較好的信噪比，定量最起碼要做半個(gè)小時(shí)以上。5、 D1>5T1,D1要大于5倍的T1,首先要找最大的T1, D1的時(shí)間要足夠長(zhǎng)。三、碳譜：碳譜的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)為 C13CPD1、getprosol2、atma3、采樣參數(shù)的設(shè)置：譜寬sw一股設(shè)置為250,O1P, NS TD0,4、rga5、zg6、tr命令：保存數(shù)據(jù)，繼續(xù)采樣；如tr4，保存最近4次

6、的2倍。7、efp : apk8、ppf:對(duì)碳譜的全譜進(jìn)行標(biāo)峰。9、Mi+數(shù)字+PPF表小強(qiáng)度低于該數(shù)值的不標(biāo)峰。10、go命令，樣品濃度太低的情況下，過夜采集仍然不能得到理想的譜圖，第 二天白天需做其他譜圖，可在第二天晚上將前一天晚上采集的譜圖拖動(dòng)到當(dāng)前窗 口，重新放入樣品鎖場(chǎng)調(diào)節(jié)后可以輸入 Gg令進(jìn)行累加采集。11、和脈沖相關(guān)的參數(shù)CPDPRG2通常情況下用 Waltz16，做氫譜、碳譜的90度脈沖沒有問題，做 雜核時(shí)需要更改。Notice :看到碳譜有裂分，首先要考慮是否有同分異構(gòu)體，再考慮更改 CPDPRG2選擇帶bi的參數(shù)。四、碳譜定量實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)時(shí)間相對(duì)很長(zhǎng)，需要加弛豫試劑以減短實(shí)驗(yàn)

7、時(shí)間。)1、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇 CBIG newok2、將 zgig30 改為 zgig3、DS:0加弛豫試劑后會(huì)影響鎖場(chǎng)和勻場(chǎng)。五、DEPT驗(yàn)(45°、90°、135° )1、New>C13DEPT90OK2、getprosol3、修改參數(shù)：(1) 改動(dòng)參數(shù)NS采樣次數(shù)是普通碳譜采樣次數(shù)的 1/4.Pulseprog查看與脈沖相關(guān)的參數(shù)，其中 NS是4的倍數(shù)。(3) DS=8, NS=4 SW譜寬，O1P.4、rga: zgNotice :(1) DEPT45只出現(xiàn)季碳；DEPT135只出現(xiàn)CH（2）HALT格數(shù)字（3） SR值，從校正后的普通碳譜的處理參數(shù)中

8、copySR值，復(fù)制到DEPTf圖中, 可將DEPT®圖中的化學(xué)位移與普通 C譜的化學(xué)位移對(duì)齊。六、如何將多種譜圖打印在同一張圖上？方法一：1、先將全譜圖調(diào)出并標(biāo)好化學(xué)位移。2、選擇1D+1D+1DxwpX印模板3、在data中，點(diǎn)擊ADD選擇實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)現(xiàn)在的位置，將需要的數(shù)據(jù)拖入，點(diǎn)擊Apply ,確定。此方法的優(yōu)點(diǎn)是可以對(duì)每一張譜圖進(jìn)行修改。、方法二：1、隨意拖入一張譜圖，輸入plot2、全選中，并刪除原有譜圖3、在 DATAS面選譜圖，APPLY>OK;4、在右側(cè)選擇多個(gè)譜圖疊加的圖標(biāo)，三條重疊的折線；5、在空白處拖動(dòng)鼠標(biāo)，出現(xiàn)第一張譜圖6、右擊選擇Edit，選擇steak

9、ed ,輸入譜圖張數(shù)。Spectra : 0*5,0表示左右偏移量，5表示上下偏移量。此方法的缺點(diǎn)是不能單獨(dú)修改每一張譜圖。七、一些補(bǔ)充注意事項(xiàng)1、BBf,探頭。2、 新安裝儀器可以做的核有 H、C、P、F、N,可以直接選擇標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，直接調(diào)用 標(biāo)準(zhǔn)棋板。P31CPg去偶，zgpg30; P31: zg。LOCQ后可以直接輸入一系列命令，點(diǎn)擊 ENTERS接完成。3、 做雜核前要先確認(rèn)兩件事，情：（1）有無脈寬和功率（2）有無標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)；4、P的化學(xué)位移的標(biāo)定：外標(biāo)法。把標(biāo)準(zhǔn)品（查找網(wǎng)上文獻(xiàn)）放到P樣品中測(cè)定核磁，將標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)位移定位為 0后看SR值，再將SR值復(fù)制粘貼到后續(xù)做的P譜圖上，再標(biāo)定

10、化學(xué)位移。標(biāo)準(zhǔn)品：85嘴酸溶液。不鎖場(chǎng)、不勻場(chǎng)，直接調(diào)諧、prosol 不鎖場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：（1）打開BSM虢盤，將lock變成灰色。（2） sweep要變成灰色 （即將（1） （2）的 ON-OF睹K OFF掉）（3） atma； rga ; zg；八、對(duì)于沒有標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)、沒有脈寬和功率的雜核如何入手做？以 B11為例。1、首先查詢?cè)撾s核的旋磁比、天然豐度，對(duì)于天然豐度太低的要求濃度高些， 或者很難做出來。HelptNMRGuideNMREncyclopedi+NMRApplication tNMRpenddicTable點(diǎn) 擊要做的元素查看旋磁比和天然豐度。2、先借用C譜的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，新建一個(gè)實(shí)驗(yàn)，當(dāng)

11、旋磁比為正時(shí)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇C13CPD 當(dāng)旋磁比為負(fù)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇 C13IG點(diǎn)ok。3、更改參數(shù)查看Acqpar參數(shù)（都是C13的參數(shù)）Tgetprosol （讀取C的脈寬和功率）t輸 入edsp命令t把F1維中的C13改為B11,F2維不變t Default Sav>再次回到 Acqupars參數(shù)中t NS （掃描次數(shù)）、SW俏寬，盡量設(shè)寬些400）, O1P（先賦予 0） +-200位置找峰，D1 （經(jīng)驗(yàn)值）2S,對(duì)0也適合，（事先查D1值，太大可加 弛豫試劑）t lock , topshim t輸入atmm（不能用atma,手動(dòng)調(diào)諧，第一次做核 時(shí)必須用手動(dòng)調(diào)諧。）t出現(xiàn) Tuni

12、ng對(duì)話框，若點(diǎn)找不到會(huì)動(dòng)的倒峰，則 點(diǎn)擊圖標(biāo)，放大范圍，都調(diào)好后點(diǎn)FileSavepositionExit t輸入atma； rga ; zg,彈出rga對(duì)話框，點(diǎn)OK輸入密碼Bruker ,接著彈出zg警告t halt8 , efp ； apkT輸入sref彈出警告，close （將O1P放在最佳位置）t edmac（宏命 令）+空格+名稱（隨意命名）。校準(zhǔn)背景信號(hào)，第一段（第一行，absf1 +空格+最大值；第二行，absf2+空格+ 次大值；第三行，absf）;第二段（第一行，absf1+空格+最大值；第二行，absf2+ 空格+次大值；第三行，absf） ; Notice :下一段的

13、開始是上一段的結(jié)束，進(jìn)入 鼓包區(qū)域后區(qū)間要變小，節(jié)點(diǎn)值不能正好落在峰的最高點(diǎn)，從最左端分多段編輯 到最右端。編輯好后保存。t輸入 BL命令4、如何創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)棋板？輸入wpaL在user下，不能存在par上面t點(diǎn)擊 writenew t輸入實(shí)驗(yàn)名稱，OK tOK>close tnew不能getprosol （90咖水10咻疊代鈉標(biāo)樣，可以用來建立 。的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，也可以用來建立 Na的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，需要做Pt的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，可打 電話讓工程師過來設(shè)置，另外做其他雜核的定量需用到 C13IG脈沖系列，需要請(qǐng) 工程帥調(diào)90度脈沖的脈寬和功率，請(qǐng)工程師來做核。）九、部分二維實(shí)驗(yàn)溫馨提示：二維譜實(shí)驗(yàn)最重

14、要的就是控溫。（一）、實(shí)驗(yàn)一1、New®立一個(gè)新實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇 COSYGPMFSW梯度場(chǎng)進(jìn)行相關(guān)路徑的 選擇。其中GP表小梯度；MF表小多量子粒波，SW!小方波，標(biāo)準(zhǔn)波形。多量子 粒波的好處：可以從對(duì)角峰上看到單峰的性質(zhì)，簡(jiǎn)化對(duì)角峰，易于解析。2、lock3、atma； topshim ； getprosol ,調(diào)諧的目的是為了接收線圈的頻率與中心頻率保持一致，提高靈敏度。DS空掃16次。Pulseprog :查看脈沖系列。TD,F2維 2000左右；F1維，大于256 (設(shè)高一點(diǎn)可以提高分辨率)。采采樣模式：QF與采樣相關(guān)的參數(shù)：TD NS DS SW O1P其中NS DS的

15、設(shè)置可以參考限定值。輸入命令ased,可以查看與脈沖系歹U相關(guān)的參數(shù)，基本不需要自行修改。4、rga; zg5、譜圖處理(1) 輸入命令xfb進(jìn)行變換，其中xf表示加窗函數(shù)，b表示兩個(gè)維度。(2) 調(diào)進(jìn)一維譜選中一維譜，右擊，選擇 displayAs2Dprojection 。選F1+F2(3) 點(diǎn)等高線調(diào)整圖標(biāo)(一個(gè)沒有底邊的三角弧形，中間幾條平行線穿過)進(jìn) 行等高線調(diào)整。Levelincrement : 1.2-1.3 即可；Numberoflevels (等高線數(shù))： 32; Fill tApplytOK或者可以輸入命令clev+32可得到等高線數(shù)目。(4) 校準(zhǔn)(即定標(biāo))放大譜圖進(jìn)行定

16、標(biāo)。(5) 去除噪音，選中噪音，輸入命令 proj ,選擇UPdatarows/colsfromdisplaytokT再選擇最上面的calculatepositiveprojectiont輸入sub2 (對(duì)正峰和負(fù)峰都去除噪音)(二) 、實(shí)驗(yàn)二1、New標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇：MLEVPHSW,咐相位；MLEVg示自旋鎖定或自旋傳遞； SVa示方波，形狀脈沖SP;查看與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)，其中NS=8*nDS=16*r TD(F2=204& F1>256)SW,O1PD6自旋鎖定時(shí)間，默認(rèn)值為 0.08S ,即 混合時(shí)間(設(shè)短的話可能會(huì)無法調(diào)整相位)2、lock3、atma； topshi

17、m ； getprosol ;4、譜圖處理(1) 輸入命令xfb變換譜圖(2) 調(diào)等高線(3) 調(diào)相位，先調(diào)0級(jí)相位，再調(diào)1級(jí)相位。(4) 校準(zhǔn)(三) 實(shí)驗(yàn)三1、New> NOESYPHSW用于大分子2、NS 8*N; DS:16*N;D8混合時(shí)間，空間V 5 a ,峰的強(qiáng)度與距離的六次方 成正比。對(duì)于大分子，D8=0.10.3S;對(duì)于小分子：D8=0.60.8。Notice :分子量越大，弛豫時(shí)間越短，分子量越小，弛豫時(shí)間越長(zhǎng)，溫度越高弛 豫時(shí)間越短。3、lock4、getprosol5、atma； topshim ； rga; zg（四）實(shí)驗(yàn)四1、new,標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)選擇ROESYPHS

18、W,P通過相位循環(huán)可以減掉一些峰。2、具體實(shí)驗(yàn)步驟與前面的實(shí)驗(yàn)步驟大致相同，通過查看與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)對(duì)參數(shù)進(jìn)行設(shè)置。接著 LOCK,getprosol ; atma； topshim ； rga; zg3、Notice :輸入 Set 命令，選中 Enableautomaticcommandspooling 方框內(nèi)口打 鉤?？梢葬槍?duì)一個(gè)樣品的自動(dòng)排列做多個(gè)實(shí)驗(yàn)。（五）實(shí)驗(yàn)五：J-Resolved同核實(shí)驗(yàn)。1、new cosy45sw （先借用）2、Pulprog : jresqf （消除化學(xué)位移，保留耦合常數(shù)）3、NS:4*N; DS 16;4、F2維（化學(xué)位移）；F1維（耦合常數(shù)）SW=

19、20 SWH=50HZO1P只針對(duì)F2設(shè)定值，F(xiàn)1不用設(shè)。5、getprosol6、lock7、atma； topshim ； rga; zg；（六）實(shí)驗(yàn)六H-C相關(guān)的二維譜1、 New選擇標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)：HSQCETGPSISP,m采樣模式為回波反回波采樣；GP 梯度；SI靈敏度增強(qiáng)；SP形狀脈沖，讓激發(fā)更均勻。2、 輸入命令eda,進(jìn)行采樣參數(shù)設(shè)置：NS=1*N,D手16,TD,SW譜寬（F2為H譜譜 寬，F(xiàn)1為C譜譜寬）;輸入命令ased可進(jìn)行與脈沖系列有關(guān)的參數(shù)設(shè)置， CNST2單位為H乙C和H 直接耦合常數(shù)的平均值。GPZ2 C:20.1%, N15, 8.1%,若有些雜核沒有顯 示，則改

20、核后可以輸入命令gradratio 查看3、lock4、getprosol ; atma； topshim5、rga; zg（七）實(shí)驗(yàn)七1、New>HMBCGPNDND表示在采樣時(shí)間內(nèi)不進(jìn)行去耦。2、（1）采樣參數(shù)設(shè)置 NS=2 DS=16,O1P=?,SW=?（2）與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)設(shè)置，CNST13遠(yuǎn)程耦合常數(shù)，系統(tǒng)默認(rèn)一般為8H乙 可以適當(dāng)?shù)販p小，當(dāng)看不到交義峰時(shí)，可能該值設(shè)大了，也可能是因?yàn)槎?角的原因。，通過耦合常數(shù)可以計(jì)算二面角的大小。3、lock4、atma； topshim ； rga; zgNotice : HMB圖中可能存在HSQC勺殘余峰。（八）實(shí)驗(yàn)八，在HMB

21、（T維譜中去除HSQC勺殘余峰。1、nesHMBCGPND,Ttit電 J-FilterHMBC2、更改脈沖系列及參數(shù)將 Pulprog tHMBCGPL2ndqf（1） 輸入命令 eda,更改采樣參數(shù)，NS=2*N,DS=16 QF TD（分 F1, F2）, O1P（2） 輸入命令ased,更改與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)， CNST6:120HZ;CNST7180HZ, 在該區(qū)問內(nèi)HSQ成余峰去除。CNST13白分比根據(jù)右側(cè)提示填寫。3、getprosol4、lock5、atma； topshim ； rga; zg十、完整的二維譜圖處理過程1、輸入xfb ,譜圖變換；2、調(diào)入一維譜，選擇F1+

22、F2 t ok3、clev32 ,修改等高線。4、校正相位（NOESYROESYTOCSY HSQCI要校正相位，其他的不需要）點(diǎn) 相位校正圖標(biāo)，選幾個(gè)點(diǎn)，ADD先校正紅線所在的位置。5、定標(biāo)：先定好一維譜，讀出化學(xué)位移，再點(diǎn)擊定標(biāo)圖標(biāo)，找出中心位置進(jìn)行 定標(biāo)。6、去除噪音，（T1噪音的去處），左邊沒有信號(hào)的投影。Proj tedit tupdate tok第一個(gè)正峰第二個(gè)負(fù)峰，輸入 sub2。7、可以通過選擇性預(yù)測(cè)提高 F1的分辨率,edpTprocpars tfouner tME_mod 選擇LPfr (LP表示線性預(yù)測(cè)，fr表示向前的)NCOEFHH相關(guān)選100, HC 相關(guān)選32) o

23、此處理的缺點(diǎn)是可能廣生鬼峰。H一、核磁的維護(hù)(一) 硬件維護(hù)1、機(jī)柜里面的濾網(wǎng)一般一年活洗一次2、建議每周重啟電腦一次3、打開機(jī)柜需要帶放靜電手環(huán)4、 每次嚴(yán)格開關(guān)機(jī)，關(guān)機(jī)開機(jī)后要做一次CE5、90度脈沖校準(zhǔn)正常情況下半年做一次，對(duì)新儀器可能需要三個(gè)月做一次。6、field的校準(zhǔn)，正常情況下半年一次，對(duì)于新儀器三個(gè)月做一次。(二) 磁體及軟件維護(hù)1、1H90度脈沖的校準(zhǔn)，標(biāo)樣：0.1%EBinCDCL(1) new,建立實(shí)驗(yàn)，選擇 PROTON準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，title : 1H90cal(2) lock(3) getprosol ; atma； topshim(4) 更改參數(shù) 輸入命令eda更改采樣

24、參數(shù)，將zg30Tzg; NS=1 DS=0;O1P=2.6PPM(設(shè)定在乙基的四重峰中央)。 輸入命令ased更改與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)，D1=20S,RG=16;P1=10.63己錄下來(脈沖作用時(shí)間) 改為2; PLW制PL1保持不變。Notice :先把原來的P1值，再將P1賦予一個(gè)比較小的時(shí)間，eg, 1us先試做一 個(gè)譜看看。(5) rga; zg(6) efp ； apk,處理譜圖，并找到四重峰，使當(dāng)前窗口只出現(xiàn)四重峰。(7) 輸入命令dpl ,定義打印區(qū)問。(8) 回到處理參數(shù)procpars，將PH_mo曲的模式改為PK(9) 輸入命令POPT脈沖的功率為脈寬的優(yōu)化模式。勾選第

25、三個(gè)選項(xiàng)即performautomaticbaseline(PARAMETER 寫上 P1, OPTMUM選 zero ,STARTVAL 開始值：比原有值的三倍大一些即大于 3*10.60 ; ENDVA結(jié)束值：比原來的 四倍大一些，即大于4*10.60+4 ; INC步長(zhǎng)一般定為2, 36、38等等)，填好 以上各參數(shù)后，點(diǎn)擊Staroptimlze tSav>ok開始做實(shí)驗(yàn)t若出現(xiàn)負(fù)值的 峰，說明已經(jīng)越過180度得電，點(diǎn)擊skipcurrentoptim 停止實(shí)驗(yàn)。結(jié)果存在TITLE里面，不用記錄。在 Acquars中的P1 (us)得到值/4, 得到的值其實(shí)是零點(diǎn)的值,即360度

26、得值，除4即可得到90度的值。(10) 更改prosol表，輸入命令edprosol ,將左右通道的pulse值改過來t Save tselectallrelevanttok輸入密碼t oktyestokyestok,關(guān)閉窗口。2、 C13的90度脈沖，標(biāo)樣：ASTM (參考講義P48)(1) nesPROCNO(理號(hào)一定為1) tC13CPD準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱)(2) getprosol tlock 溶劑名稱t atma； topshim(3) 修改參數(shù)，輸入命令eda修改采樣參數(shù)：將zgpg30改為zgpg； NS=1;DS=0 O1P=67O2P=3.f®輸入命令ased修改與脈沖系列

27、相關(guān)的參數(shù)：RG=3減64;D1 (S) =20; P1先記錄下原始數(shù)值如8.8，先賦予小點(diǎn)的值如2us(4) 輸入zg命令直接采樣(5) efp ; apk讓窗口只出C的信號(hào)，輸入dpl ,以下步驟與H的90度脈沖一致， 可參考H的90度脈沖。Notice :測(cè)完后要到prosol表中進(jìn)行更新。3、如何計(jì)算當(dāng)前樣品的90度脈沖值？(1) new設(shè)定好參數(shù)之后做pulsecal(2) 輸入命令pulsecal , enter后可以計(jì)算當(dāng)前樣品的90度脈寬，測(cè)完后點(diǎn)擊 close。第一次做pulsecal命令時(shí)會(huì)彈出對(duì)話框“該命令正在編譯”直接 close掉就可以了。4、3D勻場(chǎng)，標(biāo)樣：90洌&

28、lt;+10咖水。(1) new,建立一個(gè)一維 H譜實(shí)驗(yàn)(2) lockH20+D2O(3) atma； topshimgui (可以去除Y方向的勻場(chǎng)梯度)(4) 選 3A After : ZX-Y-XZ-YZ-Z (不做 Before) t Star t 結(jié)束后點(diǎn) close。(5) 選一個(gè)常做的樣品，做一個(gè)一維 H譜，lock tgetprosol ; atma； topshim(6) 輸入 ws卜在filename中輸入文件夾名稱t write tcloseNotice :怎樣判斷勻場(chǎng)好不好？看 DMS。甲醇、丙酮的多重峰看 TMS勺衛(wèi) 星峰看溶劑本身的峰信號(hào)，越窄越好。5> lo

29、ckfield 的校準(zhǔn) 方法一：鎖場(chǎng)鎖笊信號(hào)，標(biāo)樣用10%勺EBinCDC3(1) 進(jìn)樣(2) lockCDCla(3) 進(jìn)入 BSM融盤Tlock'level tfield t讀取 field 值并記錄下來(6704.3) t點(diǎn)ON-OFF兌鎖t輸入命令lopo , enter進(jìn)行鎖場(chǎng)參數(shù)的優(yōu)化t選溶劑，點(diǎn) ok t輸入6704.3 (鎖場(chǎng)后的值)。Notice :紅線和綠線的交義點(diǎn)在鎖場(chǎng)的最中問， 蝴蝶線完全對(duì)稱，通過更改phase 值可以使其變得對(duì)稱，從交義點(diǎn)出來的第一個(gè)峰都是向上的。(4) 點(diǎn)擊stanby ,命令行中輸入edlock ,點(diǎn)折線圖標(biāo)進(jìn)行保存。方法二：什么溶劑都鎖

30、不上的情況下使用該方法(1) 放H20+D2O的標(biāo)樣進(jìn)去(2) 將 sweep 的 ON-OFF掉(3) 修改采樣參數(shù)，建立一個(gè) H譜 zg30, NS=1, DS=0 O1P=4.7, SW=3040ppm(4) atma； rga ; zg ；(5) efp ; apk(6) 找到水峰，看水峰與4.7偏離了多少H乙在procpars中將PH_mo敬為pk；(7) 輸入命令gs,點(diǎn)實(shí)時(shí)變化譜圖，打開 BSM虢盤，進(jìn)入locklevel里面， 調(diào)節(jié)filed 值，使水峰到達(dá)4.7的位置，到達(dá)4.7后點(diǎn)Standby,輸入命 令edlock ,點(diǎn)折線圖標(biāo)，保存。(8) 將GS界面stop掉(9)

31、 用CDC3樣品做校準(zhǔn)。十二、一維選擇性激發(fā)實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)一：針對(duì)分的比較開的峰(1) 新建一個(gè)實(shí)驗(yàn)，做一個(gè)一維譜。(2) 點(diǎn)擊積分符號(hào)，在自己想要的信號(hào)上，對(duì)其進(jìn)行積分。(3) “Saveasveg”右擊保存圖標(biāo)，保存。(4) 輸入 buttonnmr，選擇 select -(5) 點(diǎn)擊setGrROESY>OQ輸入實(shí)驗(yàn)名稱后點(diǎn)OQOK不能再更改參數(shù)，直 接采樣；cancel只是建立實(shí)驗(yàn)，還可以修改參數(shù)。本例中選cancel。(6) 修改 NS=8%NDS=4*N(7) rga; zg(8) efT相位校正，一般會(huì)出現(xiàn)三種信號(hào)：相關(guān)信號(hào)、吸收型信號(hào)、色散信號(hào)。2、實(shí)驗(yàn)二：針對(duì)重疊比較嚴(yán)重

32、的多重峰。CSSF:chemicalshift 化學(xué)位移，selectivefilter 。(1) 進(jìn)樣，采集一個(gè)一維譜(2) 找到重疊峰，拷貝其中的一個(gè)化學(xué)位移：所關(guān)心的峰的中間位置。(3) 新建一個(gè)實(shí)驗(yàn)，修改 O1P為前一步驟的化學(xué)位移值。(4) 更改脈沖系歹U ( pulprog )，選擇 selcssfzs.2 tok(5) 查看參數(shù)，修改NS=2*N,DS=16 TD0=816部分參數(shù)根據(jù)右側(cè)提示修改。CNST2=4此值取決于峰的重疊程度)(6) rga; zg3、實(shí)驗(yàn)三(1) 在實(shí)驗(yàn)二的基礎(chǔ)上，輸入命令i , I命令表示做同樣的實(shí)驗(yàn)。(2) 更改脈沖系歹U,將selcssfzs.2

33、 tselecssfdizs.2(2表示第二個(gè)版本，為 了選擇峰；帶zs表示能量子激發(fā)；di自旋鎖定，cosy峰為了找相關(guān)譜)(3) 更改參數(shù)D9(混合時(shí)間)、NS DS TD0等參數(shù)。(4) rga; zgNotice : cosy、tocsy、noesy、roesy 對(duì)角峰、交義峰都有； hsqc、hmbc沒有對(duì) 角峰，只有交義峰。十三、溶劑峰的壓制1、只壓制一個(gè)峰(1) 做一個(gè)一維譜，找到要壓制的峰，復(fù)制化學(xué)位移。(2) nes標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱為： WATERSUP,應(yīng)的脈沖系列為 NOESYGPPR1dk(3) 設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù)，D1:低功率、長(zhǎng)時(shí)間的功率，關(guān)鍵設(shè)置參數(shù) D1和PL9。對(duì) 于N

34、S DS無嚴(yán)格要求；PL9=60dB(該值越大，實(shí)際功率越大)；D1=2s(時(shí) 間越長(zhǎng)，頻率覆蓋范圍越窄)；O1P的值直接粘貼步驟一復(fù)制的化學(xué)位移值， 譜寬要足夠大。(4) getprosol ;2、壓制兩個(gè)峰(1) edcT標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱：LC1D1夕OK(2) O1P慶制峰1的中間位置的化學(xué)位移值(譜圖的中間)O2P壓制峰2的中間位置的化學(xué)位移值。(3) getprosol(4) NS=8*N,DS=4,PL9=60(5) rga; zg 3、如何壓制多個(gè)峰？(1) nesLC1DCWPS準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱)(2) 修改參數(shù)NS DS SW(3) getprosol(4) 輸入命令L30(即壓制峰的

35、個(gè)數(shù)，如N)(5) 輸入命令xaua (自動(dòng)采集一個(gè)一維譜),壓制 N個(gè)最強(qiáng)的峰4、水峰的壓制(與壓制一個(gè)峰的步驟是一樣的)(1) nesWATERSUBJOESGPPR1d(2) O1P的確定,NS DS D1、PL9(3) getprosol(4) lock(5) atma； topshim ；(6) RGA> RG 記錄 RG®(7) rga ; zgTfp tall tapk(8) 更改O1值(9) rga ; zg (多次循環(huán)，直到水峰的壓制達(dá)到好的狀態(tài))5、實(shí)驗(yàn)五(1) edc (ne時(shí) t NOESYPR1D準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱)(2) D8=0.1S;NS DS(B據(jù)提示

36、確定)；O1(O1P=4.7)、D11=30ms=0.03sD1=2S;PL9=5060Db宜給太大的值)(3) getprosol(4) lock(5) atma； topshim ； rga; zg拓展實(shí)驗(yàn)：輸入I命令tnoesygppr 1d口梯度場(chǎng)實(shí)驗(yàn))，更改梯度參數(shù)。Notice :加梯度場(chǎng)對(duì)鎖場(chǎng)相位要求比較高。十四、Topspin軟件介紹1、通過命令re、rep、rel、repl+空格+數(shù)字打開文件2、rel :打開最后一個(gè)實(shí)驗(yàn)名稱下的實(shí)驗(yàn)號(hào)。Repl:實(shí)驗(yàn)號(hào)下面的某一處理號(hào)。3、命令expl :按照2.1或者3.0版本的統(tǒng)一存放數(shù)據(jù)。4、命令.all5、E命令，選擇要看的區(qū)域6、

37、批處理：processing tsenalprocessing t Find 找到實(shí)驗(yàn)名稱t next t LB0.3; efp ； apk； ppf （標(biāo)峰）（輸入一系歹 U 命令符）t excute t close。Notice : LB增寬因子指數(shù)窗函數(shù)。7、批處理積分（intser批處理積分命令）（1）先對(duì)第一張譜圖進(jìn)行積分并保存（2）輸入命令intser（3）選擇第幾個(gè)實(shí)驗(yàn)t next（4） options （calibrate : 選定某一個(gè)位置；Normalizesumofintegrals 歸一 化法）T第幾個(gè)峰T定義幾個(gè)T Ok,歸一化值加和多少，可以自己增。8、增加一個(gè)處理

38、號(hào)（wrp命令）Corldram預(yù)測(cè)化學(xué)位移9、去卷積（去卷積的峰保留在999的處理號(hào)上面）Analysis t Deconvolution toktoptions （用什么函數(shù)）（uselorentzianshape ） 選擇區(qū)域（閾值）ok10、進(jìn)入topspin用戶名和密碼的設(shè)置Set 命令t options admmistration locktopspinuserinterface11、 電子簽名： Electromicsignaturecreation，輸入命令 esign12、audit跟蹤文檔，可以看到所有的操作13、更改layout的三種途徑輸入命令layoutcontrl+

39、P處理參數(shù)中的Automation layout14、棋板保存的路徑，C:BrukerTopspin3.0plotlayouts15、stack1d多個(gè)譜圖疊加16、parplot參數(shù)修改17、輸入命令almanao打印化學(xué)位移18、利用NMRGuid由學(xué)：NMRGuide輸入關(guān)鍵詞t搜索19、Helptmanuals 1D2Dstep-by-stepbasic 多利用資源自學(xué)。十五、T1、T2的測(cè)定1、1H的T1的測(cè)定（做二維時(shí)也需要控溫）（1）做一個(gè)一維H譜（目的是看看勻場(chǎng)好不好有沒有合適的譜寬和O1PNesgetprosol tlock tatma； topshim ； NS=1;DS=

40、0 rga ; zgTefp ; apk(2) 輸入命令lexpno：完全拷貝當(dāng)前實(shí)驗(yàn)的所有參數(shù)，只是實(shí)驗(yàn)號(hào)加1,目的 是為了譜寬和O1PtK不變。(3) 進(jìn)入采樣參數(shù)欄，將zg30改為tlir (實(shí)際是假二維)t點(diǎn) 727) 圖標(biāo)(目的是將其改為二維)，彈出對(duì)話框，點(diǎn)OK>到脈沖參數(shù)里面看米樣參數(shù)：NS=8*N(此參數(shù)設(shè)置是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵)，DS=4, FnMODE undefined tTD( fl : 變換等待時(shí)間，一般給10即可；f265536) , SW(F2:氫譜的譜寬，不變；F1 不用管)t點(diǎn)擊左側(cè)LIST,找到VDLIST,自己定義一個(gè) VDLIST,edit (填十個(gè)點(diǎn)，

41、這是個(gè)點(diǎn)必須包含在弛豫時(shí)間內(nèi)，前面的點(diǎn)密集些，后面的點(diǎn)系數(shù)些，如 0.01,0.02,0.05 , 0.1,0.4,0.8,1,3,5,10)其中最大值的確定是關(guān)鍵， 要保證做出來的曲線變化要么是向上的一個(gè)平臺(tái)，要么是向下的一個(gè)平臺(tái)。設(shè)置好后保存t回到與脈沖相關(guān)的參數(shù)上，D1(S)=10, D1值必須要大丁或者等丁 VDLIST中設(shè) 置的最大值，設(shè)置好 VDLIST后trga ; zg(4) 數(shù)據(jù)處理更改處理參數(shù)(procpars ) SIF1的一定是偶數(shù)，如16,其中SI(F1) > TD(F1);SI(F2) >TD(F2); t輸入命令xf2 (表示只對(duì)f2做傅里葉變換)t點(diǎn)

42、擊 相位調(diào)節(jié)圖標(biāo)，將十字線辰在最下方，點(diǎn)鼠標(biāo)右鍵選ADD(只需選一個(gè)點(diǎn))t點(diǎn)R_圖標(biāo)：出現(xiàn)氫譜，只需調(diào)節(jié)好氫譜的相位t保存，退出t返回處理參數(shù)propars 中，將F2維中的PH_mo故為PL點(diǎn)Analysis中的“T1/T2”圖標(biāo)，進(jìn)入右側(cè) 界面t點(diǎn)第一個(gè)圖標(biāo)“折線FID”，彈出對(duì)話框，選spectrum ,彈出下一個(gè)對(duì)話 框，slice , number=1, ok點(diǎn)第二個(gè)圖標(biāo) peaksranges :彈出對(duì)話框，選 manualintegration ，彈出另一對(duì)話框，點(diǎn)ok,進(jìn)入積分模式，選擇峰并進(jìn)行積 分t積分后點(diǎn)擊“帶A的保存”圖標(biāo)，選第三個(gè)選項(xiàng) Exportregionstor

43、elaxationmoduleandrett點(diǎn)第三個(gè)圖標(biāo)：relaxtion , widows fitingfuntionuxnmrt1 listfilename : vdlist 點(diǎn)數(shù)是前面設(shè)置的點(diǎn)數(shù) 10, 檢查以上三項(xiàng)無誤后輸入ok,點(diǎn)擊“» ”圖標(biāo)，全部點(diǎn)擬合曲線t查看擬合 曲線T輸入plot命令T點(diǎn)擊T1/T2,拉動(dòng)左鍵。2、1H的T2的測(cè)定(自選回波)(1) 做一個(gè)一維H譜(目的是看看勻場(chǎng)好不好有沒有合適的譜寬和O1PNesgetprosol lock atma； topshim ； NS=1;DS=0 rga ; zgTefp ; apk(2) 輸入命令I(lǐng)expno：完

44、全拷貝有參數(shù)，只是實(shí)驗(yàn)號(hào)加1,目的 是為了譜寬和O1PtK不變。(12J J(3) 修改脈沖程序，改為cpmg將一維模式改為二維模式。(4) 在與脈沖相關(guān)的參數(shù)里面查看 NS DS Fnmode0勺定義(5) 修改 NS=8*N,DS=16,TD(F2=65536 F1=10), Fnmode:Nodefined, S"變。(6) 在LIST中，編輯VIDLIST (表示的是循環(huán)次數(shù))表，如：2,10,20,50,100,200,300,500,750, ?(最后一個(gè)值的確定根據(jù) Do來計(jì)算，是關(guān)鍵)，單個(gè)循環(huán)時(shí)間=2Do+P18A保存。(7) 回到采樣參數(shù)中，查看和脈沖系列相關(guān)的參

45、數(shù)，Do稍微大丁 50*P2 (注意單位換算),D1值的設(shè)定，表示弛豫的恢復(fù)時(shí)間，與 T1有關(guān)，D1>5T1 本例中D1=10§測(cè)T2實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵參數(shù)有：D2慰NS D酸TDS1 隹VVLIST 的設(shè)定，最后一個(gè)循環(huán)次數(shù)由 Do決定。(8) rga; zg(9) 譜圖處理(與T1的處理過程類似，唯一區(qū)別是擬合出來的是循環(huán)的次數(shù))更改處理參數(shù)(procpars ) SIF1的一定是偶數(shù)，如16,其中SI(F1) > TD(F1);SI(F2) >TD(F2); t輸入命令xf2 (表示只對(duì)f2做傅里葉變換)t點(diǎn)擊 相位調(diào)節(jié)圖標(biāo)，將十字線放在最下方，點(diǎn)鼠標(biāo)右鍵選ADD(

46、只需選一個(gè)點(diǎn))t點(diǎn)R_圖標(biāo)：出現(xiàn)氫譜，只需調(diào)節(jié)好氫譜的相位t保存，退出t返回處理參數(shù)propars 中，將F2維中的PH_mo故為PL點(diǎn)Analysis中的“T1/T2”圖標(biāo)，進(jìn)入右側(cè) 界面t點(diǎn)第一個(gè)圖標(biāo)“折線FID”，彈出對(duì)話框，選spectrum,彈出下一個(gè)對(duì)話 框，slice , number=1, ok點(diǎn)第二個(gè)圖標(biāo) peaksranges :彈出對(duì)話框，選 manualintegration ，彈出另一對(duì)話框,點(diǎn)ok,進(jìn)入積分模式，選擇峰并進(jìn)行積 分t積分后點(diǎn)擊“帶A的保存”圖標(biāo)，選第三個(gè)選項(xiàng) Exportregionstorelaxationmoduleandrett點(diǎn)第三個(gè)圖標(biāo)：r

47、elaxtion , widowsfitingfuntionuxnmrt1 listfilename : vclist 點(diǎn)數(shù)是前面設(shè)置的點(diǎn)數(shù) 10, 檢查以上三項(xiàng)無誤后輸入ok,點(diǎn)擊“» ”圖標(biāo)，全部點(diǎn)擬合曲線t查看擬合 曲線T輸入plot命令T點(diǎn)擊T1/T2,拉動(dòng)左鍵。Notice :此時(shí)得到的T2不是真正意義上的T2,而是循環(huán)次數(shù)，因此T2的 實(shí)際值計(jì)算公式為：如本例中得到的值為68.365,則T2的實(shí)際值=68.37*(2D+P180 =68.37* (2D+P2) =68.37* (2*0.00105+20.80*10 -6S) =151ms 注 意單位換算,P180即為P2

48、。C的T1的測(cè)定：脈沖系歹U選擇tlirpg 。十六、如何設(shè)置命令的自動(dòng)排歹0 ?(1) 輸入 set 命令t Adiministration ，勾上 Enableautomaticcommandsppoling t ok(2) set t morepreferences tstatusbarprefrencest change 勾選需要顯示的欄目t Apply t okT最下方空白處右擊并將 Acquisitionbaron/off 關(guān)掉狀態(tài)欄，關(guān)掉后再打開。十七、如何建立宏命令的圖標(biāo)?(1) 輸入edmac命令，edmc編輯宏命令 apk.All AbSF©ppf點(diǎn) file(2

49、) 在菜單欄(目標(biāo)欄)點(diǎn)右鍵，選擇Add/modifyabuttonwithtextlabel(Add/modifyabuttonwithananicon(3) Abs:自動(dòng)積分；AbSn基線調(diào)整。,edmac瘁格+宏命令名稱t輸入efp 工具欄保存t關(guān)閉Adduserdefinedbutton t 出現(xiàn)對(duì)話框文本)(圖標(biāo))十八、H-P相關(guān)譜(1) new Acetone,標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)名稱：hmbcgpnd(nd表示在采樣過程中對(duì) C13不 去偶)(2) 更改參數(shù)：輸入命令 EDSP將13C改為311 Default tSavClose。(3) getprosol(4) 更改采樣參數(shù) sw (f1

50、 ) =400;ns=2*n, DS=1§ NUC1 f1 改為 31P; O1P,O2P=-50;更改與脈沖系列相關(guān)的參數(shù)： CNST13 8.0000(BC,關(guān)鍵參數(shù))凡是帶梯度的 實(shí)驗(yàn)，異核相關(guān)相關(guān)要設(shè)好核的梯度場(chǎng)，輸入 gradratio (改核后再修改)t彈 出對(duì)話框，顯示三個(gè)數(shù)值，依次填入梯度場(chǎng)中的參數(shù)設(shè)置中。(5) lock : acetone(6) atma； topshim ； rga; zg(7) 輸入xfb處理，dev32(8) 當(dāng)右側(cè)譜寬出現(xiàn)幾萬的值的時(shí)候,輸入 sref ,回車,close , close。(9) 定標(biāo)Notice : Nucleus1中的nucl的OFFfc為所要做的雜核。十九、變溫實(shí)驗(yàn)(1) 50C以下，用塑料轉(zhuǎn)子即可，若大于 50 C時(shí)，要用陶瓷轉(zhuǎn)子，做高溫變溫 實(shí)驗(yàn)時(shí)，氣流量要設(shè)置的大一些，并用惰性氣體保護(hù)線圈。氣流量要大陶瓷 轉(zhuǎn)子用惰性氣體保護(hù)線圈。(若氣流量太小，會(huì)導(dǎo)致樣品管底部溫度與上部溫 度不一致，導(dǎo)致梯度氣流量大，等待時(shí)間也短。)放樣品T先鎖場(chǎng)，鎖好