基因工程和蛋白質(zhì)工程簡(jiǎn)介PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1基因工程和蛋白質(zhì)工程簡(jiǎn)介基因工程和蛋白質(zhì)工程簡(jiǎn)介 基因工程亦稱遺傳工程，即利用基因工程亦稱遺傳工程，即利用DNA重組技術(shù)的方法，把重組技術(shù)的方法，把DNA作為組件，在細(xì)胞外將一種外源作為組件，在細(xì)胞外將一種外源DNA（目的基因）和載體目的基因）和載體DNA重新組合連接（重組），最后將重組體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，使重新組合連接（重組），最后將重組體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，使外源基因外源基因DNA在宿主細(xì)胞中，隨細(xì)胞的繁殖而增殖（在宿主細(xì)胞中，隨細(xì)胞的繁殖而增殖（cloning，克?。?，或最后得到表達(dá)，最終獲得基因表達(dá)產(chǎn)物或改變生物克?。?，或最后得到表達(dá)，最終獲得基因表達(dá)產(chǎn)物或改變生物原有的遺傳性狀。原有的

2、遺傳性狀。一、一、DNA重組重組的技術(shù)路線的技術(shù)路線二、二、基因工程的應(yīng)用與前景基因工程的應(yīng)用與前景三、三、DNA體外重組常用的酶體外重組常用的酶第1頁(yè)/共36頁(yè)Foreign DNA to be insertedPlansmid vectorJoiningRecombinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation of viral infection Host chromatemeSlection for cells coteining a recombinant DNA moleculeCloning+1、

3、目的基因的制備、目的基因的制備2、載體載體的構(gòu)建的構(gòu)建3、目的基因與載體、目的基因與載體的重組的重組4、重組、重組 體體導(dǎo)入導(dǎo)入宿主宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增5、克隆基因的鑒定克隆基因的鑒定第2頁(yè)/共36頁(yè)Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)質(zhì)粒結(jié)構(gòu)植物冠癭瘤植物冠癭瘤第3頁(yè)/共36頁(yè) DNA用限制性內(nèi)切用限制性內(nèi)切酶除去中間一酶除去中間一段段與外源與外源DNA連接連接重組載體的體外包裝重組載體的體外包裝帶有外源帶有外源DNA的的 噬菌體噬菌體太小不能被包裝太小不能被包裝頭部前體頭部前體多聯(lián)體多聯(lián)體DNAA蛋白蛋白COSCOSCOS成熟的顆粒成熟的顆粒在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行DNA的的裝配過(guò)程裝配過(guò)程第4頁(yè)

4、/共36頁(yè)第5頁(yè)/共36頁(yè) 載體特征的直接篩選載體特征的直接篩選 菌落的原位雜交菌落的原位雜交 免疫學(xué)方法免疫學(xué)方法第6頁(yè)/共36頁(yè) 如果外源如果外源DNA插入，插入，氨卞青霉氨卞青霉素抗性基因失活素抗性基因失活 如果外源如果外源DNA插入，插入，四環(huán)素抗四環(huán)素抗性基因失活性基因失活第7頁(yè)/共36頁(yè)復(fù)印至硝酸復(fù)印至硝酸纖維素膜上纖維素膜上用用NaOH菌體裂菌體裂解解DNA變性變性雜交雜交放射自顯影放射自顯影32P-cDNA與與放射性放射性cDNA雜雜交的菌落的斑點(diǎn)交的菌落的斑點(diǎn)細(xì)菌菌落細(xì)菌菌落單鏈單鏈DNA結(jié)結(jié)合到膜上合到膜上第8頁(yè)/共36頁(yè)DNA分子分子限制片段限制片段限制性酶切割限制性酶切

5、割瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標(biāo)記與放射性標(biāo)記DNA探針雜交探針雜交放射自顯影放射自顯影帶有帶有DNA片片段的凝膠段的凝膠凝膠凝膠濾膜濾膜用緩沖液用緩沖液轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移DNA吸附有吸附有DNA片段的膜片段的膜第9頁(yè)/共36頁(yè)DNA frangmentElectrophoresisTransfer of DNA by blotting32P-labled DNA probeAutoradiographyAgarrose gelAutoradiogramNitrocellulose sheetAutoradiogramPolymer sheetSDS-Polyac

6、rylamide gelTransfer proteinAdd radiolabled spesfic antibody , Wash to remove unboud antibodyProtein band detected by specific antibodyAutoradiography第10頁(yè)/共36頁(yè) (1) 開(kāi)辟生物學(xué)研究的新紀(jì)元開(kāi)辟生物學(xué)研究的新紀(jì)元 反向生物學(xué)（反向生物學(xué)（invese biology）的誕生的誕生（2）促進(jìn)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的興起）促進(jìn)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的興起 基因藥物基因藥物 基因診斷和治療基因診斷和治療 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物第11頁(yè)/共36頁(yè)胰臟胰臟(A)n

7、胰島素原胰島素原mRNAcDNA重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌mRNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶胰島素原基因胰島素原基因與質(zhì)粒與質(zhì)粒連接連接感染感染E.coli胰島素原胰島素原第12頁(yè)/共36頁(yè)I 二元載體系統(tǒng)二元載體系統(tǒng)II 共整合共整合載體載體III T-DNA的轉(zhuǎn)移與整合的轉(zhuǎn)移與整合Ti輔助質(zhì)粒輔助質(zhì)粒Ti輔助輔助DNA給體質(zhì)粒給體質(zhì)粒Ti輔助輔助DNA給體質(zhì)粒給體質(zhì)粒 pBR型質(zhì)粒型質(zhì)粒（給體質(zhì)粒）給體質(zhì)粒）宿主特宿主特異性異性外源基因外源基因宿主特宿主特異性異性整合整合帶有外源基帶有外源基因的因的Ti質(zhì)粒質(zhì)粒植物植物DNATi質(zhì)粒轉(zhuǎn)移并質(zhì)粒轉(zhuǎn)移并插入植物插入植物DNA第13頁(yè)/共36頁(yè) 蛋白

8、質(zhì)蛋白質(zhì)技術(shù)和核酸技術(shù)的相互增強(qiáng)技術(shù)和核酸技術(shù)的相互增強(qiáng) 在廣泛利用自然界存在的各種蛋白質(zhì)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)。這些蛋在廣泛利用自然界存在的各種蛋白質(zhì)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)。這些蛋白質(zhì)只是適應(yīng)生物自身的需要，而對(duì)于它們的產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)往往白質(zhì)只是適應(yīng)生物自身的需要，而對(duì)于它們的產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)往往并不合意，需要加以改造。并不合意，需要加以改造。1983年美國(guó)基因公司的年美國(guó)基因公司的Ulmer首先提首先提出蛋白質(zhì)工程這個(gè)名詞，它是指按照特定的需要，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)出蛋白質(zhì)工程這個(gè)名詞，它是指按照特定的需要，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分子設(shè)計(jì)和改造的工程。自此之后，蛋白質(zhì)工程迅速發(fā)展，行分子設(shè)計(jì)和改造的工程。自此之后，蛋白質(zhì)工程迅速發(fā)展，生物

9、工程的重要組成部分。生物工程的重要組成部分。 蛋白質(zhì)工程首先是以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，通過(guò)蛋白質(zhì)一級(jí)蛋白質(zhì)工程首先是以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，通過(guò)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)、晶體結(jié)構(gòu)和溶液構(gòu)象的研究，積累成千上萬(wàn)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)、晶體結(jié)構(gòu)和溶液構(gòu)象的研究，積累成千上萬(wàn)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)資料結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)資料，然后按照蛋白質(zhì)形成的規(guī)律，然后按照蛋白質(zhì)形成的規(guī)律，經(jīng)周密的分子設(shè)計(jì)，改造蛋白質(zhì)或構(gòu)建新的蛋白質(zhì)。經(jīng)周密的分子設(shè)計(jì)，改造蛋白質(zhì)或構(gòu)建新的蛋白質(zhì)。 研究得多，取得成果最顯著的是生物技術(shù)藥（激素、細(xì)胞研究得多，取得成果最顯著的是生物技術(shù)藥（激素、細(xì)胞因子、酶、酶的激活劑、受體和配體、細(xì)胞毒素和殺

10、菌肽以因子、酶、酶的激活劑、受體和配體、細(xì)胞毒素和殺菌肽以及抗體等）和工業(yè)用酶的及抗體等）和工業(yè)用酶的蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程。第14頁(yè)/共36頁(yè)酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能新酶分子藍(lán)圖新酶分子藍(lán)圖 選擇性修飾方案選擇性修飾方案突變酶突變酶 新酶新酶克隆酶克隆酶產(chǎn)品產(chǎn)品效用效用發(fā)發(fā)展展酶基因酶基因遺傳設(shè)計(jì)遺傳設(shè)計(jì)遺傳修飾遺傳修飾DNA重組重組技術(shù)技術(shù)DNA重組重組技術(shù)技術(shù)第15頁(yè)/共36頁(yè)插入表達(dá)載插入表達(dá)載體體轉(zhuǎn)化寄主細(xì)轉(zhuǎn)化寄主細(xì)胞胞推導(dǎo)出推導(dǎo)出AA順序順序制備合成肽制備合成肽制備對(duì)所編碼蛋白制備對(duì)所編碼蛋白專一的抗體專一的抗體基因或基因或cDNA蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)測(cè)定出測(cè)定出AA

11、順序順序合成合成cDNA探針探針制備專一的抗體制備專一的抗體沉淀核糖體沉淀核糖體分離分離mRNA用用Southern印跡法印跡法篩選篩選DNA文庫(kù)文庫(kù)基因或基因或cDNA第16頁(yè)/共36頁(yè)一、一、DNA序列測(cè)定序列測(cè)定二、二、基因文庫(kù)與基因文庫(kù)與cDNA文庫(kù)文庫(kù)三、三、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）第17頁(yè)/共36頁(yè) 設(shè)法產(chǎn)生帶標(biāo)記的不同長(zhǎng)度的成套設(shè)法產(chǎn)生帶標(biāo)記的不同長(zhǎng)度的成套DNA片段，各帶有標(biāo)記的片段起點(diǎn)相同、終點(diǎn)不同，使待測(cè)的片段，各帶有標(biāo)記的片段起點(diǎn)相同、終點(diǎn)不同，使待測(cè)的DNA鏈中的相應(yīng)每個(gè)核苷酸處都有斷裂或終止。通過(guò)鏈中

12、的相應(yīng)每個(gè)核苷酸處都有斷裂或終止。通過(guò)PAGE電泳，能夠?qū)⑾嗖钜粋€(gè)核苷酸的電泳，能夠?qū)⑾嗖钜粋€(gè)核苷酸的DNA片段分開(kāi)，放射自顯影后，根據(jù)長(zhǎng)短排列，根據(jù)特定末端堿基的片段分開(kāi)，放射自顯影后，根據(jù)長(zhǎng)短排列，根據(jù)特定末端堿基的DNA片段就可讀出待測(cè)片段就可讀出待測(cè)DNA的堿基序列。的堿基序列。 酶法酶法 化學(xué)法化學(xué)法 測(cè)序技術(shù)進(jìn)展測(cè)序技術(shù)進(jìn)展第18頁(yè)/共36頁(yè) 酶酶反反應(yīng)應(yīng)電電泳泳方方向向模板模板CCGGTAGCAACT3 5 GG5 3 引物引物dATPdCTPdGTPdTTP+ddATPdATPdCTPdGTPdTTP+ddTTPdATPdCTPdGTPdTTP+ddGTPdATPdCTPdGT

13、PdTTP+ddCTPGGCCAGGCCATCGTTGAGGCGGCCGGCCATCGGCCATCGTTGGGCCATCGGGCCATGGCCATCGTGGCCATCGTTA C G TAGTTGCTACC3 5 TCAACGATGG5 3 讀出模板讀出模板互補(bǔ)序列互補(bǔ)序列讀出模板讀出模板序列序列GGCCATCGTTGAGGCCATCGTGGCCATCGTTGGGCCATCGTTGGCCATCGGGCCATCGGCCAGGCCATGGCCGGC第19頁(yè)/共36頁(yè) 讀出模板讀出模板互補(bǔ)序列互補(bǔ)序列dNTP 凝膠電泳凝膠電泳 較大片段較大片段 較小片段較小片段ddGTPddATPddCTP ddT

14、TP 反應(yīng)混合物反應(yīng)混合物Klenow酶酶 未知序列的單鏈未知序列的單鏈DNA 讀出待讀出待測(cè)序列測(cè)序列CTGACTTCGACAAAGAA5 3 放射性標(biāo)記的引物放射性標(biāo)記的引物TGTTA C T GddGddGddGddGGACTGAAGCTGTT3 5 CTGACTTCGACAA5 3 第20頁(yè)/共36頁(yè)computer analysis凝膠中凝膠中DNA移動(dòng)方向移動(dòng)方向樣品槽樣品槽激光器激光器輸入光學(xué)系統(tǒng)輸入光學(xué)系統(tǒng)成象透鏡成象透鏡聚焦透鏡聚焦透鏡高靈敏度相機(jī)高靈敏度相機(jī)旋光鏡旋光鏡/棱鏡組件棱鏡組件第21頁(yè)/共36頁(yè) 反應(yīng)試劑反應(yīng)試劑G反應(yīng)：硫酸二甲酯反應(yīng)：硫酸二甲酯G+A反應(yīng)：甲酸反

15、應(yīng)：甲酸T+C反應(yīng)：肼反應(yīng)：肼C反應(yīng)：反應(yīng)：NaCl+肼肼第22頁(yè)/共36頁(yè)多色熒光標(biāo)記多色熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳 單色熒光標(biāo)記單色熒光標(biāo)記平板電泳平板電泳同位素標(biāo)記同位素標(biāo)記平板電泳平板電泳A C G TA C GT測(cè)序圖譜測(cè)序圖譜T A TTG CAT TG TC TGCATTG T C T第23頁(yè)/共36頁(yè)一個(gè)樣本，一個(gè)樣本，4個(gè)反應(yīng)。個(gè)反應(yīng)。4個(gè)反應(yīng)中引物序列相同，但分別標(biāo)記有不同顏色的熒光。個(gè)反應(yīng)中引物序列相同，但分別標(biāo)記有不同顏色的熒光。+AmpliTaq FS enzymedCTP, dATP, dGTP, dTTPddATP (terminator)+AmpliTaq F

16、S enzymedCTP, dATP, dGTP, dTTPddCTP+AmpliTaq FS enzymedCTP, dATP, dGTP, dTTPddGTP+AmpliTaq FS enzymedCTP, dATP, dGTP, dTTPddTTP 反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)結(jié)束后，將，將4管反應(yīng)液管反應(yīng)液混合，經(jīng)乙醇沉混合，經(jīng)乙醇沉淀后上樣淀后上樣第24頁(yè)/共36頁(yè)一個(gè)樣本，一個(gè)樣本，1個(gè)反應(yīng)。反應(yīng)中包含分別帶個(gè)反應(yīng)。反應(yīng)中包含分別帶4色熒光標(biāo)記的色熒光標(biāo)記的ddNTP(終止子終止子)unlabeled primertemplate DNA+AmpliTaq FSdATP, dCTP, dGTP,

17、 dTTPddCTPddATPddGTPddTTP第25頁(yè)/共36頁(yè)1基因文庫(kù)基因文庫(kù)基因文庫(kù)基因文庫(kù)基因文庫(kù)基因文庫(kù)（genomic library） cDNAcDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)文庫(kù)文庫(kù)文庫(kù)文庫(kù)（complemental DNA library）2 . 文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建文庫(kù)的構(gòu)建 第26頁(yè)/共36頁(yè) 基因文庫(kù)是指整套由基因組基因文庫(kù)是指整套由基因組DNA片段插入克隆載體獲得的分片段插入克隆載體獲得的分子克隆之總和。應(yīng)用子克隆之總和。應(yīng)用DNA重組技術(shù)，可以將各種生物體全部基重組技術(shù)，可以將各種生物體全部基因組的遺傳信息，貯存在可以長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定重組體中

18、，以備因組的遺傳信息，貯存在可以長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定重組體中，以備需要時(shí)應(yīng)用。好象將文獻(xiàn)資料貯存于圖書(shū)館一樣，所以稱其為需要時(shí)應(yīng)用。好象將文獻(xiàn)資料貯存于圖書(shū)館一樣，所以稱其為genomic library。 基因文庫(kù)中應(yīng)包含多少基因文庫(kù)中應(yīng)包含多少DNA克隆才能使任意所需要的基克隆才能使任意所需要的基因以極高的概率存在于該文庫(kù)中？其計(jì)算公式如下：因以極高的概率存在于該文庫(kù)中？其計(jì)算公式如下： N=ln(1-p)/ln(1-f) N 基因文庫(kù)所包含克隆的數(shù)目；基因文庫(kù)所包含克隆的數(shù)目； p 任意所需基因存在于基因文庫(kù)中的概率，要求大于任意所需基因存在于基因文庫(kù)中的概率，要求大于99%； f 克隆的克隆

19、的DNA片段大?。ㄆ未笮。╞p）占基因組大小占基因組大小(bp)的分?jǐn)?shù)的分?jǐn)?shù)。第27頁(yè)/共36頁(yè) 真核細(xì)胞基因是斷裂的，在基因最后產(chǎn)物中表達(dá)的編碼序列（外真核細(xì)胞基因是斷裂的，在基因最后產(chǎn)物中表達(dá)的編碼序列（外顯子）被非編碼序列（內(nèi)含子）分隔開(kāi)，需經(jīng)顯子）被非編碼序列（內(nèi)含子）分隔開(kāi)，需經(jīng)RNA轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程才使轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程才使編碼序列拼接在一起。真核生物基因不能在原核生物中表達(dá)，只有將加編碼序列拼接在一起。真核生物基因不能在原核生物中表達(dá)，只有將加工成熟的工成熟的mRNA反轉(zhuǎn)錄成反轉(zhuǎn)錄成cDNA （complemental DNA）接上原核生物接上原核生物表達(dá)控制元件，才能在原核生物中表

20、達(dá)。再有，真核生物的基因通常只表達(dá)控制元件，才能在原核生物中表達(dá)。再有，真核生物的基因通常只有一小部分進(jìn)行表達(dá)，由于有一小部分進(jìn)行表達(dá)，由于mRNA的不穩(wěn)定性，對(duì)基因表達(dá)和有關(guān)的不穩(wěn)定性，對(duì)基因表達(dá)和有關(guān)mRNA都都通常通過(guò)對(duì)其通常通過(guò)對(duì)其cDNA來(lái)進(jìn)行研究的。將細(xì)胞全部來(lái)進(jìn)行研究的。將細(xì)胞全部mRNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄成成cDNA并并被克隆的總和稱為被克隆的總和稱為cDNA文庫(kù)。文庫(kù)。 RNA病毒的基因組是病毒的基因組是RNA，也必須將也必須將RNA先轉(zhuǎn)錄成先轉(zhuǎn)錄成cDNA，再建立文庫(kù)。再建立文庫(kù)。 為使低豐度的為使低豐度的mRNA的的cDNA克隆存在的概率大于克隆存在的概率大于99%，cDNA文

21、庫(kù)文庫(kù)應(yīng)含的克隆數(shù)的計(jì)算公式如下：應(yīng)含的克隆數(shù)的計(jì)算公式如下： N=ln(1-p)/ln(1-1/n) N cDNA文庫(kù)所包含克隆的數(shù)目；文庫(kù)所包含克隆的數(shù)目； p 低豐度低豐度cDNA存在于基因文庫(kù)中的概率，要求其大于存在于基因文庫(kù)中的概率，要求其大于99%； 1/n 每一種每一種低豐度的低豐度的mRNA占總占總 mRNA的分?jǐn)?shù)。的分?jǐn)?shù)。第28頁(yè)/共36頁(yè)組織組織可可克隆之克隆之DNA載體載體DNAcDNAmRNA部分或完全部分或完全酶解酶解DNADNA長(zhǎng)度分級(jí)長(zhǎng)度分級(jí)甲基化，雙甲基化，雙鏈接頭鏈接頭DNADNA與載體連接與載體連接引入大腸桿菌引入大腸桿菌鑒定文庫(kù)的滴度和特性鑒定文庫(kù)的滴度和

22、特性擴(kuò)增后供擴(kuò)增后供長(zhǎng)期儲(chǔ)存長(zhǎng)期儲(chǔ)存篩選出所需篩選出所需要的克隆要的克隆第29頁(yè)/共36頁(yè)第30頁(yè)/共36頁(yè) 1985年年Mullis發(fā)明發(fā)明PCR（ polymerase chain reaction）快速擴(kuò)增快速擴(kuò)增DNA的方法。該法模仿體內(nèi)的方法。該法模仿體內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程，首先使的復(fù)制過(guò)程，首先使DNA變性，兩變性，兩條鏈解開(kāi)，然后使引物模板退火，二者堿基配對(duì)，條鏈解開(kāi)，然后使引物模板退火，二者堿基配對(duì)，DNA聚合酶隨即聚合酶隨即以以4種種dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的DNA新鏈。新鏈。重復(fù)此過(guò)程，重復(fù)此過(guò)程，DNA以指數(shù)方式擴(kuò)增

23、。擴(kuò)增的公式為以指數(shù)方式擴(kuò)增。擴(kuò)增的公式為: Y=(1+X)n 式中式中 y一產(chǎn)量一產(chǎn)量; X-擴(kuò)增效率擴(kuò)增效率; n一循環(huán)次數(shù)。一循環(huán)次數(shù)。（2） PCRPCRPCR的的的的的的應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用 （1）PCRPCRPCR的原理的原理的原理的原理的原理的原理第31頁(yè)/共36頁(yè)靶序列靶序列變性和引變性和引物復(fù)姓物復(fù)姓循環(huán)循環(huán)1循環(huán)循環(huán)2循環(huán)循環(huán)3變性和引變性和引物復(fù)姓物復(fù)姓鏈延伸鏈延伸Tag酶酶鏈延伸鏈延伸第32頁(yè)/共36頁(yè) 用于合成特異探針；用于合成特異探針； 用于用于DNA的測(cè)序；的測(cè)序； 將逆轉(zhuǎn)錄與將逆轉(zhuǎn)錄與PCR相偶聯(lián)相偶聯(lián) （RT-PCR）；）； 用于基因定位誘變；用于基因定位誘變； 末知序列的末知序列的PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增； 基因組序列的比較研究；基因組序列的比較研究； 用于臨床診斷。用于臨床診斷。第33頁(yè)/共36頁(yè)