美國(guó)及歐洲藥典系統(tǒng)適應(yīng)性要求

1、S/N = 2H/hFigure 5. Noise and chromatographic peak, compoi系統(tǒng)適應(yīng)性一國(guó)藥典系統(tǒng)適應(yīng)性是氣相和液相色譜分析方 法的重要組成部分，用于證明色譜系統(tǒng)的分 離度和重現(xiàn)性能滿足樣品的分析要求。測(cè)試基于這樣的原理：儀器、電路、方 法和樣品組成一個(gè)整體系統(tǒng)，我們可以對(duì)這 個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試評(píng)估。影響色譜系統(tǒng)的因素包括： 流動(dòng)相的組成、離子強(qiáng)度、溫度和pH 值 柱子大小、流速、柱溫和壓力 固定相特點(diǎn)，包括填料類(lèi)型，載體形狀、 粒徑、孔徑、表面積等。 常用固定相為反相硅膠，以十八碳烷基 健合硅膠最常用，其它經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的 硅膠也有使用。分離度Rs是理論塔板

2、數(shù)n的函數(shù)（也 叫柱效），a是分離因子，k是容量因子（所 有符號(hào)的意義見(jiàn)前文“色i普定義和說(shuō)明”部 分）。在規(guī)定的色譜條件序n表示洗脫物 中相鄰化合物的分離程度，可作為衡量色諾 系統(tǒng)柱效能的指標(biāo)，但是不如直接測(cè)試的結(jié) 果可靠。峰的尖銳程度部分反映柱效，這個(gè) 參數(shù)對(duì)檢查微量物質(zhì)至關(guān)重要。標(biāo)準(zhǔn)品或者標(biāo)準(zhǔn)溶液需要重岌進(jìn)樣以 確保精密度。除非個(gè)論中有規(guī)定，系統(tǒng)適用 性五針的數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過(guò)2.0%. 如果超過(guò)2.0%的話，需要進(jìn)樣六針。在含量測(cè)定中，如果純品含量100%, 則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差沒(méi)有最大值限制，這個(gè)值可 根據(jù)多次進(jìn)樣對(duì)照溶液來(lái)計(jì)算：%RSD=kB/n/t9o% n-1K 為常數(shù)0.34

3、9,由公式k=（0.6/）x（t90%T5/V6） 計(jì)算得來(lái)，省表示B=1.0時(shí)六次進(jìn)樣的相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差。B是個(gè)案中規(guī)定的上限。n是對(duì) 照溶液的進(jìn)樣次數(shù)（3BW6）, t9o%m是自 由度為n-1、置信水平為90%,雙側(cè)檢驗(yàn)時(shí) 的t值。除非另有規(guī)定，RSD不能超過(guò)卜.表中 的值。此規(guī)定不適用于相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)。Relative Standard Deviation Requirents進(jìn)樣次數(shù)3456B%RSD上限2.00.410.590.730.852.50.520.740.921.063.00.620.891.101.27對(duì)稱(chēng)因子AS,用于衡景峰的對(duì)稱(chēng)性， 完全對(duì)稱(chēng)時(shí)值為1。拖尾越嚴(yán)重，AS的

4、值 越大（見(jiàn)圖4）。偶爾也會(huì)有值小于1的情 況。如果對(duì)稱(chēng)因子與1的差值越大，則枳分 的精密度越差。信噪比（S/N）是系統(tǒng)適應(yīng)性的一個(gè)重 要參數(shù)，計(jì)算公式如下（圖5）：H是峰高，即峰最高點(diǎn)到基線的距離: h是噪音最大值和最小值之間的差值。系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試的數(shù)據(jù)通過(guò)重k進(jìn)樣 標(biāo)準(zhǔn)品或者特定文件中規(guī)定的對(duì)照溶液而 得到，此文件中對(duì)相關(guān)參數(shù)的定義同樣適用 于其它操作條件，以卜情況可做相應(yīng)調(diào)整: 標(biāo)準(zhǔn)品（包括參考物質(zhì)）對(duì)適應(yīng)性測(cè)試中的所有化合物均適用 在系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試中為改進(jìn)色譜系統(tǒng)性能 而作適當(dāng)調(diào)整寸色漕系統(tǒng)的調(diào)整不能彌補(bǔ)柱了 和系統(tǒng)本 身的缺陷.為滿足系統(tǒng)詁應(yīng)性要求而對(duì)分析方法調(diào)整 時(shí)，除非另有規(guī)定，

5、以下每個(gè)變雖的最大值都應(yīng) 考慮：這些調(diào)整需要附加有效數(shù)據(jù)。為驗(yàn)證新方 法的系統(tǒng)適應(yīng)性，需要對(duì)改變條件后的分析方法 重新評(píng)價(jià)。多處改動(dòng)會(huì)對(duì)系統(tǒng)性能產(chǎn)生積累效果, 在分析之前能仔細(xì)號(hào)慮。在梯度洗脫中不推薦改 變流動(dòng)性組成，如果必須改變，則只對(duì)溶劑體積 或滯后體積改變。流動(dòng)相pH （HPLC）：在配備流動(dòng)相時(shí)，水相緩 沖液的pH波動(dòng)范圍在正負(fù)0.2個(gè)單位 緩沖液鹽濃度（HPLC）：在滿足pH伉條件下， 緩沖液中鹽的濃度波動(dòng)范圍在±10% 流動(dòng)相的組成（HPLC）：以I、調(diào)整限度詁用于 流動(dòng)相中的小組分（比例小于等于50%）.這些 組分的量可在正負(fù)30%范圍內(nèi)調(diào)整。但是不能 超過(guò)總流動(dòng)相的1

6、0%.下面是兩相體系和三相 體系組分的調(diào)整范闈兩相體系：溶劑比為50:50時(shí)，50的30%是15%.超過(guò)了 10%的限度，因此流動(dòng)相比例只能在40:60到 60： 40范圍內(nèi)調(diào)整。容積比為2： 98時(shí)，2的30%時(shí)0.6%因此改 變范圍在14： 98.6到2.6:97.4三相體系：溶劑比為60:35:5時(shí)，第二組分35的30%時(shí) 10.5%,超過(guò)10%的限度，只能在25%到45% 的范圍內(nèi)改變第三組分5的30%是1.5%。加 上組分一共同構(gòu)成洗脫體系。因此三相體系的比 例變化范圍是50:45:5到70:25:5或者 58.5:35:6.5 jHJ 61.5:35： 3.5.紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器的波

7、長(zhǎng)：操作過(guò)程中不允許 波火有誤差，廠家或者其它機(jī)構(gòu)對(duì)檢測(cè)器波K的 校正誤差不超過(guò)3nmo固定相：柱K：可變范圍為原柱長(zhǎng)的±70%柱內(nèi)徑（HPLC）：如果線速度恒定可做適當(dāng)調(diào)節(jié)， 見(jiàn)流速項(xiàng)（HPLC）下.柱內(nèi)徑（GC）：調(diào)整范圍為原柱內(nèi)徑的±50% 薄膜厚度（毛細(xì)管GC）：調(diào)整范圍為-50%到 100%粒徑（HPLC）：填料顆粒尺、J.可以減小50%. 但是不能增大.粒徑（GC）：任滿足色譜系統(tǒng)適應(yīng)性要求的情況 卜粒徑由大換小或者由小換大都W以，調(diào)料的 粒徑比率由最大顆粒的直徑除以最小顆粒的直 徑而來(lái)。流速（GC）：流速可調(diào)范國(guó)在±50%流速（HPLC）：柱了尺寸改

8、變時(shí)，流速可由下式 計(jì)算：F2=F1l2d22/l1dl2Fi是文件中規(guī)定的流速，單位是mL/min, F?是調(diào)整后的流速：k是文件中規(guī)定的柱K，12 是使用柱K；山為文件中規(guī)定的柱內(nèi)徑，d2為使 用柱內(nèi)徑。流速可變范刖是±50%。進(jìn)樣體積（HPLC）：只要滿足精密度和檢測(cè)限， 進(jìn)樣體積可以適當(dāng)減少，但不能增加。進(jìn)樣體積和分流體積（GC）：檢測(cè)器和重現(xiàn)性較 好時(shí)可做適當(dāng)調(diào)整。柱溫（HPLC）：柱溫波動(dòng)范用在±10°進(jìn)樣口溫度（GC）：可調(diào)范圍±10°程序升溫（GC）：溫度可做適當(dāng)改變，需要保持 定溫度或者改變到另溫度值時(shí)，溫度變化做 大容許范圍

9、是±20°。除非另有規(guī)定，系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)由待測(cè)物峰 的數(shù)據(jù)計(jì)算、樣品的R，RF, tR實(shí)測(cè)值應(yīng)與對(duì)照品的實(shí) 測(cè)值一致，文件中給的相對(duì)保留時(shí)間值是為了方 便峰的指認(rèn)，對(duì)于相對(duì)保留時(shí)間沒(méi)有評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。適應(yīng)性測(cè)試時(shí)為了確保最終操作結(jié)果的有 效性。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為確保系統(tǒng)適應(yīng)性，進(jìn)樣前應(yīng) 做適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)備工作.配置待測(cè)溶液時(shí)，溶液中包括一定景的待測(cè) 物和-些其它物質(zhì)（如藥品輔料或者雜質(zhì)）。當(dāng) 色譜系統(tǒng)仃顯著變化時(shí)，或者要用特殊試劑，則 要重新做系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，否則不能進(jìn)行樣品分 析。2.2.46色譜分離技術(shù)色譜分離技術(shù)是一種多級(jí)分離方法，樣 品在固定相和流動(dòng)相之間多次分配，達(dá)到動(dòng) 態(tài)平衡。固

10、定相一般是附在硅膠或者其它同 體我體上的固體或液體，可填充在層析柱上 或鋪在薄層版/薄膜上，流動(dòng)相可以是氣體、 液體或者超臨界流體。分離原理包括吸附色 譜、分配色譜、離子交換色譜、分子排阻色 i普等,也可根據(jù)樣品分子的大小、空間體枳、 質(zhì)量等物理化學(xué)性質(zhì)來(lái)分離。本章介紹了系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試涉及的參 數(shù)定義及計(jì)算方法，分析方法和儀器介紹等 己分別在以下章節(jié)做了介紹： 紙色譜12.26 薄層色譜2227 氣相色譜2 2.28 液相色漕2.2.29 排阻色漕2 2 30 超臨界流體色譜2.2.45Peak 1Time (f)Figure 2.2.46.-1.定義卜.面分別介紹系統(tǒng)適應(yīng)性和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn) 的相關(guān)

11、參數(shù)定義。有些儀器的軟件系統(tǒng)包含 了J些特定參數(shù)的計(jì)算方法（例如性噪比、 分離度）。操作人員有責(zé)任確認(rèn)該計(jì)算方法 是否符合歐洲藥典要求，如果有差別，應(yīng)對(duì) 該方法做適當(dāng)調(diào)整以符合藥典規(guī)定。色譜圖反應(yīng)檢洲器的響應(yīng)信號(hào)、洗脫劑濃度或體積 與時(shí)間的關(guān)系等。理想的色譜圖是在平穩(wěn)的 基線上各色譜峰彼此分離，呈高斯分布。色譜峰色i普柱中洗脫的單個(gè)組分或者未分離的多 個(gè)組分在檢測(cè)器上的響應(yīng)信號(hào)，是色譜圖的 一部分。一般用蜂面枳、峰高h(yuǎn)和半高峰寬 Wh、峰高h(yuǎn)和峰寬w,等參數(shù)來(lái)描述色漕峰。 高斯峰有如下關(guān)系（圖2.2.46-1）：Wh= 1 18Wx保留時(shí)間tR組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需時(shí)間保留體積Vr組分從進(jìn)

12、樣到出現(xiàn)最大峰所需的流動(dòng)相體 積，可用保留時(shí)間乘以流速F。VR=tR X F死時(shí)間tM不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大Peak 2峰所需時(shí)間死體積Vm不被:固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大 峰所需流動(dòng)相體積。Vm = 1m X F排阻色譜中用V。表示（見(jiàn)卜.而）保留因子k右時(shí)用容量因子£或者分配比Dm表示，計(jì) 算公式如下：K =固定-中的、分房=*坦流動(dòng)相中的丁分星質(zhì)Kc表示分配常數(shù)，也叫平衡分配系數(shù)V5表示固定相體積Vm表示流動(dòng)相體積在色譜系統(tǒng)中某組分的保留因子也訂按F 式計(jì)算：K=LtM流動(dòng)相總時(shí)間以當(dāng)組分粒徑小于固定相膠 體孔徑的最小尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn) 最大峰所

13、需時(shí)間（圖2.2.46-2） 流動(dòng)相總體積Vt,當(dāng)組分粒徑小于固定相膠 體孔徑的最小尺、J.時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn) 最大峰所需流動(dòng)相體積，可按下式計(jì)算Vt=ttXF滯留時(shí)間M：當(dāng)組分粒徑大于固定相膠體孔 徑的最大尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大 峰所需時(shí)間滯留體積Vo：當(dāng)組分粒徑大于固定相膠體 孔徑的最大尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最 大峰所需體積，可按下式計(jì)算Vo=toXF分配常數(shù)戚：表示排阻色譜中某一組分的洗 脫能力，也叫分配系數(shù)，可用卜式計(jì)算：tRt。“一 SLC 3nd GCSl20«KClUSI(M)ctironiatographysseEJ«no4)-on 107仲

14、1 o'1 (rTme (0Volume (V>Figure 2.246.-2.arbOBA. mobile phase front B. spot C. line of appheaUonFigure 2246.3B是分析物的移動(dòng)距離A是溶劑前沿的移動(dòng)距離100 %SC2XW2<滯留因子RF：在平面色譜中也叫保留因子 Rp表示組分在板上的點(diǎn)到原點(diǎn)之間的距離 與溶劑前沿到原點(diǎn)的距離的比值(圖 2 2 46-3 )o塔板數(shù)N： H反映柱效，又叫理論塔板數(shù), 計(jì)算公式如下：N = 5 54()2是組分的保留時(shí)間，Wh是該物質(zhì)的半高峰 寬色譜柱類(lèi)型、柱溫、流動(dòng)相以及化合物類(lèi)型 都

15、會(huì)影響理論塔板數(shù)的值滯后體積D：也叫梯度延遲體積，指從流動(dòng) 相混合點(diǎn)至柱頭的系統(tǒng)體積，可用以下方法 計(jì)算：色譜柱:用適當(dāng)?shù)拿?xì)管(如1 mXO 12 mm) 代替流動(dòng)相：A相是水，B相是0 1% (V/V)的 丙酮水流速F：能達(dá)到足夠的反壓為準(zhǔn)(如Zml/imn)時(shí)間minA相體積百 分比B相體積百 分比0-20100-0Of 10020-300100檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm記錄吸光度到達(dá)最大值的50%時(shí)的時(shí)間toj(圖 2 245-4)<0 5FineFigure 2.2.46.4DfXF圮=% 5-t 七預(yù)沒(méi)為20 minF為流速，單位為ml/min對(duì)稱(chēng)因子A色諾峰的對(duì)稱(chēng)因子(圖

16、2246-5)按卜.式計(jì) 算A=嘗I 2dW005表示在二十分之一峰高處峰寬d表示二十分之一峰高處到峰頂點(diǎn)投射到水 平線之間的距離A,值為1表示峰絕對(duì)對(duì)稱(chēng)，大于1則為拖尾 峰，小于1則為前置峰5 _一Figure 2.2 46.-5分離度R.兩組分之間的分離度(2146-1)計(jì)算公式 如下tR!和tjc是色譜峰的保留時(shí)間Wh!和Wh2是半高峰寬在定量平面色漕中，用移動(dòng)距離代替保留時(shí)間來(lái)計(jì)算兩組分之間的分離度，計(jì)算公式如T：皿=i.Ma絲M電Rfi和R口是色譜峰的阻滯因子WM和Wh2是半高峰寬a是溶劑前沿到基線的距離峰谷比(p/v)做有關(guān)物質(zhì)的系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試時(shí)，如果兩峰 之間的基線分離效果不好，

17、可以用峰谷比作 為評(píng)價(jià)依據(jù)(圖2.246-6)0p/v = p/v*Hp表示基線以上最小峰的最高點(diǎn)到基線的 距離Hr表示基線以上最小峰和主峰之間的最低 點(diǎn)到基線的距離在平面色譜中,用滯留因子RFjtfflRF1代替保留時(shí)間tpst和tRj信噪比(S/N)小的噪音峰會(huì)影響定最分析的精密度。信噪比計(jì)算公式如下：S/N=當(dāng)nH表示組分的峰高，在參比溶液的色譜圖中, 測(cè)星從信號(hào)峰的最高點(diǎn)到基線之間的距離。 該信號(hào)峰的峰寬至少大于半高峰寬的5倍(圖 2.2.46-7 )oh表示色譜圖中噪音峰的最高點(diǎn)到最低點(diǎn)之 間的距離系統(tǒng)重現(xiàn)性系統(tǒng)重復(fù)性表示至少連續(xù)進(jìn)樣三次后，所得 相村標(biāo)準(zhǔn)偏差的百分?jǐn)?shù)。計(jì)算公式如下：

18、yi表示內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)方法中的峰面積、峰高或若 而枳比的值y表示平均值n表示值的個(gè)數(shù)Figuie 2.2.46.SFiguiv 22.46.-7.相對(duì)保留因子T相對(duì)保留因子的計(jì)算公式如Rr =Vst+W鼠表示待測(cè)峰的保留時(shí)間表示參照峰的保留時(shí)間H表示滯留時(shí)間未調(diào)整相對(duì)保留因子K計(jì)算公式如卜.：七=關(guān)除北另有規(guī)定，相對(duì)保留因子和未調(diào)整的相 對(duì)保留因子的值基本一致系統(tǒng)適應(yīng)性用于測(cè)試的成分應(yīng)該明確，能滿足系統(tǒng)性能 和含量測(cè)定的要求。系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試反映了色譜系統(tǒng)的性能，是 建立分析方法不可或缺的一部分。柱效、保 留因子、分離度、相對(duì)保留因子和對(duì)稱(chēng)因子 等參數(shù)用來(lái)描述柱子的性能。這些參數(shù)可能 從以下方而影響色

19、譜行為： 流動(dòng)相的組成、離子強(qiáng)度、溫度和pH 值- 流速、色譜柱尺寸、柱溫和柱壓- 固定相特性，包括填充劑類(lèi)型、填充劑 粒徑、孔徑、比表面積反相材料類(lèi)型或者對(duì)固定相表面進(jìn)行 其它的結(jié)構(gòu)修飾除非另有規(guī)定，還需滿足以卜要求：- 在相關(guān)物質(zhì)測(cè)定或含量測(cè)定中，用于定 園的參照色譜峰，其對(duì)稱(chēng)因子取值范圍 必須在0 8到15之間- 如果某成分的純度為100%,則可容許 的參比溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大值計(jì) 算公式如下：e （%）= KB 而Sy '/o' max【90%. n-1K是常數(shù)0 349,由公式K=?x瞽計(jì)算 V2 y6而來(lái)，裟表示當(dāng)B = 1。時(shí)，六次進(jìn)樣后的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差百分?jǐn)?shù)B表

20、示方法中規(guī)定的含景上限減去100%n表示進(jìn)樣次數(shù)（3< n <6）戚加】表示雙側(cè)檢驗(yàn)、置信度為90%、自由 度為n-1時(shí)的t值除TF另有規(guī)定，可允許的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大 值不能超過(guò)下表（表2 2 46-1）的值，此規(guī) 定不透用于有關(guān)物質(zhì)測(cè)試。表2 2.46-1重復(fù)性要求進(jìn)樣次數(shù)3456B (%)最大容許標(biāo)準(zhǔn)偏差200410.590.730.852 50520310921 06300 620 891 101 27測(cè)試有關(guān)物質(zhì)時(shí)，定晨限度與此表相等或小 于表中數(shù)值測(cè)試員要根據(jù)些致變因素來(lái)選擇合適的 方案驗(yàn)證色譜系統(tǒng)，以保證在測(cè)試過(guò)程中色 譜系統(tǒng)的適應(yīng)性不受影響。色譜條件的調(diào)整為滿足系統(tǒng)適

21、應(yīng)性，在不對(duì)分析方法做根本 改變的情況下，可對(duì)色譜參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整。 在梯度洗脫時(shí)，改變洗脫條件會(huì)導(dǎo)致基線漂 移，不利于色譜峰的劃分識(shí)別，甚至?xí)霈F(xiàn) 假峰和延長(zhǎng)洗脫時(shí)間。因此要改變梯度洗脫 的條件時(shí)，需重新驗(yàn)證方法的有效性。 系統(tǒng)話應(yīng)性是定性分析或含鼠測(cè)定結(jié)果的 有效保障。市竹液相色譜柱的固定相材料類(lèi) 型多樣，可滿足不同色譜行為需要，為滿足 系統(tǒng)適應(yīng)性要求，可對(duì)色譜條件做適當(dāng)調(diào)整。 但是在反相色譜系統(tǒng)中，調(diào)整色譜參數(shù)不能 總是達(dá)到既定要求，這時(shí)可選擇替換色譜柱。 網(wǎng)站EDQM上有各種柱子的性能信息，可 根據(jù)分析需要選擇合適的色譜柱。一般文件會(huì)明確規(guī)定一些重要參數(shù)以滿足 系統(tǒng)適應(yīng)性。薄層色譜和紙色

22、譜展開(kāi)劑的組成：對(duì)其中較少的組分，調(diào)整范 圍為相對(duì)差值±30%或絕對(duì)差值±泓，可選 其中較大的-種，但任何組分的絕對(duì)差值不 得超過(guò)±10%。例如含量為10%的組分，按 相對(duì)差值±3次計(jì)算其可調(diào)范困在7%-13%, 按絕甘專(zhuān)值±2%計(jì)算可調(diào)范圍在 固訶按相對(duì)差值計(jì)算的范圍來(lái)調(diào)整。假如- 組分含量為5%,按相對(duì)差值計(jì)算其可調(diào)范 圍在3 5-6.5%,按絕對(duì)差值計(jì)算其可調(diào)范困 在3-7%,巧時(shí)可按絕對(duì)差值范圍調(diào)整，但 是改變范圍絕對(duì)不能超過(guò)10%。除非另有規(guī)定，流動(dòng)相水相pH值可調(diào)范困 在±0 2個(gè)單位，非離子溶劑可調(diào)范圍在±1

23、個(gè)單位。緩沖溶液中的鹽濃度可調(diào)范圍在±10%。點(diǎn)樣體積：如果薄層板或?qū)游黾埖牧６攘己?（2-10呻），點(diǎn)樣體積可為規(guī)定的10-20%液相色譜：等度洗脫流動(dòng)相組成：對(duì)其中較少的組分，調(diào)整范困 為相對(duì)差值±30%或絕對(duì)差值±泓，可選其 中較大的一種，但任何組分的絕對(duì)差值不得 超過(guò)±10%。除非另有規(guī)定，流動(dòng)相水相pH值可調(diào)范闈 在±02個(gè)單位，非離子溶劑可調(diào)范圍在±1 個(gè)單位。緩沖溶液中的鹽濃度可調(diào)范圍在±10%。流速：一般可在±50%范圍內(nèi)調(diào)整，如果改 用大尺寸的柱子，調(diào)整范圍可適當(dāng)加大。 色譜柱參數(shù) 固定相： 不能

24、改變固定相填料類(lèi)型（例如不能用 C8柱替換C18柱）- 粒徑：最多訂將粒徑減小到原來(lái)的50%,但是不能增加填料粒徑色譜柱尺寸： 長(zhǎng)度：可調(diào)范闈±5次 內(nèi)徑：可調(diào)范困±25%如果色譜柱尺寸改變，流速也需按以卜.公式 做適當(dāng)調(diào)整：FT帝Fi：方法中規(guī)定的流速，單位ml/minF2：改變后的流速，單位ml/min h：方法中規(guī)定的柱長(zhǎng)，單位mm b：改變后的柱長(zhǎng)，單位mm di：方法中規(guī)定的柱內(nèi)徑，單位mm d2：改變后的柱內(nèi)徑，單位mm柱溫：±10°C，除非另有說(shuō)明，操作時(shí)的柱 溫需明確規(guī)定檢測(cè)波長(zhǎng)：不能改變進(jìn)樣體枳：在滿足檢測(cè)限和重現(xiàn)性的情況下 可減少進(jìn)樣

25、體枳，但不能增加進(jìn)樣體積 液相色譜：梯度洗脫梯度洗脫不像等度洗脫，要改變洗脫條件的 話需要慎重考慮流動(dòng)相：只有在滿足卜列條件時(shí)才可對(duì)流動(dòng) 相組成做微小調(diào)整： 滿足系統(tǒng)詁應(yīng)性要求主峰的洗脫時(shí)間改變范圍不超過(guò)方法 中規(guī)定的±15% 改變后的流動(dòng)相洗脫能力不能比方法 中規(guī)定的差如果改變條件不能滿足系統(tǒng)適應(yīng)性要求，則 需考慮滯留體積和換色譜柱滯留體枳：實(shí)驗(yàn)儀器的布屋能顯著改變分離 度、保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間等。如有此情 況，可能是滯留體積過(guò)大。在開(kāi)始梯度洗脫 程序之前，會(huì)有一段等度洗脫過(guò)程?？紤]到 規(guī)定的方法與實(shí)際使用方法中的滯留體積 有差異，何在等度洗脫時(shí)調(diào)整開(kāi)始梯度洗脫 的時(shí)間。測(cè)試員有

26、責(zé)任使等度洗脫時(shí)間話應(yīng) 所用的分析儀器。如果方法中規(guī)定了滯留體 枳，梯度洗脫的開(kāi)始時(shí)間可根據(jù)卜面公式換 成實(shí)際開(kāi)始時(shí)間：L = t罕D：滯留體積，單位mlDo：實(shí)際滯留體積，單位mlF：流速，單位ml/min如果沒(méi)有等度洗脫這個(gè)步驟也不影響數(shù)據(jù)的有效性，那么此步驟可以省略流動(dòng)相pH,不能改變緩沖液鹽濃度：不能改變流速：色譜柱尺寸改變時(shí)可改變流速（公式見(jiàn)前面）色譜柱參數(shù)固定相：- 不能改變填料類(lèi)型- 不能改變粒徑大小色諾柱尺寸：- 長(zhǎng)度：可調(diào)范圍±70% 內(nèi)徑:可調(diào)范圍±25%如果色譜柱尺寸改變，流速也需按以卜公式做話當(dāng)調(diào)整：F? = FiFi：方法中規(guī)定的流速，單位ml/m

27、inF2：改變后的流速，單位ml/min11：方法中規(guī)定的柱長(zhǎng)，單位mm12：改變后的柱長(zhǎng)，單位mm由：方法中規(guī)定的柱內(nèi)徑，單位mmdj：改變后的柱內(nèi)徑，單位mm柱溫：±5°C,除非另有說(shuō)明，操作時(shí)的柱溫需明確規(guī)定檢測(cè)波長(zhǎng)：不能改變進(jìn)樣體枳：在滿足檢測(cè)限和重現(xiàn)性的情況卜可減少進(jìn)樣體積，但不能增加進(jìn)樣體積氣相色譜色譜柱參數(shù)固定相：- 粒徑：（填充柱）最多可減少50%,不能 增大粒徑尺寸- 薄膜厚度：（毛細(xì)管柱）可調(diào)范圍從-5 0%到 +100%色譜柱尺寸：- 長(zhǎng)度：可調(diào)范W±7（M- 內(nèi)徑：可調(diào)范圍±50%流速：±50%柱溫：±10%進(jìn)樣體枳和分流體積：住滿足檢測(cè)限和市.現(xiàn)性的情況下可做適當(dāng)調(diào)整超臨界流體色譜流動(dòng)相組成：填充色譜中，對(duì)其中較少的組 分，調(diào)整范圍為相對(duì)差值±30%或