獸用生物制品研發(fā)與申報——備課11

1、獸用生物制品研發(fā)與申報培訓獸用生物制品研發(fā)與申報培訓根據(jù)中監(jiān)所培訓資料改編 1培訓目錄培訓目錄v一、菌（毒）種種子批建立試驗一、菌（毒）種種子批建立試驗v二、實驗室安全試驗二、實驗室安全試驗v三、實驗室效力試驗三、實驗室效力試驗v四、診斷制品試驗研究四、診斷制品試驗研究v五、相關法律法規(guī)五、相關法律法規(guī)2一、菌（毒）種種子批建立試驗 原始種子 種子批分為三級 基礎種子 生產(chǎn)種子31 原始種子v比較難界定，沒有一個確切的模式。v滅活疫苗的原始種子應該是從動物體內(nèi)分離、純化、適應、鑒定的培養(yǎng)物，或朋友饋贈的經(jīng)過一定的工作確定用來制苗的最早培養(yǎng)物為原始種子。v如：AIV（H9亞型）滅活疫苗，從病死雞

2、氣管黏液用PBS制成懸液、離心取上清加雙抗、接種雞胚分離病毒，經(jīng)鑒定后即為原始種子。42 種子批定義原始種子定義 原始種子具有一定數(shù)量具有一定數(shù)量背景明確背景明確組成均一組成均一系統(tǒng)鑒定免疫原性良好系統(tǒng)鑒定免疫原性良好系統(tǒng)鑒定繁殖特性良好系統(tǒng)鑒定繁殖特性良好系統(tǒng)鑒定生物學特性明確系統(tǒng)鑒定生物學特性明確系統(tǒng)鑒定鑒別特征明確系統(tǒng)鑒定鑒別特征明確系統(tǒng)鑒定純凈的菌（毒）株系統(tǒng)鑒定純凈的菌（毒）株5基礎種子批定義基礎種子由原始種子制備由原始種子制備處于規(guī)定代次水平處于規(guī)定代次水平一定數(shù)量一定數(shù)量組成均一組成均一系統(tǒng)鑒定符合有關規(guī)定系統(tǒng)鑒定符合有關規(guī)定活的培養(yǎng)物活的培養(yǎng)物6生產(chǎn)種子批定義 生產(chǎn)種子由基礎種

3、子制備由基礎種子制備處于規(guī)定代次范圍內(nèi)處于規(guī)定代次范圍內(nèi)系統(tǒng)鑒定符合有關規(guī)定系統(tǒng)鑒定符合有關規(guī)定活的培養(yǎng)物活的培養(yǎng)物73 種子批的建立原始種子批的建立v種子批建立原則是對選定的菌（毒）株進行純培養(yǎng)，并將培養(yǎng)物分成一定的數(shù)量、裝量和成分一致的小包裝，于液氮中或其他適宜條件下保存。v細菌類種子批應對原始種子進行形態(tài)和生化特性、培養(yǎng)特性、血清學鑒定、安全性（活疫苗）或毒力（滅活疫苗）、免疫原性、純粹等鑒定。v病毒類種子批應對原始種子進行病毒含量、安全性（活疫苗）或毒力（滅活疫苗）、免疫原性、特異性以及純凈（細菌、支原體或外源病毒）等鑒定。8基礎種子批建立v基礎種子由原始種子經(jīng)適當方式傳代擴增而來，增

4、殖到一定數(shù)量后，將相同代次的所有培養(yǎng)物均勻混合成一批，定量分裝，保存于液氮中或其他適宜條件下備用。按照規(guī)定項目和方法進行系統(tǒng)鑒定合格后，方可作為基礎種子使用。基礎種子批應達到足夠的規(guī)模，以便能夠保證相當長時間內(nèi)生產(chǎn)的需要。v基礎種子代次的確定：通常情況下，將基礎種子傳代至規(guī)定最高代次以上第3代，取不同代次水平的培養(yǎng)物進行含量、免疫原性試驗，考察其繁殖特性和免疫原性的穩(wěn)定性。必要時，還須考察基礎種子的遺傳穩(wěn)定性。9生產(chǎn)種子批的建立v生產(chǎn)種子由基礎種子經(jīng)適當方式傳代擴增而來，達到一定數(shù)量后，均勻混合，定量分裝，保存于液氮中或其他適宜條件下備用。根據(jù)特定生產(chǎn)種子批的檢驗標準逐項（一般應包括純凈性檢驗

5、、特異性檢驗和含量測定等）進行檢驗，合格后方可用于生產(chǎn)。并須確定生產(chǎn)種子在特定保存條件下的保存期。v生產(chǎn)種子批應達到一定規(guī)模，并含有足量活病毒（或細菌），以確保能滿足生產(chǎn)一批或一個亞批產(chǎn)品。104 基礎種子的鑒定 基礎種子鑒定生物學特性鑒定生物學特性鑒定含量鑒定含量鑒定安全或毒力試驗安全或毒力試驗免疫原性試驗免疫原性試驗免疫抑制試驗免疫抑制試驗毒力返強試驗毒力返強試驗鑒別檢驗或特異性鑒定鑒別檢驗或特異性鑒定純凈性檢驗純凈性檢驗穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗11（1）生物學特性鑒定v細菌、支原體類：形態(tài)和培養(yǎng)特性、生化特性、血清學特性。v病毒類：血清學特性。12（2）含量測定v應盡量采用通行方法，并應確保

6、在全部試驗過程中采用相同應盡量采用通行方法，并應確保在全部試驗過程中采用相同的測定指標：的測定指標： 半數(shù)感染量半數(shù)感染量ID50 半數(shù)雞胚感染量半數(shù)雞胚感染量EID50 半數(shù)致死量半數(shù)致死量LD50 半數(shù)雞胚致死量半數(shù)雞胚致死量ELD50 半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量TCID50 最小感染量最小感染量MID 最小致死量最小致死量MLD 病毒蝕斑形成單位病毒蝕斑形成單位PFU 熒光病灶單位熒光病灶單位FFU 菌落形成單位菌落形成單位CFU 支原體變色單位支原體變色單位CCU13（3）安全或毒力試驗v安全性或毒力試驗：主要考察基礎種子對靶動物的致病性（滅活疫苗）和安全性（活疫苗），為

7、制定相應標準提供依據(jù)并為今后的生產(chǎn)和檢驗過程中應采取的安全措施提供依據(jù)。v活疫苗安全性試驗：包括用多大的劑量對敏感日齡的靶動物或實驗動物是安全的。v滅活疫苗毒力試驗：同樣包括用多大的劑量對敏感日齡的靶動物或實驗動物能致死或發(fā)病或流產(chǎn)。v基因工程類活疫苗應按照農(nóng)業(yè)轉基因生物安全管理條例和農(nóng)業(yè)轉基因生物安全評價管理辦法有關規(guī)定進行安全性或穩(wěn)定性試驗，基因工程類滅活疫苗可以同時申報。14（4）免疫原性（或最小免疫劑量）試驗v基礎種子免疫原性測定：應分別用基礎種子的最低代次和最高代次進行最小免疫劑量測定，以便決定基礎種子的使用代次。當然也包括基礎種子的最低代次和最高代次的生物學特性、含量、純凈及特異性

8、鑒定。v最小免疫劑量試驗：用最高代次基礎種子，用不同劑量的菌（毒）種分別接種不同組別的靶動物；在接種后的適宜時間分別進行攻毒，以最小的劑量獲得有效保護（90%）就是該菌（毒）株的最小免疫劑量。v也可不攻毒，在接種后適宜時間分別采血測定抗體效價來測定最小免疫劑量。但前提是該方法已經(jīng)證明與免疫攻毒方法具有平行關系。15血清學效力檢驗與靶動物免疫攻毒保護相關性的研究v采用平行關系試驗證明血清學方法的合理性，并為建立判定標準提供依據(jù)。常用于成品的效力檢驗中。v具體試驗方法：用不同劑量的疫苗免疫接種動物，以便獲得不同抗體水平的動物，根據(jù)抗體水平的高低，將動物分成若干組，用已經(jīng)選定的強毒株按照預定劑量進行

9、攻毒，對抗體水平與攻毒保護率之間的關系進行分析。16v針對多種動物、多種接種途徑、各靶動物、各使用日齡都應進行免疫原性（或最小免疫劑量）試驗。v針對多個血清型的疫苗應進行交叉保護試驗。v不同地區(qū)的流行毒株交叉保護試驗（如AIV）。17（5）免疫抑制試驗（可能不適用）v有些病原（如PRRSV、IBDV、REV等）可使動物的免疫系統(tǒng)造成損害，對該類病的生物制品還應進行免疫抑制試驗，評估其制品是否存在免疫抑制現(xiàn)象。v禽用疫苗評估一般采用ND疫苗。v豬用疫苗評估一般采用CSF疫苗。v血清學檢測或攻擊強毒，觀察保護率，同時也要觀察組織學病理變化，分析是否有免疫抑制。18（6）毒力返強試驗（可能不適用）v

10、先進行預試驗，摸索出該種子接種后含毒最高的時間、組織等。v應用最低代次的基礎種子試驗。v應根據(jù)菌（毒）的特點制定試驗方案，包括試驗動物的品種、日齡、數(shù)量、級別，接種時間、途徑和接種量（一般為使用劑量的100倍），傳代方法，觀察內(nèi)容和時間，微生物分離鑒定方法，以及傳代后毒力返強程度的評價標準。19v在傳代過程中，應根據(jù)菌（毒）種在靶動物體內(nèi)的增殖特點，在適宜時間采集含菌（毒）量最高的組織、血清（如：PRRSV接種后第5天病毒載量最高采血清）、分泌物或排泄物，經(jīng)適當處理作為繼代接種物，以確保微生物的重分離率和傳代成功率。v禁止將重分離的微生物在體外增殖后再進行傳代。v應使用基礎種子的最低代次對第一

11、組試驗動物進行接種。v應采用適當?shù)臋z測方法，鑒定分離物中是否存在被檢微生物，并測定其含量。20v繼代：由前次接種動物分離到的材料，按照與第一次傳代相同的途徑接種繼代動物。每一次繼代后的病原應進行重新分離與鑒定。v傳代次數(shù)：在靶動物體內(nèi)連續(xù)傳代次數(shù)一般不少于5代（即首次接種后要進行4次繼代）。v觀察：每一次繼代后應在適當?shù)臅r間內(nèi)觀察接種動物是否出現(xiàn)由于疫苗株毒力返強所導致的臨床癥狀指標和病理變化。v最后一次傳代觀察時間應在接種后至少觀察21天。21v比較不同代次接種動物的臨床變化及病理變化，特別應對最后一代傳代動物與第一代傳代動物的臨床癥狀和病理變化進行對比。v如：PRRSV應觀察第一代與最后一

12、代動物的肺、實質器官（心、肝、脾、胃、腎）、淋巴結等組織的組織病理變化（要做切片對比）。v病原學鑒定：必要時，應對最后一次傳代的分離物進行表型和基因型鑒定，并與基礎種子進行比較，以評估其遺傳穩(wěn)定性和毒力返強的可能性。22（7）鑒別檢驗或特異性鑒定v應采用適宜方法鑒別疫苗株，并盡可能與相關毒株相區(qū)別。如熒光抗體試驗、毒種的血清中和試驗、菌種的試管凝集試驗、菌種的玻片凝集試驗或菌種的生長特性檢驗。v血清中和試驗應采用標準血清中和，不能用自分離的血清。（8）純粹性（純凈性）檢驗v按照藥典進行。（豬外源病毒增加PCV2）23（9）保存期試驗v穩(wěn)定性試驗：確定基礎種子在特定保存條件下的保存期。v基礎種子

13、保存期試驗如何做？做多少項目？國內(nèi)外沒有一個統(tǒng)一的標準。最高標準按毒種標準，每一項都要做；最低標準僅做含量測定。專家個人觀點，除做含量測定外，滅活疫苗應增加毒力測定項，活疫苗應增加免疫原性測定項。245 種子批管理原則v一般不能用基礎毒種傳代5代以上或基礎菌種傳代10代以上制備疫苗。如果將這種代次范圍之外的基礎種子用于生產(chǎn)，應通過進一步的試驗加以證明。v從生產(chǎn)種子批中取出的種子，增殖一次后獲得的菌（毒）培養(yǎng)物，即應用于制備疫苗，不得再回凍保存和再次用于生產(chǎn)。v應闡述基礎種子和生產(chǎn)種子的保存與使用方法，包括在生產(chǎn)工程中如何確保所用種子不超過批準的最高代次等詳細情況。應保存有足夠量的基礎種子，供有

14、關部門進行檢驗用。25二、實驗室安全試驗v預防、治療用獸用生物制品，其質量考察有3個重要指標。即：安全性、有效性和質量可控性。診斷制品3個重要指標是敏感性、特異性和質量可控性。v可見預防、治療用獸用生物制品的安全性是第一位的。v實驗室的基本要求是符合國家規(guī)定的生物安全標準。261 實驗動物基本要求v實驗動物應符合獸藥典中生產(chǎn)、檢驗動物標準。實驗豬篩選實驗動物應符合獸藥典中生產(chǎn)、檢驗動物標準。實驗豬篩選一般應檢測一般應檢測CSFV、PRRSV、PRV、PPV、PCV2以及疫苗以及疫苗對應抗原抗體。對應抗原抗體。v安全試驗多使用靶動物進行。安全試驗多使用靶動物進行。v有的制品還須用敏感的小型實驗動

15、物（如嚙齒類）進行試驗。有的制品還須用敏感的小型實驗動物（如嚙齒類）進行試驗。檢驗細胞培養(yǎng)代謝產(chǎn)物的安全性。檢驗細胞培養(yǎng)代謝產(chǎn)物的安全性。v應使用敏感性最高的品系動物進行安全試驗。應使用敏感性最高的品系動物進行安全試驗。v應使用最小日齡的動物進行安全試驗。應使用最小日齡的動物進行安全試驗。v與繁育有關的制品，應使用懷孕動物進行安全試驗。與繁育有關的制品，應使用懷孕動物進行安全試驗。v每批制品的實驗室安全試驗中所用的動物數(shù)量應不少于每批制品的實驗室安全試驗中所用的動物數(shù)量應不少于10只只（頭），來源困難或經(jīng)濟價值高的不少于（頭），來源困難或經(jīng)濟價值高的不少于5只（頭）。只（頭）。v分組應隨機。分

16、組應隨機。v每只動物均應編號。每只動物均應編號。272 實驗室制品基本要求v實驗室安全試驗中所用實驗室制品的生產(chǎn)用菌（毒）種、制品組成和配方等，應與規(guī)?；a(chǎn)的產(chǎn)品相同。v實驗室制品應編制批號，并經(jīng)過必要的檢驗，且結果符合要求。v實驗室制品中主要成分的含量應不低于規(guī)?；a(chǎn)時的出產(chǎn)標準。283 制定安全試驗設計方案v內(nèi)容包括受試制品的批號，劑量，試驗開始和結束日期，試驗動物的年齡、品種、性別等特征，對照組的設置，每組動物的數(shù)量，實驗動物來源、圈舍、試驗管理和觀察方式，結果的判定方法及標準等。v還應根據(jù)制品的特點增加安全試驗。v安全試驗要求的實驗室基本條件、實驗動物基本要求、實驗室制品基本要求和

17、試驗方案等適用于效力試驗等其他試驗。294 一次單劑量接種安全試驗v按照推薦的接種途徑，用適宜日齡的靶動物，接種1個使用劑量，至少觀察2周。評估指標包括臨床癥狀、體溫、局部炎癥、組織病變等。v對于可用于多種動物的生物制品，應該用各種靶動物進行一次單劑量接種安全試驗。對于多種接種途徑，應進行多種接種途徑的一次單劑量接種安全試驗。v所有的安全試驗研究者均應簽名。305 單劑量重復接種安全試驗（可能不適用）v對可能進行多次接種的生物制品，均須進行該試驗。按照推薦的接種途徑，用適宜日齡的靶動物，接種1個使用劑量后2周，以相同方法再接種一次，再次接種后應繼續(xù)觀察至少2周。評估指標包括臨床癥狀、體溫、局部

18、炎癥、組織病變等。v對于可用于多種靶動物和多種接種途徑的生物制品，應進行多種靶動物和多種接種途徑的單劑量重復接種的安全試驗。316 超劑量接種安全試驗v用至少3批實驗室制品對靶動物進行一次超劑量接種的安全試驗。v用適宜日齡的靶動物，接種劑量為免疫劑量的數(shù)倍至一百倍不等。通常情況下，滅活疫苗為2倍，活疫苗為10100倍，至少觀察2周。評估指標包括臨床癥狀、體溫、局部炎癥、組織病變等。v對于可用于多種靶動物和多種接種途徑的生物制品，應進行多種靶動物和多種接種途徑的超劑量接種的安全試驗。327 對懷孕動物的安全試驗（可能不適用）v對用于妊娠動物的制品，應使用妊娠期動物進行安全試驗，考察制品對妊娠、胎

19、兒健康的影響。另外，有些病原可能導致生殖系統(tǒng)的不可逆損傷，這類制品的安全試驗中，應對幼齡動物接種后，一直觀察到產(chǎn)仔，以考察其對生殖功能的影響。8 對靶動物生產(chǎn)性能的影響試驗v對用于肉用商品代經(jīng)濟動物及產(chǎn)蛋雞的生物制品應進行本試驗；使用這類制品后，應觀察記錄動物的生長發(fā)育、增重、飼料報酬、出欄率、產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率等，評估生物制品對動物生產(chǎn)性能的影響。339 對非靶動物、非使用日齡動物的安全試驗v有些病原可感染多種動物或多個日齡段的動物，這類制品的安全試驗中，還應對非使用對象動物和非使用日齡動物進行實驗室安全試驗，以考察對靶動物群使用該制品后對非靶動物群可能引起的安全風險。v應進行細胞系對靶動物潛在

20、致瘤性和致癌性試驗。3410 其他安全試驗v非生物源性物質，如礦物油佐劑、鋁膠佐劑等，對靶動物的殘留試驗。v免疫抑制試驗。v水平傳播試驗。v基因工程產(chǎn)品的安全性評價。35三、實驗室效力試驗1 基本要求v對實驗室基本條件、實驗動物基本要求、對實驗室制品的基本要求等同安全試驗。有點不同的是效力試驗產(chǎn)品中主要成分的含量應接近或稍低于產(chǎn)品規(guī)程中規(guī)定的最低標準（高于的應做適當稀釋，特別是免疫期試驗）。v為了同時證明制品“試行規(guī)程”中所規(guī)定的基礎種子使用代次范圍的合理性，通常用處于最高代次水平的菌（毒）株懸液制備疫苗后，進行效力試驗。一旦試驗結果證明最高代次水平的疫苗具有令人滿意的免疫效果，則可認為規(guī)定范

21、圍內(nèi)的基礎種子均具有令人滿意的免疫原性。36v如果制訂產(chǎn)品出廠時的“效力檢驗”采用與參考疫苗對比的方法，則應在實驗室效力試驗中，除應使用實驗室制品進行效力試驗外，還應用參考疫苗進行系統(tǒng)的效力試驗，或提供有關參考疫苗效力試驗的詳細資料。v如果制訂產(chǎn)品出廠時的“效力檢驗”采用血清學檢驗替代方法，應進行血清抗體效價與攻毒保護平行關系研究，可結合最小免疫劑量試驗一起做。v如果制訂產(chǎn)品出廠時的“效力檢驗”采用疫苗抗原含量測定來替代，應進行抗原含量與靶動物免疫攻毒保護平行關系的研究。v原理是疫苗內(nèi)抗原含量與免疫攻毒保護率之間，通常存在明顯平行關系，不存在平行關系的不能采用此方法。v此效力試驗應結合最小免疫

22、劑量試驗一起做。37v多數(shù)實驗室效力試驗中可能會使用攻毒用強毒。對已經(jīng)有國家標準強毒株的，應使用標準強毒株，必要時增加使用當時的流行毒株。對沒有國家標準強毒株的，可使用自行分離的強毒株，無論是流行毒株還是自己分離的強毒毒種均應報告來源、歷史，并進行鑒定（毒力、外源病毒）。382 靶動物免疫攻毒試驗v靶動物免疫攻毒試驗是考察所有獸用疫苗的效力和評價治療用生物制品療效的一種最基本方法。v用實驗室制品接種一定數(shù)量的動物，經(jīng)一定時間后，采用強毒株攻擊免疫動物和對照動物。在攻毒后一定時間內(nèi)，一般都觀察動物的發(fā)病及死亡情況，統(tǒng)計免疫及對照動物的發(fā)病率或/和死亡率，來評估制品的效力。v有的制品發(fā)病、死亡不明

23、顯，需在觀察期結束時，將所有動物撲殺，進行大體病理和/或顯微病理組織學檢查，如PCV2，根據(jù)免疫動物和對照動物的病理剖檢變化、病理組織學病變評價疫苗的效力。v有的制品還應進行病原分離，根據(jù)免疫動物和對照動物的病原分離情況評估制品的免疫力。39v攻毒試驗定量免疫、定量強毒攻擊法定量免疫、定量強毒攻擊法定量免疫、變量強毒攻擊法定量免疫、變量強毒攻擊法變量免疫、定量強毒攻擊法變量免疫、定量強毒攻擊法抗血清被動免疫攻毒法抗血清被動免疫攻毒法（可以根據(jù)實際情況任選一種）（可以根據(jù)實際情況任選一種）403 最小免疫劑量v活疫苗，用不同劑量的菌（毒）種分別接種動物；滅活疫苗，用最高代次基礎種子制備疫苗菌（毒

24、）液，取不同含量的細菌（病毒）液，按成品生產(chǎn)工藝制備抗原含量不同的疫苗，或用固定含量的細菌（病毒）液制備疫苗后，取不同劑量的疫苗，分別接種不同組的動物；在接種后的適宜時間分別進行攻毒，以最小的劑量獲得有效保護就是該制品的最小免疫劑量。v最小免疫劑量的有效保護不能一概而論，病毒免疫原性好一些，有效保護能達到90100%，能達到90%以上用的最小劑量，就是該病毒的最小免疫劑量。細菌免疫原性相對差一些，一般保護80%就不錯，差的只能保護60%，象這種細菌，能達到保護60%用的最小劑量，就是該細菌的最小免疫劑量。414 免疫產(chǎn)生期及免疫持續(xù)期試驗v用實驗室制品接種一定數(shù)量的動物，同時用足夠數(shù)量的未接種

25、動物作為對照。接種后，每隔一定時間，用攻毒用強毒對一定數(shù)量的免疫動物和對照動物同時進行攻毒或采用已經(jīng)確認與攻毒保護率有平行關系的血清學方法測定抗體水平，觀察其產(chǎn)生免疫力的時間、免疫力達到高峰期的時間及高峰期持續(xù)時間，一直測到免疫力下降至保護力水平以下。以接種后最早出現(xiàn)良好免疫力的時間為該制品的免疫產(chǎn)生期，以接種后保持良好免疫力的最長時間為免疫持續(xù)期。42v有的微生物接種后可以獲得終生保護，有的微生物僅對動物的某一特定的生命期致病，而且時間很短的，可不進行免疫期試驗，但應詳細陳述相關資料。v通常情況下，不接受用非靶動物試驗獲得的免疫期試驗數(shù)據(jù)。v免疫期分主動免疫的免疫期和被動免疫的免疫期。43免

26、疫持續(xù)期試驗v免疫期試驗的成本高，費時長，還牽涉到動物保護問題。因此，為了限制在免疫期試驗中進行頻繁的動物攻毒，可以考慮用最低數(shù)量的免疫動物進行攻毒；采用適當?shù)呐卸ㄖ笜嘶騾?shù)（如抗體水平），而不采用攻毒試驗來衡量疫苗接種后的免疫效力。為了使這種替代指標或參數(shù)被認可，應提供充分的試驗依據(jù)，證明這種指標或參數(shù)在靶動物保護作用中起著相當大的作用，且該指標或參數(shù)與靶動物對該病的免疫保護力間存在良好的定性和定量關系。445 抗體效價與攻毒保護平行關系試驗v血清學效力檢驗與靶動物免疫攻毒保護相關性的研究 當成品的效力檢驗中采用血清學方法測定免疫動物抗體反應，而不采用免疫攻毒試驗時，就應該事先進行這樣的平行

27、關系試驗，以證明選用該血清學方法的合理性，并為建立判定標準提供依據(jù)。6 抗體消長規(guī)律的研究v疫苗接種動物后會在體內(nèi)產(chǎn)生抗體，為制定合理的免疫程序，應進行抗體消長規(guī)律的研究。此項研究屬于免疫產(chǎn)生期及持續(xù)期的內(nèi)容。采用生物制品免疫動物后，定期采血測定免疫動物最早產(chǎn)生抗體的時間，抗體高峰期、抗體持續(xù)期。457 保存期試驗的研究v制品的效力是穩(wěn)定性試驗中考察的最重要的指標。保存期效力檢驗的方法應與成品效力檢驗方法一致（如：ND滅活疫苗效力檢驗為注射20ul，使用劑量為0.3ml，保存期試驗應用20ul 來做，用0.3ml 進行效力保存期試驗結果無效）。v通常情況下，對于活疫苗，多采用病毒或細菌含量測定

28、方法，也有許多研究者采用免疫攻毒法進行；對滅活疫苗，多采用免疫攻毒方法或經(jīng)過驗證的血清學等方法。v對預期的保存期不到12個月的獸用生物制品，在前3個月內(nèi)每個月進行一次檢測，以后每3個月檢測一次；對預期的保存期超過12個月的，在保存期的前12個月內(nèi)應以后每3個月進行一次檢測，在第二年中每6個月進行一次檢測，以后每年進行一次檢測。468 治療制品療效試驗研究療效試驗療效試驗療效預試驗療效預試驗正式試驗正式試驗人工造病試驗人工造病試驗治療試驗治療試驗強毒株的選擇強毒株的選擇治療時間選擇治療時間選擇致病劑量選擇致病劑量選擇致病途徑選擇致病途徑選擇劑量選擇劑量選擇次數(shù)選擇次數(shù)選擇用至少用至少3批實驗室產(chǎn)

29、品，已確定批實驗室產(chǎn)品，已確定的治療時間、劑量和治療次數(shù)的治療時間、劑量和治療次數(shù)對每種靶動物進行療效試驗。對每種靶動物進行療效試驗。47四、診斷制品試驗研究診斷制品主要指標診斷制品主要指標敏感性：陽性樣品的檢出率，檢測限敏感性：陽性樣品的檢出率，檢測限特異性：陰性樣品的檢出率特異性：陰性樣品的檢出率重復性：批內(nèi)和批間重復性：批內(nèi)和批間適應性：不同環(huán)境、地理位置適應性：不同環(huán)境、地理位置穩(wěn)定性：保存期（與國外的主要差距）穩(wěn)定性：保存期（與國外的主要差距）符合率：與確診方法對比符合率：與確診方法對比48v對采用病原體制備抗原或血清的制品，應對病原體的基礎種子進行鑒定，鑒定可以比制苗的基礎種子簡化

30、一些，但應鑒定其抗原性、特異性、純凈性并測定保存期。v應測定基礎種子批、生產(chǎn)種子批不同代次的抗原性，包括測定產(chǎn)品規(guī)程中規(guī)定的最高代次種子的抗原性。并列出測定方法和標準。v應測定基礎種子的特異性（血清特異性、免疫特異性），并列出測定方法和標準。v對采用活的病原體制備抗原的制品，應對種子批進行細菌、支原體、外源病毒的檢驗。已有國家法定方法的，應采用法定方法。沒有法定方法的，可采用自行建立的方法，但須進行方法驗證。v應確定種子批的適宜保存條件，以保證生產(chǎn)的需要。49v對采用人工合成或基因重組技術制備的抗原或分子生物學試劑（如引物或基因片斷），應進行不同合成方法或不同序列抗原的抗原性、不同序列引物的比

31、較試驗。提供的試驗數(shù)據(jù)應能證明所采用的方法或抗原、引物序列是最佳選擇。v必要時，應提供與采用常規(guī)方法（由微生物體提?。┲苽涞目乖谋容^試驗數(shù)據(jù)，以證明合成或重組抗原與診斷目標抗原的同源性。對于引物或基因片斷等分子生物學試劑應進行序列測定，以證明該序列與診斷目標相關基因序列的同源性。50v對采用雜交瘤細胞制備的制品，應對雜交瘤細胞進行鑒定。v鑒定雜交瘤細胞的培養(yǎng)特性、染色體數(shù)、分泌抗體的活性、單克隆抗體亞類和雜交瘤細胞的純凈性并根據(jù)試驗結果確定雜交瘤細胞的使用代次和保存期。51工藝研究工藝研究抗原的制備工藝抗原的制備工藝抗體的制備工藝抗體的制備工藝引物或基因片段引物或基因片段制備工藝制備工藝通過

32、比較試驗確定最佳的生產(chǎn)工藝，通過比較試驗確定最佳的生產(chǎn)工藝，提供培養(yǎng)方法、接種量、收獲時間、提供培養(yǎng)方法、接種量、收獲時間、滅活、濃縮純化方法滅活、濃縮純化方法效價及特異性測定效價及特異性測定標化方法及標準標化方法及標準實驗動物種類、免疫劑量、免疫途實驗動物種類、免疫劑量、免疫途徑、免疫次數(shù)、采血時間徑、免疫次數(shù)、采血時間抗體純化方法、標記方法抗體純化方法、標記方法效價和特異性測定方法及標準效價和特異性測定方法及標準引物或基因片段的合成方法引物或基因片段的合成方法鑒定方法和鑒定標準鑒定方法和鑒定標準52診斷試驗診斷試驗條件篩選條件篩選【包括載體、配套試劑（稀釋液、底物、終止液等） 、反應時間】

33、免疫學診斷制品免疫學診斷制品分子生物學診斷分子生物學診斷制品制品試驗條件篩選可結合抗原、抗體試驗條件篩選可結合抗原、抗體的效價和特異性測定方法進行的效價和特異性測定方法進行必須通過不同試驗條件下的比較必須通過不同試驗條件下的比較試驗確定最佳的試驗參數(shù)試驗確定最佳的試驗參數(shù)試驗條件的篩選可結合基因擴增、試驗條件的篩選可結合基因擴增、雜交及敏感性和特異性測定方法雜交及敏感性和特異性測定方法進行進行通過不同試驗條件下的比較試驗通過不同試驗條件下的比較試驗確定最佳的試驗參數(shù)確定最佳的試驗參數(shù)531試劑盒的組裝及成品檢驗v在制備所有試劑盒組份并經(jīng)過半成品檢驗合格后，可進行試劑盒的組裝。組裝試劑盒時，應根據(jù)實際應用情況來確定每個試劑盒的試劑用量，采用最方便使用的包裝。并對組裝后的完整試劑盒進行成品檢驗。2試劑盒的試驗以及成品檢驗項目和標準的確定v在試劑盒組裝成功的基礎上通過性狀、無菌檢驗、敏感性、特異性、可重復性、消長規(guī)律研究和保存期等試驗來驗證試劑盒的質量，并確定試劑盒的成品檢驗項目和標準。54（1）敏感性v應使用至少3批制品對已知發(fā)病動