生物化學實驗教學大綱

1、生物化學實驗教學大綱 一實驗目的二實驗內(nèi)容三實驗學時安排四考試方法五參考教材      一實驗目的生物化學是一門實驗性學科，其所有知識均來自于實驗。本課程著眼于學生學習和掌握生物化學課程的基本理論、基本知識以及實驗技能，培養(yǎng)學生具有初步分析問題和解決問題的能力。生物化學實驗課通過學習滴定、比色、紙層析、電泳、生化制備等基本實驗技術，分析研究糖、脂、蛋白質、核酸、酶、維生素等生化物質及某些代謝過程，培養(yǎng)學生具有初步的科學實驗能力及嚴格的科學作風，同時驗證生物化學的某些基本理論知識，加深感性認識，并鍛煉初步的綜合實驗能力。返回頂部二實驗內(nèi)容

2、3; 實驗一 糖的呈色反應及還原糖的檢驗一實驗目的學習鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法；了解鑒定還原糖的方法及其原理。二實驗內(nèi)容Molish反應、蒽酮反應、Seliwanoff反應、Bial反應、Fehling反應。 三.實驗過程1. 呈色反應（1） Molish 反應（2） 蒽酮反應（3） Seliwanoff反應（4） Bial反應2. 還原糖的檢驗（1） Fehling反應（2） Benedict反應（3） Barfoed反應四.作業(yè)與思考1. 列表總結和比較本實驗7種顏色反應的原理及其應用.2. 應用Molish反應和Seliwanoff反應分析未知樣品時，應注意些什么問題？3. 舉例說

3、明那些糖屬于還原糖.· 實驗二 脂類組成對脂類單分子層通透性的影響一、實驗目的學習制作脂類單分子層和鑒定它的原理及方法，比較不同脂類所形成的脂類單分子層通透性的差異。二、實驗內(nèi)容以脂類單分子層作為模式膜，用甲烯藍為指示劑，觀察不同脂類單分子層通透性的影響。三.實驗過程1. 溶液準備2. 分光光度計測樣四.作業(yè)與思考1. 試述生物膜的基本結構與功能2. 解釋下列名詞：雙親媒性分子、脂類單分子層、磷脂雙分子層、膜的內(nèi)在蛋白質和外在蛋白質.· 實驗三 蛋白質濃度的測定（1）Folin-酚法一、 實驗目的學習Folin-酚法的原理及方法，制備標準曲線，測定未知樣品中蛋白質含量。二、

4、實驗內(nèi)容制備Folin-酚法標準曲線，測定未知樣品蛋白質濃度。三.實驗過程1. 制備Folin-酚法標準曲線2. 測定未知樣品蛋白質濃度3. 計算四.作業(yè)與思考1. Folin-酚法測定蛋白的原理是什么？2. 有哪些因素可以干擾Folin-酚測定蛋白含量？3. 作為標準蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在應用時有何要求？· 實驗四 蛋白質濃度測定（2）紫外線吸收法一、 實驗目的學習紫外線（UV）吸收法測定蛋白質含量的原理，了解紫外分光光度計的構造原理，掌握它的使用方法。二、實驗內(nèi)容標準曲線的繪制及未知濃度蛋白質溶液的測定。三.實驗過程1. 標準曲線的繪制2. 樣品測定四.作業(yè)與思考1. 本法

5、與其它測定蛋白質含量法相比，有哪些優(yōu)點？2. 若樣品中含有干擾測定的雜質，應如何校正實驗結果？· 實驗五 氨基酸的分離與鑒定濾紙層析法一、 實驗目的了解氨基酸濾紙層析的原理及操作方法。二、實驗內(nèi)容進行氨基酸的紙層析及定性鑒定。三.實驗過程1. 濾紙的剪裁2. 點樣3. 展層4. 定性鑒定5.定量測定四.作業(yè)與思考1. 做好本實驗的關鍵是什么？2. 實驗操作過程，為何不能用手接觸濾紙？3. 影響Rf 制的因素有哪些？· 實驗六 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳一、 實驗目的了解電泳的一般原理，掌握醋酸纖維素薄膜電泳操作技術，測定人血清中各種蛋白質的相對百分含量。二、實驗內(nèi)容進行血清

6、蛋白醋酸纖維素薄膜電泳并進行結果判斷。三.實驗過程1. 儀器與薄膜的準備2. 點樣3. 電泳4. 染色與漂洗5. 透明6. 結果判斷與定量四.作業(yè)與思考1.根據(jù)人血清中血清蛋白各組分等電點，如何估計它們在pH8.6的巴比妥巴比妥鈉電解緩沖液中移動的相對位置2.簡述醋酸纖維素薄膜電泳原理及優(yōu)點· 實驗七 蛋白質和氨基酸的呈色反應一、 實驗目的學習常用的鑒定蛋白質氨基酸的方法及其原理；學習幾種特定氨基酸的特殊顏色反應及其原理。二、實驗內(nèi)容雙縮脲反應、茚三酮反應、黃色反應、茚三酮反應。三.實驗過程1. 加樣2. 觀察四.作業(yè)與思考1. 綜合分析、對比蛋白質和氨基酸各種鑒定方法的特點和用途？

7、2. 如果蛋白質水解作用一直進行到雙縮脲反應呈陰性結果，能對此作何結論？3. 茚三酮反應的陽性結果是否是同一色調？若不是，為什么？· 實驗八 蛋白質的沉淀、變性反應一、 實驗目的了解蛋白質的沉淀反應、變性作用和凝固作用的原理及它們的相互關系；學習鹽析和透析等生物化學的操作技術。二、實驗內(nèi)容可逆沉淀反應，不可逆沉淀反應。 三.實驗過程1. 蛋白質的可逆沉淀反應蛋白質的鹽析作用2. 蛋白質的不可逆沉淀反應（1） 重金屬沉淀蛋白質（2） 有機酸沉淀蛋白質（3） 無機酸沉淀蛋白質（4） 加熱沉淀蛋白質 3.蛋白質可逆沉淀與不可逆沉淀的比較四.作業(yè)與思考1. 為什么雞蛋清蛋白可用作鉛中毒或汞中

8、毒的解毒劑？2. 蛋白質分子中的那些集團可以與（1） 重金屬離子作用而使蛋白質沉淀？（2） 有機酸、無機酸作用而使蛋白質沉淀？3. 高濃度的硫酸銨對蛋白質溶解度有何影響，為什么？4. 在蛋白質可逆沉淀反應的實驗中，為何要用蛋白質氯化鈉溶液？· 實驗九 酵母RNA的提取與地衣酚顯色測定法一、 實驗目的了解并掌握稀堿法提取RNA及地衣酚顯色法測定RNA含量的基本原理及具體方法。二、實驗內(nèi)容用稀堿法提取酵母細胞RNA，并用地衣酚顯色法測定。三.實驗過程1. 酵母RNA提取2. RNA地衣酚顯色測定（1） 標準曲線的制作（2） 樣品的測定（3） RNA含量的計算四.作業(yè)與思考1.用你所學過的

9、化學知識，分析三種催化劑：FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O和CuO,哪種催化劑的催化效果更好？ 2.地衣酚反應中，干擾RNA測定的因素有哪些？如何能減少它們的影響？· 實驗十 動物組織DNA的制備一、 實驗目的學習鹽溶液法從動物組織中提取脫氧核糖核酸的原理及操作方法。二、實驗內(nèi)容以豬肝為原料用不同濃度的鹽溶液提取其中的脫氧核糖核酸。三.實驗過程1. DNA的提取2. DNA含量的測定（1） 標準曲線的制定（2） 樣品的測定（3） DNA含量的測定四.作業(yè)與思考1. 結合本人實驗操作的體會，試述在提取過程中應如何避免大分子DNA的降解和斷裂。2. DNA制品

10、都可以用哪幾種方法測定其含量？試從它們的原理、準確性等方面加以比較。· 實驗十一 核酸濃度測定（1）定磷法一、 實驗目的掌握利用核酸定磷測定法測定核酸的含量。二、實驗內(nèi)容通過對總磷、無機磷的測定，計算未知樣品中的核酸濃度。三.實驗過程1. 定磷標準曲線的制定2. 測定總磷量（1） 配制RNA樣品溶液（2） 樣品的消化、總磷量和回收率測定（3） 無機磷的測定 3.核酸含量計算四.作業(yè)與思考1. 測定磷的回收率有何意義？2. 為什么所用水的質量、鉬酸銨的質量和顯色時酸的濃度對測定結果影響較大？· 實驗十二 核酸濃度測定（2）紫外線吸收法一、 實驗目的了解紫外線（UV）吸收法測定

11、核酸濃度的原理，并進一步了解紫外分光光度計的使用方法。二、實驗內(nèi)容用紫外線吸收法測定核酸濃度。三.實驗過程1.標準曲線的繪制2.樣品蛋白質濃度的測定四.作業(yè)與思考1. 干擾本實驗的物質有哪些？2. 設計排除這些干擾物的實驗。· 實驗十三 維生素A、B1、B2的定性鑒定一、實驗目的了解維生素A、B1、B2定性鑒定的原理及方法。二、實驗內(nèi)容維生素A的定性鑒定以及維生素B1、B2的定性鑒定。三.實驗過程1. 維生素A2. 維生素B1（重氮試劑法）3. 維生素B1（熒光法）4. 維生素B2四.作業(yè)與思考1. 舉出含有維生素A、B1和B2最豐富的天然食物。2. 說明4種定性鑒定維生素A、B1和

12、B2的基本原理。3. SbCl3呈色反應檢測維生素A實驗的重要環(huán)節(jié)是什么？4. 試把上述4種鑒定方法之一改編為定量檢測方法。· 實驗十四 維生素C的定量測定一、實驗目的了解用2，6二氯酚靛酚滴定法測定維生素C含量的原理及方法。二、實驗內(nèi)容用2，6二氯酚靛酚滴定法定量測定維生素C的含量。三.實驗過程1. 提取2. 標準液的滴定3. 樣品滴定4. 計算四.作業(yè)與思考1.為了測定準確的維生素C含量，實驗過程中都應注意哪些操作步驟？為什么？2.試簡述維生素C的生理意義。· 實驗十五 酶的激活劑、抑制劑及溫度對酶的活性的影響一、實驗目的了解酶反應的激活劑、抑制劑，了解溫度對酶活性的影

13、響。二、實驗內(nèi)容了解酶的激活劑、抑制劑、酶的最適反應溫度。三.實驗過程四.作業(yè)與思考1. 激活劑可分哪幾類？本實驗中的氯化鈉、硫酸銅屬于哪種類型？2. 抑制劑與變性劑有何不同？試舉例說明。3.酶反應的最適溫度是酶反應的物理常數(shù)嗎？它與哪些因素有關？· 實驗十六 血清谷丙轉氨酶的測定（King氏法）一、 實驗目的掌握血清谷丙轉氨酶（SGPT）活力測定的方法，學習繪制標準曲線，并學習如何設計實驗。二、實驗內(nèi)容用King氏法測定血清谷丙轉氨酶的活性。三.實驗過程1. 制備標準曲線2. 繪制標準曲線3. 樣品及回收率測定4. 結果計算（1） 標準曲線測定法（2） 標準管測定法（3） 計算回收

14、率四.作業(yè)與思考1. 什么叫做轉氨基作用？根據(jù)所學理論闡明轉氨基作用在蛋白質的合成與分解及糖、脂肪代謝中有何重要作用？2. 回收率測定在實際工作中有何用途？· 實驗十七 乳酸脫氫酶活力測定一、實驗目的學習LDH活力測定原理，測定豬肉提取液LDH活力二、實驗內(nèi)容利用動物肌肉制備乳酸脫氫酶的組織提取液，用紫外分光光度法測定LDH的活力。三.實驗過程1. 制備肌肉勻漿2. LDH活力測定3. 蛋白質含量測定4. 數(shù)據(jù)處理四.作業(yè)與思考 1.簡述用紫外分光光度法測定以NAD+為輔酶的各種脫氫酶測定原理。· 實驗十八 聚合酶鏈式反應（PCR）掌握基本PCR技術的原理，學會PCR擴增過

15、程中各步驟的操作，了解PCR擴增儀的使用方法，學會擴增結果的判讀（瓊脂糖凝膠電泳法）。二、實驗內(nèi)容以大腸桿菌23SRNA的DNA中106476bp的特異性區(qū)域為擴增目的片段，通過PCR技術的基本要求，擴增得到370bp的擴增產(chǎn)物，并通過瓊脂糖凝膠電泳的方法對結果進行分析。 返回頂部三實驗學時安排（總課時為54學時）：第一學期實驗序 號實 驗 名 稱周 次學 時類 型實驗1糖的呈色反應及還原糖的檢驗3-43驗 證實驗2脂類組成對脂類單分子層通透性的影響5-63驗 證實驗3蛋白質濃度測定（1）Folin酚法7-83綜 合實驗4蛋白質濃度測定（2）紫外線吸收法9-103綜 合實驗5氨基酸的分離與鑒定濾紙層析法11-124綜 合實驗6血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳13-144綜 合實驗7蛋白質和氨基酸的呈色反應15-162驗 證實驗8蛋白質的沉淀、變性反應15-162驗 證實驗9酵母RNA的提取與地衣酚顯色測定法17-184驗 證第二學期實驗序 號實 驗 名 稱周 次學 時類 型實驗10動物組織DNA的制備3-43綜 合實驗11核酸濃度測定（1）定磷法5-63綜 合實驗12核酸濃度測定（2）紫外線吸收法7-83綜 合實驗13維生素A、B1、B2的定性鑒定9-