主要熒光素一覽表

1、(1)熒光素類Fluorescein標(biāo)準(zhǔn)熒光素(Reference standard )之一，在其基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，可產(chǎn)生一系列熒光素衍生物。Fluorescein 適用于Argon-ion Laser的488nm光譜線，有相對(duì)高的熒光吸收，較好的熒光產(chǎn)率以及良好的水溶性。標(biāo)記蛋白時(shí)通常不會(huì)產(chǎn)生蛋白沉淀。與其他熒光素類衍生物一樣，F(xiàn)luorescein 具有光淬滅率高，pH敏感性強(qiáng)與發(fā)射波譜寬的缺點(diǎn)。主要應(yīng)用于聚焦激光掃描微陣列( Confocal laser scanning microscopy )和流式細(xì)胞計(jì)應(yīng)用(Flow cytometry )。FITC異硫氧酸熒光素，F(xiàn)luores

2、cein isothiocyanate ,是熒光素衍生物的一種，5-FITC較6-FITC更經(jīng)常使用。FITC的異硫氧酸基能與氨基反應(yīng)，可用于標(biāo)記氨基修飾DNA 一旦形成，產(chǎn)物極為穩(wěn)定。適用于Argon-ion Laser 的 488nm光譜線，Abs/Em=492/519nm (pH=9.0)。與蛋白的結(jié)合力也強(qiáng)。FITC具有熒光素衍生物的普遍特性。在水中易變壞，不能長(zhǎng)久保存。FITC-Oligo 廣泛用于雜交探針；FITC-多肽用于Edman降解蛋白測(cè)序；FITC也經(jīng)常被用于蛋白電泳檢 測(cè)(即使是毛細(xì)管電泳)和熒光能量激發(fā)轉(zhuǎn)移測(cè)試。FAM竣基熒光素，Carboxyfluorescein ,

3、是熒光素衍生物的一種，5-FAM較6-FAM更經(jīng)常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester ,即 5-FAM (NHS 廣泛存在于熒光標(biāo)記試劑盒。與FITC相比，F(xiàn)AM與氨基反應(yīng)更快，產(chǎn)物也更穩(wěn)定，但 FITC結(jié)合蛋白的量更大且進(jìn)程更易于控制。FAM也適用于 Argon-ion Laser的488nm光譜線，Abs/Em=492/518nm (pH=9.0),具有熒光素衍生物的普遍特性，在水中穩(wěn)定。5-FAM主要應(yīng)用于DNA自動(dòng)測(cè)序中，標(biāo)記其中的d/ddCTP (PE公司)，也經(jīng)常用于 PCFT物定量，核酸探針等。TET四氯熒光素，Tetrachloro

4、 fluorescein ,是熒光素衍生物的一種。TET以及HEX均是在FAM基礎(chǔ)上加以改進(jìn)的，氯原子使FAM的Abs與Em值都產(chǎn)生一定的紅移，并在一定程度上減弱了 pH敏感性。TET也適用于 Argon-ion Laser 激發(fā)光源，Abs/Em=521/536nm。TET, HEX FAMffi TAMRAT配合用于 DNA自動(dòng)測(cè)序中，其中TET用于標(biāo)記d/ddATP,HEX用于標(biāo)記d/ddGTP 或 d/ddATP (PE公司)HEX,是熒光素衍生物的一種六氯熒光素，Hexachloro fluorescein適用于 Argon-ion Laser 激發(fā)光源，Abs/Em=535/556

5、nm。(請(qǐng)參見 TET介紹)JOE竣基-4',5'- 二氯-2',7'- 二甲氧基熒光素，Carboxy-4',5'-dichloro-2' , 7'-dimethoxyfluorescein , 是熒光素衍生物的一種，6-JOE更被廣泛使用。JOE熒光產(chǎn)量高，pH敏感性弱，適合于標(biāo)記蛋白。6-JOE也適合于Argon-ion Laser 激發(fā)光源，Abs/Em=520/548 (pH=9.0)常用于DNA自動(dòng)測(cè)序，標(biāo)記d/ddATP,也經(jīng)常被用于進(jìn)行電泳檢測(cè)與PC*物定量。(2)羅丹明類(Rhodamine dye)R 110標(biāo)

6、準(zhǔn)熒光素(Reference standard )之一，在其基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，即可產(chǎn)生一系列羅丹明類衍生物。與Fluorescein 類衍生物相比，羅丹明類熒光素具有更強(qiáng)的光穩(wěn)定性，更高的熒光產(chǎn)量以及更低的pH敏感性羅丹明類熒光素極為適合于標(biāo)記寡核甘酸，但蛋白會(huì)引起大多數(shù)羅丹明類熒光素的熒光淬滅，故大多 數(shù)不適宜用于標(biāo)記蛋白。R110被用于DNA自動(dòng)測(cè)序。TAMRA全稱竣基四甲基羅丹明，即 Carboxytetramethylrhodamine ,是羅丹明類熒光素衍生物，6- TAMRA被廣泛使用。TAMRA1少數(shù)幾個(gè)能用于標(biāo)記蛋白的，6- TAMRAg用于Argon-ion Laser激發(fā)

7、光源，Abs/Em=547/573nm(Ph=8.0) , 6-TAMRA(NHS常用于熒光標(biāo)記試劑盒中。6- TAMRA主要用于DNA自動(dòng)測(cè)序中。Texas RedTexas Red是一個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)熒光素，與Fluorescein 幾乎沒有波譜重疊，只適合于 Ar-Kr Laser 的568nm 光譜線或 He-Ne Laser 的 594 光譜線，比 Tetramethylrhodamine 和 LissamineTM Rhodamine B 波長(zhǎng)更長(zhǎng)， 熒光量更高。Texas Red在熒光微陣列和流式細(xì)胞計(jì)中更被經(jīng)常作為第三波長(zhǎng)標(biāo)記(Third labels) 。(3) BODIP償BODI

8、P償熒光素是由分子探針公司開發(fā)，以用來替代那些有部分缺陷的傳統(tǒng)熒光素，普遍具有熒光產(chǎn)量高，pH敏感性低(無離子變化)，光穩(wěn)定性強(qiáng)以及發(fā)射波譜窄的優(yōu)點(diǎn)，故BODIP償熒光素已被廣泛用于核酸，脂肪酸，磷脂以及各種受體。同時(shí)，由于在電泳過程中對(duì)序列片段影響小，故已被逐漸用于DNA自動(dòng)測(cè)序。但相對(duì)而言，BODIPY類熒光素并不特別適合標(biāo)記蛋白.BODIPY FL可代替 FluoresceinBODIPY R6(M代替 Rhodamine 6GBODIPY TMFRH弋替 TetramethylrhodamineBODIPY TR可代替 Texas Red這些BODIPY類熒光素具有與被替代物幾乎類似的

9、光譜特征，能共用同樣的光過濾器與激發(fā)光源，但更具優(yōu)點(diǎn)。(4)其他熒光素Cascade blueCascade blue是在在(pyrene)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上改造得來的，即sulfonated pyrene,它是一種短波長(zhǎng)紫外激 發(fā)熒光素，與另一種常用的紫外熒光素 Aminocoumarin相比,Cascade blue 的Em與Fluorescein 有更小的 光譜重疊，有更高的熒光吸收和更大的熒光產(chǎn)量 .Cascade blue在376nm處存在第二個(gè)吸收峰，水中不穩(wěn)定。Cascade blue主要用于標(biāo)記蛋白，作為極性示蹤子(polar tracer)可進(jìn)行膜蛋白定位等.但也能用于標(biāo) 記核酸和葡

10、聚糖。Aminocoumarin一種短波長(zhǎng)紫外激發(fā)熒光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,紅移現(xiàn)象明顯，比Cascadeblue有更長(zhǎng)的發(fā)射波長(zhǎng)，肉眼觀察明顯，更適用于confocal。表1:主要熒光激發(fā)光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines(nnj)Mercury-arc Lamp366,405,436,546,578Xenon-arc Lamp250-1000(continous)Tungsten-halogen Lamp350-1000(continous)Cr:LiSAF Laser430Helium-cad

11、mium Laser325,442Argon-ion Laser488,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543,594,633Krypton-ion Laser568,647表2 :主要熒光素一覽表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to 650 upon association with RNA, useful for flow cytometry.FAM492/518Most widely used gree

12、n fluorescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argon-ion aser, prone to photobleaching, pH sensitive betweenpH 5-8,is widely used for automated DNA sequencingFITC494/519Subject to argon-ion laser, widespread use for hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRETHEX535/

13、556pH insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye for automated DNA sequencing.Lissaminerhodamine B570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanning microscope.easier to label protein than TMR.Pyrene340/378Exci

14、mer:470Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission,used in protein comformation and oxygen sensors.ROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used in automated DNA sequencing.TET521/536pH insensitive, used for automated DNA sequencingTetramethylrhodamine5

15、55/580pHinsensitive , photostable,Widely used for automatedDNA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar-Kr 568nm and He-Ne 594nm spectra, brighter and lower background than other red dyes as third label, used in confocal laser scanning microscopesDansyl Chloride372/NDEnvironmentally sensitive, la

16、rge stokes shift for protei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenching group useful for fluorescence resonance energy transfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein andtetramethylrhodamine, good photostable, preferred nucleotide off proteinCascade Blue400/420Resistant to quenching upon protein conjugation, Water soluble.BODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine