實(shí)驗(yàn)三革蘭氏染色

1、實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的單染色與革蘭氏 導(dǎo)|_染色法1微生物染色的基本原理微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn) 行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作 用等?；瘜W(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生的各種化 學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣， 堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附。細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，pH值大約在25之間，故在中性、堿性或弱酸 性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶 正電。因此，帶陰電的細(xì)菌常和帶陽(yáng)電的堿性染料進(jìn)行結(jié)合。所以，在細(xì)菌學(xué)上常用堿性染料進(jìn)

2、行染色。2染色方法微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染 料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染 料，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故亦稱鑒別染色法。常用的復(fù)染色法有 革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)的（如芽 胞、鞭毛、細(xì)胞核等）特殊染色法。實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的革蘭氏染色法一、目的要求1學(xué)習(xí)掌握革蘭氏染色法。2 了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。二、基本原理三、器材1菌種大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2溶液和試劑革蘭氏染色液，草酸鞍結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，番紅復(fù)染液3儀器或用具

3、 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、無(wú)菌生理鹽水、載玻片 -夾子、濾紙四、操作步驟1制片涂片:固體培養(yǎng)物,液體培養(yǎng)物。注意事項(xiàng)：載玻片要潔凈無(wú)油跡；滴加生理鹽水和取菌不宜過(guò)多；涂片均勻，不宜過(guò)厚。干燥：室溫自然干燥。固定：涂面朝上，通過(guò)火焰23次。熱固定溫度不宜過(guò)高,以玻片背面不燙手為宜。氏染色-制片C.固定菌體A.加小滴水B.涂成薄層2初染滴加結(jié)晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜），染色1一2 min,水洗。3媒染用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋菌膜約lmin,水洗。4脫色用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，用滴管流加95%的乙 醇脫色，直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí)，立即水

4、洗。脫色時(shí)間一般 液2030 So脫色不足與過(guò)度都會(huì)影響和改變?nèi)旧慕Y(jié)果。5復(fù)染用番紅液復(fù)染約2min,水洗。革蘭氏染色-染色6鏡檢干燥后，用油鏡觀察。藍(lán)紫色為G+,紅色為G-。7混合涂片染色將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作混合涂片、染色、鏡檢進(jìn)行 比較。Procedures of Gram StainingPurple dyeIodineAlcoholSafranin(d) Application of safranin (counterstain)(a) Application of crystal violet (purple dye)(b) Application of iodine (m

5、ordant)(c) Alcohol wash(decolorization)Gram positiveGram negative?mm ovijf &.111JOOrv s «ifPy «HOu (F!FtPUuT» hwr»w Icj ibcC3"y p-.a oomdroo <?' O*« W* - OiftfYwrxrT<M> K OOjsX'IwJCimif urti c.二mHz Fc.?c rt itc.ri.amjc-c j|.*c«jwrirwiitirjri.竿驗(yàn)報(bào)告1.說(shuō) 明 經(jīng)革蘭 氏染色后大腸肝菌和 金黃色葡萄球菌的染色結(jié)果。2.思考題思考題1.現(xiàn)有一株未知桿菌，個(gè)體明顯