實驗二凝集反應(yīng)

1、實驗二實驗二 凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)（agglutination)沉淀反應(yīng)(precipitation)補體結(jié)合實驗中和實驗免 疫 酶 標(biāo) 技 術(shù) ( e g . ELISA)免疫熒光技術(shù)放射免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)經(jīng)典反應(yīng)經(jīng)典反應(yīng)現(xiàn)代反應(yīng)現(xiàn)代反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)類型抗原抗體反應(yīng)類型抗原或抗體的檢測方法抗原或抗體的檢測方法反應(yīng)類型反應(yīng)類型抗原類型及例子抗原類型及例子凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)顆粒性顆粒性Ag， 如細(xì)菌、如細(xì)菌、RBC、表面結(jié)合可、表面結(jié)合可溶性溶性Ag的乳膠顆粒等的乳膠顆粒等沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)可溶性可溶性Ag， 如血清中免疫球蛋白、補體、如血清中免疫球蛋白、補體、FP、HbsAg等等補體結(jié)合補體

2、結(jié)合實驗實驗有補體參與，有補體參與，SRBC和其溶血素組成指示和其溶血素組成指示系統(tǒng)系統(tǒng)中和實驗中和實驗特殊作用的特殊作用的Ag，如病毒、毒素、激素、酶，如病毒、毒素、激素、酶n1.1 1.1 經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)1.2 1.2 現(xiàn)代的抗原抗體反應(yīng)：現(xiàn)代的抗原抗體反應(yīng)： 現(xiàn)代抗原抗體反應(yīng)用標(biāo)記技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的肉眼可現(xiàn)代抗原抗體反應(yīng)用標(biāo)記技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的肉眼可見反應(yīng)，其特異性、敏感性均增加，且可以定性、見反應(yīng)，其特異性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺點是需特殊精密檢測儀定量甚至定位；缺點是需特殊精密檢測儀。 名稱名稱標(biāo)記物標(biāo)記物 檢測儀器檢測儀器缺點缺點免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫酶標(biāo)技

3、術(shù) 酶酶酶標(biāo)儀酶標(biāo)儀 免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù) 熒光熒光熒光顯微鏡或流熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀式細(xì)胞儀 放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 同位素同位素 液閃儀液閃儀放射性污染，放射性污染，有半衰期有半衰期發(fā)光免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù) 發(fā)光劑發(fā)光劑 發(fā)光現(xiàn)微測定儀發(fā)光現(xiàn)微測定儀 凝集反應(yīng)的定義及基本類型凝集反應(yīng)的定義及基本類型 1直接凝集試驗 顆粒性Ag與相應(yīng)Ab的反應(yīng) 玻片法：如血型的鑒定、細(xì)菌菌種的鑒定 試管法：肥達(dá)氏反應(yīng) 2間接凝集試驗 （可溶性Ag+載體=致敏顆粒）與相應(yīng)Ab的反應(yīng) 3間接凝集抑制試驗 可溶性Ag與相應(yīng)Ab作用后，再與致敏顆粒反應(yīng) 4. 反相間接凝集試驗 （可溶性Ab+載體=致敏顆粒)

4、與相應(yīng)Ag的反應(yīng) 試管凝集反應(yīng)示意圖試管凝集反應(yīng)示意圖肥達(dá)氏反應(yīng)-用已知傷寒菌的H(鞭毛)和O(菌體)以及甲型(A)與乙型(B)副傷寒沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)液與病人血清做凝集試驗，用于傷寒副傷寒的輔助診斷或用于流行病學(xué)調(diào)查的免疫凝集實驗。 人的紅細(xì)胞表面有20幾種血型抗原系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)是第一個被描述的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，由Landsteiner于1901年提出：血型ABABO紅細(xì)胞上的凝集原（抗原）ABA和B無抗原血型鑒定的原理血型鑒定的原理根據(jù)紅細(xì)胞上所含抗原種類將人類血型分為如下血型：ABO血型系統(tǒng)中有兩種抗原，分別稱為A抗原和B抗原，均存在于紅細(xì)胞膜的外表面。1. 抗原本質(zhì)：血型抗原是鑲嵌于紅細(xì)

5、胞膜上的糖蛋白與糖脂，ABO抗原特異性是在H抗原基礎(chǔ)上形成的2. 抗體本質(zhì)： 血漿中存在兩種相應(yīng)的抗體即抗A抗體和抗B抗體血型ABABO紅細(xì)胞上的凝集原（抗原）ABA和B無抗原血清中的凝集素（抗體）抗B抗A無抗體抗A和抗B ABO血型系統(tǒng)的抗體為天然抗體天然抗體，主要為IgM，不能通過胎盤。1. 如果交叉配血試驗的兩側(cè)都沒有凝集反應(yīng)，為配血相合， 可以進行輸血；2. 如果主側(cè)有凝集反應(yīng)，則為配血不合，不能輸血；3. 如果主側(cè)不引起凝集反應(yīng)，而次側(cè)有凝集反應(yīng)，只能在應(yīng)急情況下輸血，輸血時不宜太快太多（300ml），并密切觀察，如發(fā)生輸血反應(yīng)，應(yīng)立即停止輸注。 載玻片 1塊/每人 *用完各自用水沖

6、洗凈置消毒缸三棱針 1根/每人 用后棄垃圾斗棉簽 根/每人（先取再取1) 用后棄垃圾斗牙簽 1根/每人（兩端使用） 用后棄垃圾斗碘伏生理鹽水試管試管架標(biāo)記筆實驗材料實驗材料操作步驟操作步驟 i 取血：搓揉左手無名指的指腹碘伏消毒用三棱針刺1-2滴血將無名指的指腹封住盛有鹽水的試管管口，用傾倒法將血滴洗入鹽水中并混勻形成1%的血球懸液。 ii 鑒定：取潔凈玻片一塊，用標(biāo)記筆在中央劃線分區(qū)，標(biāo)明“A”、“B”區(qū)在“A”、“B”區(qū)分別滴加抗A、抗B血清各1滴用毛細(xì)吸管吸取待檢的血球懸液滴入抗A、抗B血清中，用牙簽兩端分別拌勻?qū)⒉Ｆ匠质种?，前后左右轉(zhuǎn)動使之充分混勻，室溫放置10-15分鐘后觀察結(jié)果。

7、 注意事項注意事項 取血時，注意無菌操作，避免HBsAg的交叉污染（*HBsAg攜帶者）； 刺血時，盡可能一次性成功，用力適當(dāng)，讓血自然流出或搓揉后流出為佳，勿強行擠壓。 鑒定時，滴1滴抗血清及血球懸液即可，多則兩邊易混；牙簽兩頭不可混用； O型血無凝集現(xiàn)象，無須反復(fù)檢測。 血型血型抗抗B血清血清抗抗A血清血清O_A_+B +_AB+結(jié)果判斷結(jié)果判斷 ABO血型的遺傳規(guī)律血型的遺傳規(guī)律 ？父母血型分別為？父母血型分別為A型、型、B型，他們型，他們子女的血型可能是何種？子女的血型可能是何種？父母分別為？父母分別為A型和型和O型，子女有無型，子女有無可能是可能是B型型 思考思考三、E-花結(jié)形成實驗 原理原理 人的外周血T淋巴細(xì)胞上特有能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的受體，稱E受體；在一定實驗條件下，綿羊紅細(xì)胞與該受體結(jié)合形成以T細(xì)胞為中心，四周繞以綿羊紅細(xì)胞的玫瑰花團，故稱E花結(jié)實驗。 E受體與CD2分子、LFA-2（淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原）為同一物質(zhì)。 花結(jié)花結(jié)分類：分類：Ea-RFC