實(shí)驗(yàn)五葉綠素含量的測(cè)定

1、深圳大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱(chēng):植物學(xué)生理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)： 五、葉綠素含量的測(cè)定學(xué)院專(zhuān)業(yè):生物科學(xué)指導(dǎo)教師鄒永東報(bào)告人：張嘉慧 學(xué)號(hào)：2010300077班級(jí):3實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2012年4月12日實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交時(shí)間：2011年4月19日教務(wù)處制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、熟悉使用分光光度計(jì)。2、學(xué)會(huì)如何測(cè)定葉綠素的含量。二、實(shí)驗(yàn)原理：葉綠素不溶于水，溶于有機(jī)溶劑，可用多種有機(jī)溶劑，如丙酮、乙醇或 二甲基亞硯等研磨提取或浸泡提取。葉綠色素在特定提取溶液中對(duì)特定波長(zhǎng) 的光有最大吸收，用分光光度計(jì)測(cè)定在該波長(zhǎng)下葉綠素溶液的吸光度（也稱(chēng)為 光密度）,再根據(jù)葉綠素在該波的不同，測(cè)定各特定峰值波長(zhǎng)下的光密度，再根據(jù) 色素分子

2、在長(zhǎng)下的吸收系數(shù)即可計(jì)算葉綠素含量。根據(jù)比爾定律，利用葉綠素a和b吸收光譜該波長(zhǎng)下的消光系數(shù)，計(jì)算出濃 度.葉綠素a的80%丙酮提取液的最大吸收峰為663nm,葉綠素b的吸收峰為 645nm.這樣,葉綠素a和b在兩種波長(zhǎng)下濃度與光密度的關(guān)系可用下式表示：D663= 82.04 Ca + 9.27 CbDM5= 16.75 Ca +45.60 Cb（單位:毫克/升）解得：Ca = 12.7 D663 - 2.69 D64?Cb = 22.9 D645 4.68 D663Ct = Ca + Cb = 20.2 D645 + 8.02 D663Ck = 4.7D440 -0.27 C a+b式中：C

3、a、Cb分別為葉綠素a和b的濃度，CT為葉綠素總濃度，Ck為 類(lèi)胡蘿卜素濃度.式中單位:毫克/升三、實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料：天平、研缽、燒杯、量筒、濾紙、表面皿、剪刀、90-95%乙醇、漏斗、滴管 新鮮菠菜葉、層析液配方：石油醴:乙醸：4： 1 （V/V）四、實(shí)驗(yàn)步驟:1、葉綠體色素的提取及葉綠體色素的含量測(cè)定：取菠菜（或其他植物）葉子2g,剪碎，放在研缽中，加石英砂和碳酸鈣少 許，80%丙酮約2-3ml,研磨成勻漿，再加80%丙酮定容至25ml,用漏斗過(guò) 濾，即為色素提取液。葉片洗凈、吸干、去大葉脈I稱(chēng)lg葉用丙酮研磨勻漿過(guò)濾（用80%丙酮洗研缽及殘?jiān)?，合并濾液）I濾液用80%W酮定容至25mLI適

4、.'勺稀釋后測(cè) A（X5、Af）63' A652、A4402、葉綠體色素的分離：（1）點(diǎn)樣。取前端剪成三角形的濾紙條，用毛細(xì)管取葉綠素提取液。點(diǎn)樣后 晾干，再重復(fù)操作數(shù)次。（2）分離。在燒杯中加入推動(dòng)劑，然后將濾紙插入試管中，使尖端浸入溶劑內(nèi)（點(diǎn)樣原點(diǎn)要高于液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁）。（3）當(dāng)推動(dòng)劑前沿接近濾紙邊緣時(shí)，取出濾紙，風(fēng)干，觀察色帶的分布。五、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：測(cè)得：D440=1.85D645=0301D663=0.688六、分析與討論：Ca= 12.7D663-2.69D645= 12.7*0.688-2.69*0.301 =8.7376-0.80969=7.9279

5、1Cb=22.9Dm5-4.67D663=22.9*0.301-4.68*0.688=6,8929-3.21984=3.67306Ct=Ca+Cb=20.2Dm5+&02D663=20.2*0.301+ &02*0.688二6.0802+5.51776=11.59796Ck = 4.7D440 -0.27 C a+b=4.7* 1.85-0.27* 11.59796=8.695-3.131 =5.564CT+Ck=ll .59796+5.564=17.162色素在葉片中的含量（匸色素濃度（m£/l）x提取液總體積（L） x稀釋倍數(shù)重量（g） x 1000=17.162*0.025*3/（2*1000）=0.064%七、實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1、葉綠素a的濃度為7.928 mg/L2、葉綠素b的濃度為3.673 rng/lo3、葉綠素總量為11.598 mg/lo4、類(lèi)胡蘿卜素的濃度為5.564 mg/lo5、色素在葉片中的含量為0.064%o6、色素帶上藍(lán)綠色為葉綠素a,黃綠色為葉綠素b,黃色為葉黃素，橙黃色 為胡蘿卜素。八、思考K為什么植物在不同生長(zhǎng)環(huán)境下其Chi含量有差異？ Chia /Chib有何適應(yīng)意義？ 答：不同的生境下?tīng)I(yíng)養(yǎng)元素是有差異的，會(huì)影響葉綠素的含量。Chi含量受自 然環(huán)境的影響，Gs、