人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5sfrp5elisa試劑盒使用說明書

1、人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5) ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5)含量。 實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5)水平。用純化的人分泌型卷曲相關(guān)蛋白 5 (sfrp5)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次 加入分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5),再與HRP標(biāo)記的分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的

2、黃色。顏色的深淺和樣品中的分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線 計算樣品中人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5 (sfrp5)濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1 X481 X 962-8 C保存標(biāo)準(zhǔn)品：135ng/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml X 1 瓶1.5ml X 1 瓶2-8 C保存酶標(biāo)試劑3 ml X 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存樣品稀釋液3 ml x 1 瓶6 ml x

3、1 瓶2-8 C保存顯色劑A液3 ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存顯色劑B液3 ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存終止液3ml x 1 瓶6ml x 1 瓶2-8 C保存濃縮洗滌液(20ml X 20 倍)X 1 瓶(20ml x 30 倍)x 1 瓶2-8 C保存樣本處理及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2 .血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收

4、集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再 次離心。3 .尿液：用無菌管收集，離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中 如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4 .細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃 度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) /分） 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5 .組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取

5、重量。加入一定量的 PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBS（ PH7.4） ，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) /分） 。 仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100出然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 4,混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 d分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50小混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50M棄掉，再各取50 M分別加到第五、

6、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 M分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50出混勻后從第七、第八孔中分別取50 M加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 U,混勻后從第九第十孔中各取 50 M棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50小濃度分別為90 ng/L ， 60 ng/L ， 30 ng/L ， 15 ng/L ， 7.5 ng/L） 。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40小 然后再加待測樣品10 口

7、（樣品最終稀釋度為5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30 分鐘。4. 配液：將30（ 48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（ 48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 4,空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50U,再加入顯色劑 B50M,輕輕震蕩混勻，37c避光顯色15 分鐘 .10 .終止：每孔加終止液 50聞終止反應(yīng)（此時藍色

8、立轉(zhuǎn)黃色）。11 . 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。注意事項：1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）o5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 底物請避光保存。7 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9 本試劑不同批號組分不得混用。10 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。 計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入