葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

1、 實(shí)驗(yàn)三葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 了解藥物中一般雜質(zhì)檢查的項(xiàng)目和意義。 2. 掌握葡萄糖中氯化物、 和方法。 二、 儀器與試藥 三、實(shí)驗(yàn)原理 1. 氯化物檢查法 氯化物在硝酸溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀微粒而顯白色渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉 溶液和硝酸銀在同樣條件下用同法處理生成的氯化銀渾濁程度相比較，測(cè)定供試品中氯化物的限 量。 Cl- + Ag + T AgCI （渾濁） 2. 硫酸鹽檢查法 藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇在酸性溶液中作用，生成硫酸鋇微粒而顯白色渾濁液，同一定量 硫酸鉀溶液與氯化鋇在同樣條件下， 用同法處理生成的渾濁液比較， 判斷藥物中含硫酸鹽的限量。 2 2

2、+ SO4- + Ba T BaSO4 （渾濁） 3. 鐵鹽檢查法 三價(jià)鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性的硫氰酸鐵絡(luò)離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵 溶液用同法處理后進(jìn)行比色。 3+ 3 Fe + 6SCN- T Fe （SCN 6-（紅色） 加硝酸 3 滴，煮沸 5 分鐘，可使二價(jià)鐵離子氧化成三價(jià)鐵離子。 4. 重金屬檢查法 重金屬是指在弱酸性（pH 33.5 ）溶液中，能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用生成硫化物的重 金屬雜質(zhì)，在藥品生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，鉛又易蓄積中毒，故檢查時(shí)多以鉛為代表。 由于硫代乙酰胺（thioacetamide ）在弱酸性（pH 約 3.5 ）溶液中水解，產(chǎn)生硫化氫

3、，可與 重金屬離子作用，呈現(xiàn)有色硫化物的均勻沉淀，可與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)溶液按同法處理比較。 S 1 pH3.5 - CH 3CONH 2+H2S T Pb2+H2S T PbS J + 2H + 5. 砷鹽檢查法 中國(guó)藥典主要采用古蔡氏（ Gutzeit ）法檢查砷鹽。原理是：利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生 態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞（或氯化汞）試紙，產(chǎn)生黃 色至棕色的砷斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較， 可判斷藥物中含砷鹽的限量， 反應(yīng)如下: 3 + 2+ 驗(yàn)證性試驗(yàn) 1.儀器 FI型紅外光譜儀 納氏比色管 規(guī)格： 25mL 2.試藥 堿性酒石酸銅試液 酚酞指示液

4、氫氧化鈉 氯化鈷 重鉻酸鉀 硫酸銅 乙醇 氯化鈉 硫酸鉀 磺基水楊酸 硝酸 硫氰酸銨 溴化鉀 硫代乙酰胺 氯化鋇 碘 鋅 硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽以及灼燒殘?jiān)认薅葯z查的基本原理 AsQ-+3Zn+9H 宀 AsH+3Zn +3H0 AsH+2HgBr2 2HBr+AsH （HgB） 2 潢色） AsH+3HgBr2 3HBr+As （ HgBr） 3 （棕色） 五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價(jià)砷慢，故在反 應(yīng)液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，碘化鉀被氧化生成的碘又可被氯化亞 錫還原為碘離子。 3 + 3 AsO4-+ 2I - + 2H

5、T AsO3- + I 2 + H 20 ASO3-+ Sn2+ + 2H + T AsO33- + Sn 4+ + H 20 2+ - 4+ 12 +Sn T 2I + Sn 溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成絡(luò)合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。 - 2+ 2 4I +Zn T znl 4 氯化亞錫與碘化鉀存在，可抑制銻化氫的生成，因銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑， 在試驗(yàn)條件下，100 g 銻存在不會(huì)干擾測(cè)定。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊， 起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)產(chǎn)生。 6. 熾灼殘?jiān)鼨z查法 有機(jī)藥物經(jīng)灼燒炭化后， 再加硫酸潤(rùn)濕、 低溫加熱至硫酸蒸汽除

6、盡后， 于高溫（700800 C） 灼燒至完全灰化，使有機(jī)物破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)物質(zhì)（多為金屬 的氧化物或無(wú)機(jī)鹽類）成為硫酸鹽，稱為熾灼殘?jiān)?如熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則控制灼燒溫度在 500-600 C,否則，將使重金屬檢查結(jié)果 偏低。 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 葡萄糖 Putaota ng Glucose OH GH12QH2O 198.17 本品為 D-（ + ）-吡喃葡萄糖一水合物。 【性狀】 本品為無(wú)色結(jié)晶或白色結(jié)晶性或顆粒性粉末；無(wú)臭，味甜。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 比旋度 取本品約 10g，精密稱定，置 100mL 量瓶中，加水適量與氨試液 0.2mL，

7、溶解后, 用水稀釋至刻度，搖勻，放置 10 分鐘，在 25C時(shí)，依法測(cè)定（中國(guó)藥典附錄W E），比旋 度為+ 52.5 至+ 53.0 。 【鑒別】（1）取本品約 0.2g，加水 5mL 溶解后，緩緩滴入溫?zé)岬膲A性酒石酸銅試液中，即 生成氧化亞銅的紅色沉淀。 （2）本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集 464 圖）一致，見(jiàn)圖 1。M 呻助EE片汛 圖 1 葡萄糖紅外光吸收?qǐng)D譜 【檢查】 酸度 取本品 2.0g，加水 20mL 溶解后，加酚酞指示液 3 滴與氫氧化鈉滴定液 （0.02mol/L）0.20mL,應(yīng)顯粉紅色。 溶液的澄清度與顏色 取本品 50g，加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至

8、10mL 溶液應(yīng)澄清無(wú) 色；如顯混濁，與 1 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（附錄區(qū) B ）比較，不得更濃；如顯色，與對(duì)照液（取比色用 氯化鈷液3mL,比色用重鉻酸鉀液 3mL 與比色用硫酸銅液 6mL,加水稀釋成 50mL） 1.0mL 加水稀 釋至 10mL 比較，不得更深。 氯化物 取本品 0.6g，加水溶解使成 25m（如顯堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)） ， 再加稀硝酸 10mL,溶液如不澄清，濾過(guò)。置 50mL 納氏比色管中，加水適量使成約 40mL,加硝酸 銀試液 ImL,用水稀釋使成 50mL,搖勻，在暗處放置 5 分鐘，如發(fā)生渾濁，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液一 定量制成的對(duì)照液（取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液

9、（ 10 g Cl -/mL） 6.0mL 置 50mL 納氏比色管中，加稀硝酸 10mL,用水稀釋使成約 40mL,加硝酸銀試液 1mL,用水稀釋使成 50mL,搖勻，在暗處放置 5 分鐘） 比較，不得更濃（0.01%）。 硫酸鹽 取本品 2.0g，加水溶解使成 40m（如顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)） 。 溶液如不澄清，濾過(guò)，置 50mL 納氏比色管中，加稀鹽酸 2mL,加 25%氯化鋇溶液 5mL,加水稀釋 使成 50mL,搖勻，放置 10 分鐘，如發(fā)生混濁，與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液（取標(biāo)準(zhǔn)硫酸溶液（ 100 g S&-/mL） 2.0mL,置 50mL 納氏比色管中，加水稀釋使

10、成 40mL,加稀鹽酸 2mL,加 25%R 化鋇溶液 5mL,加 水稀釋使成50mL,搖勻，放置 10 分鐘，比較，不得更濃（0.01%）。 乙醇溶液的澄清度 取本品 1.0g，力口 90%醇 30mL,置水浴上加熱回流約 10 分鐘，溶液應(yīng) 澄清。 鐵鹽 取本品 2.0g，加水 20mL 溶解后，加硝酸 3 滴，緩緩煮沸 5 分鐘，放冷，加水稀釋使 成 45mL,加硫氰酸銨溶液（30 100） 3mL,搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液 2.0mL 用同一方法制成 對(duì)照液比較，不得更深（0.001%）。 重金屬 取 25mL 納氏比色管兩支，一管加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10 進(jìn) Pb /mL） 2.0mL,

11、醋酸鹽緩沖液 （pH3.5 ） 2mL,加水至 25mL;另一管取本品 4.0g，加水 23mL 溶解，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5） 2mL,各管分別加硫代乙酰胺試液 2mL,搖勻，再放置 2 分鐘，同置白紙上，自上向下透視，供試 品顯出的顏色與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液比較，不得更深，含重金屬不得超過(guò)百萬(wàn)分之五（ 5ppm）。 砷鹽 取本品 2.0g，置檢砷瓶中，加水 5mL 溶解后，加稀硫酸 5mL 與溴化鉀溴試液 0.5mL, j. I i- h 4 置水浴上加熱約 20 分鐘，使保持稍過(guò)量的溴存在，必要時(shí)，再補(bǔ)加溴化鉀溴試液適量，并隨時(shí) 補(bǔ)充蒸發(fā)的水分，放冷，加鹽酸 5mL 與水適量使成 28mL,加

12、碘化鉀試液 5mL 及酸性氯化亞錫試液 5 滴，在室溫放置 10 分鐘后，加鋅粒 2g,迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已安放好裝有醋酸鉛棉花及 溴化汞試紙的檢砷管） ， 保持反應(yīng)溫度在 2540C ,45 分鐘后， 取出溴化汞試紙， 將生成的砷斑 與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 （ 1 g As/mL ）一定量制成的標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，顏色不得更深（ 0.0001%）。 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1 卩 gAs/mL） 2mL,置另一檢砷瓶中，加鹽酸 5mL 與 蒸餾水21mL 照上述方法，從“加碘化鉀試液 5mL”起依法操作，即得標(biāo)準(zhǔn)砷斑。 熾灼殘?jiān)?取本品 12g,置已熾灼至恒重的瓷坩堝中，精密稱定，加硫酸 0

13、.51mL 潤(rùn)濕， 低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在 700800 C熾灼使完全灰化。移至干燥器內(nèi)，放冷，精密稱定 后，再在 700800 C熾灼至恒重，所得熾灼殘?jiān)坏贸^(guò) 0.1% 。 蛋白質(zhì) 取本品 1.0g，加水 10mL 溶解后，加磺基水楊酸溶液（15） 3mL 不得發(fā)生沉淀。 五、注意事項(xiàng) 1. 注意平行原則，供試液與對(duì)照液同時(shí)操作，加入試劑的順序應(yīng)一致。 2. 比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，在選用比色管時(shí)必須注意其大小相等、玻 璃色質(zhì)一致（最好不帶任何顏色） 、管上刻度高低一致（如有差別，不得相差 2 毫米）。比色管使 用后應(yīng)立即沖洗，避免久置，不可用毛刷或去污粉等洗刷，

14、以免劃出條痕損傷比色管內(nèi)壁而影響 比色，應(yīng)用清潔液洗后，用自來(lái)水、純化水依次沖洗干凈。 3. 檢查氯化物時(shí)，供試液與對(duì)照液同時(shí)操作，均應(yīng)先制成 40mL 水溶液，再同時(shí)加硝酸銀試 液 ImL,避免濃度較大時(shí)加入硝酸銀產(chǎn)生氯化銀沉淀，影響比濁。 4. 比濁方法：將供試管與對(duì)照管同置黑色（或白色）背景上，自上方向下觀察；比色：將供 試管與對(duì)照管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察。 5. 鐵鹽檢查時(shí)，光線和溫度影響顏色的穩(wěn)定性。光線促使硫氰酸鐵還原或分解褪色，褪色的 程度與光照時(shí)間成正比，葡萄糖在檢查過(guò)程中加硝酸處理可減少褪色現(xiàn)象，但必須加熱煮沸除去 氧化氮，否則與硫氰酸根作用生成紅色亞硝酰硫氰化物（ N

15、OCN）S 而影響比色。溫度越高，褪色 越快。 6. 檢查重金屬時(shí)， 如供試液在加硫代乙酰胺之前帶有顏色， 應(yīng)在對(duì)照管中滴加少量稀焦糖液， 如任不能使兩管的顏色一致，則可改用有機(jī)破壞的方法除去顏色。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量 取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮配制，防止鉛水解而引起誤差。 7. 測(cè)砷時(shí)，鋅粒的大小，以通過(guò) 12 號(hào)篩為宜，過(guò)細(xì)作用太快，過(guò)粗則作用太慢，可采用 鋅粒與鋅粉各一半的方式加入較好。測(cè)砷裝置：古蔡氏法，裝置見(jiàn)附圖 1，先在干燥的測(cè)砷管中 裝入約 8cm 長(zhǎng)的醋酸鉛棉花，安裝位置不宜過(guò)低，防止測(cè)砷瓶中反應(yīng)劇烈時(shí)，產(chǎn)生大量氫氣將反 應(yīng)液帶上來(lái)，沾濕醋酸鉛棉花而影響砷斑的檢出，同時(shí)必須先將溴

16、化汞試紙裝好。加鋅粒后，應(yīng) 立即將測(cè)砷瓶塞塞上，避免砷化氫氣體逸出，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。反應(yīng)溫度以 2540C為宜，如 在冬季可置溫水浴中。 8. 檢查熾灼殘?jiān)鼤r(shí)，取樣量應(yīng)根據(jù)供試品的熾灼殘?jiān)薅葲Q定，如規(guī)定限度為 0.1%，取樣量 在 1g 左右；如規(guī)定限度為 0.05%,取樣量以 2g 為宜，規(guī)定為 1%或以上者，取樣量可在 1g 以下， 如遇貴重藥物或供試品數(shù)量不足時(shí)，也可相應(yīng)減少取樣量。 六、思考題 1. 一般雜質(zhì)檢查的意義是什么？主要包括哪些項(xiàng)目？ 2. 計(jì)算本次檢查中氯化物、硫酸鹽、重金屬、砷鹽的限量。 3. 在進(jìn)行氯化物、硫酸鹽和重金屬檢查時(shí),樣品有顏色應(yīng)該如何處理？ 4. 重金屬

17、檢查時(shí) pH 為多少？為什么？ 5. 古蔡氏法檢砷時(shí)所加試劑的作用與操作注意點(diǎn)是什么？ 6. 熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定的成敗關(guān)鍵是什么？恒重的概念和意義是什么? 7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的濃度、取量與雜質(zhì)限量，計(jì)算樣品的取量。 七、參考文獻(xiàn) 1中國(guó)藥典二 00 五年版二部，691，化學(xué)工業(yè)出版社。 2. 藥物分析杭太俊主編人民衛(wèi)生出版社第七版。 中國(guó)藥典附錄忸 J：砷鹽檢查法 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備 稱取三氧化二砷 0.132g，置 1000mL 量瓶中，加 20%氫氧化鈉溶液 5mL 溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸 10mL 用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。 臨用前，精密量取貯備液 10mL 置 100

18、0mL 量瓶中，加稀硫酸 10mL,用水稀釋至刻度，搖勻， 即得（每1mL 相當(dāng)于 1 進(jìn)的 As）。 第一法（古蔡氏法） 儀器裝置 如圖 1。A 為 100mL 標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B 為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管 C （外 徑 8.0mm,內(nèi)徑 6.0mm）,全長(zhǎng)約 180mm D 為具孔的有機(jī)玻璃旋塞，其上部為圓形平面，中央有 一圓孔，孔徑與導(dǎo)氣管 C 的內(nèi)徑一致，其下部孔徑與導(dǎo)氣管 C 的外徑相適應(yīng)，將導(dǎo)氣管 C 的頂端 套入旋塞下部孔內(nèi)，并使管壁與旋塞的圓孔相吻合，粘合固定； E 為中央具有圓孔（孔徑 6.0mm） 的有機(jī)玻璃旋塞蓋，與 D 緊密吻合。 測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管 C 中裝入醋酸

19、鉛棉花 60mg（裝管高度為 6080mm 再于旋塞 D 的頂端平 面上放一片溴化汞試紙（試紙大小為能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜） ，蓋上旋塞蓋 E 并旋緊， 即得。 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 2mL,置 A 瓶中，加鹽酸 5mL 與水 21mL,再加碘化鉀 試液 5mL 與酸性氯化亞錫試液 5 滴，在室溫放置 10 分鐘后，加鋅粒 2g,立即將照上法裝妥的導(dǎo) 氣管 C 密塞于 A 瓶上，并將 A 瓶置 2540C水浴中，反應(yīng) 45 分鐘，取出溴化汞試紙，即得。 若供試品需經(jīng)有機(jī)破壞后再行檢砷，則應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液代替供試品，照各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方 法同法處理后，依法制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑。 檢查法

20、 取按各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，置 A 瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“再加 碘化鉀試液 5mL”起，依法操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。 圖 1 圖 2 第二法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法 ） 儀器裝置 如圖 2。A 為 100mL 標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B 為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管 C（一 端的外徑為 8mm 內(nèi)徑為 6mm 另一端長(zhǎng) 180mm 外徑 4mm 內(nèi)徑 1.6mm,尖端內(nèi)徑為 1mm“ D 為 平底玻璃管 （長(zhǎng) 180mm 內(nèi)徑 10mm 于 5.0mL 處有一刻度）。 測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管 C 中裝入醋酸鉛棉花 60mg（裝管高度約 80mm，并于 D 管中精密加入二 乙基二硫代氨基甲酸銀試液 5mL。 標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液