釋放度方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)相關(guān)學(xué)習(xí)

1、釋放度方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)相關(guān)學(xué)習(xí)215 釋放量測定方法：釋放量的測定，即已釋放入介質(zhì)中藥物的定量測定，其技術(shù)要求應(yīng)符合測定藥物含量的一般原則。常用的方法有UV法和HPLC法。方法學(xué)驗(yàn)證過程中除常規(guī)考慮外，尚應(yīng)關(guān)注：主藥在釋放介質(zhì)中的穩(wěn)定性；最佳取樣量，以保證測定簡便，盡量減小誤差；濾器的性質(zhì)，考證有效成分在濾器上是否有吸附?；瘜W(xué)藥物口服緩釋制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（二OO七年九月）溶出度測定方法的驗(yàn)證與含量測定相同，包括：準(zhǔn)確度（回收率）、精密度、專屬性（輔料、膠囊殼等的干擾試驗(yàn)）、線性和耐用性等中國藥典附錄中國藥典附錄XIX AXIX A藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指

2、導(dǎo)原則采用UV法測定前，一定要進(jìn)行紫外掃描，以考察輔料是否存在干擾。方法為：分別取對照品溶液和供試品溶液（濃度最好與對照品溶液一致或略低），進(jìn)行紫外掃描。干擾試驗(yàn)（專屬性試驗(yàn)）：干擾試驗(yàn)（專屬性試驗(yàn)）：著重觀察供試品溶液圖譜情況：是否存在基線被抬升的現(xiàn)象，以及與對照品溶液圖譜重合的情況。如輔料無干擾，則供試品溶液圖譜應(yīng)與對照品溶液圖譜基本重合或整體略低于對照品圖譜；如輔料有干擾，就會(huì)出現(xiàn)基線或末端吸收處被抬高的現(xiàn)象。另一方法可采用HPLC法，將其測定結(jié)果與UV法進(jìn)行比較，以判定輔料是否有干擾。輔料干擾如不超過2%，可勉強(qiáng)接受。測定干擾2%以下可忽略不計(jì)，25%可考慮在限度上適當(dāng)提高，超過5%以

3、上測定方法不可取，如是空膠囊產(chǎn)生的應(yīng)進(jìn)行囊殼的消除試驗(yàn)當(dāng)輔料干擾紫外法測定時(shí)，通?？刹捎靡韵路椒ǎ?(1) 雙波長吸收度差值法：尋找到輔料吸收度值相等的兩個(gè)波長，其中的一個(gè)波長應(yīng)為主成分的最大吸收波長。以對照品溶液和供試品溶液分別在此兩波長處的吸收度值差值進(jìn)行計(jì)算。此法在日本應(yīng)用較為普遍，在進(jìn)口質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也有部分品種使用，方法簡便、易行，值得推廣。但采用本法的前提是“輔料的吸收應(yīng)呈平行 線”；如呈“斜坡形” 則應(yīng)折中考慮，當(dāng)誤差大于2%（可用回收率來衡量），仍建議采用HPLC法測定(2) 導(dǎo)數(shù)光譜法：通過對圖譜進(jìn)行一階或二階的求導(dǎo)處理，以去除輔料對主成分測定的干擾。由于此法受儀器的限制和求導(dǎo)后

4、導(dǎo)數(shù)值較小，給測定帶來較大誤差。同時(shí)，隨著HPLC儀器的不斷普及，目前已很少使用。(3) HPLC法：在HPLC色譜柱上可輕松將輔料與主成分分離，該法測定最為準(zhǔn)確、可靠，只是工作量略顯增加。釋放介質(zhì)的制備：釋放介質(zhì)的制備：稱取氯化鈉9.0g，加水適量溶解并稀釋至1000ml，搖勻，即得。50mg50mg規(guī)格空白輔料溶液的制備：規(guī)格空白輔料溶液的制備：取50mg規(guī)格處方量輔料（約相當(dāng)于去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置20ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。100mg100mg規(guī)格空白輔料溶液的制備

5、：規(guī)格空白輔料溶液的制備：取100mg處方量輔料（約相當(dāng)于去甲文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置20ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。50mg50mg規(guī)格供試品溶液的制備：規(guī)格供試品溶液的制備：取50mg規(guī)格琥珀酸去甲文拉法辛緩釋片樣品（批號：131016）適量，精密稱定，研細(xì)，取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于琥珀酸去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置20ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。100mg100mg規(guī)格供試

6、品溶液的制備：規(guī)格供試品溶液的制備：取100mg規(guī)格琥珀酸去甲文拉法辛緩釋片樣品（批號：131012）適量，精密稱定，研細(xì)，取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于琥珀酸去甲文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置20ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。檢測：檢測：精密量取上述溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -專屬性試驗(yàn)專屬性試驗(yàn)琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -專屬性試驗(yàn)專屬性試驗(yàn)結(jié)論：結(jié)論：由圖可知，釋放介質(zhì)及空白輔料在該色譜條件下對本品釋放度檢查無干擾，說明該方

7、法專屬性良好。發(fā)生吸附的品種往往是主藥均難溶于水微粉化，原料藥粒徑變小，比表面能變大，靜電吸附能力增強(qiáng)，故與濾膜的吸附作用明顯；一些小規(guī)格制劑，主藥濃度低，達(dá)到飽和所需的初濾液體積大大增加，干擾也較大濾膜被溶出介質(zhì)溶解，產(chǎn)生濁度，吸收升高過濾中操作：產(chǎn)生氣泡等一般認(rèn)為吸附量在2%以下時(shí)可忽略不計(jì)，超過2%建議或在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確注明濾膜規(guī)格或?yàn)V膜預(yù)處理方法（如煮沸1.5 h）、增加初濾液量（常規(guī)為5ml）或規(guī)定樣品高速離心后取上清液測定。濾膜吸附試驗(yàn)：濾膜吸附試驗(yàn)：中國藥典溶出度測定法對微孔濾膜的規(guī)定為“濾孔應(yīng)不大于0.8m，并使用惰性材料制成的濾器，以免吸附活性成分或干擾分析測定”。工作中常用

8、濾膜有水系和有機(jī)系兩種，濾膜孔徑0.45m、0.80m。水系微孔濾膜通常為混合纖維素酯濾膜(WX)，不耐酸、堿、有機(jī)溶劑。使用前常需進(jìn)行漂洗（水浸）處理，防止濾膜使用時(shí)未壓緊有氣泡入內(nèi)，同時(shí)水浸也為了使膜充分溶脹，現(xiàn)有針式混合纖維素酯過濾器，可直接使用。有機(jī)系微孔過濾膜有尼龍（N6、N66）濾膜、聚偏氟乙烯（PVDF）濾膜、聚四氟乙烯（PTFE）濾膜等，也有針式過濾器，上述濾膜具有顯親水性，使用前不需預(yù)先濕潤，幾乎能與全部溶出介質(zhì)相容，無纖維脫落等優(yōu)點(diǎn)，但由于價(jià)格昂貴使用單位較少。判定吸附與否的方法可采用：(1)取溶出液過濾，舍去不同體積的初濾液后測定，觀察響應(yīng)值的變化，了解被測藥物與濾膜的吸

9、附情況。(2)取樣后，一部分不過濾，直接采用高速離心，取上清液測定。另一部分采用過濾法，取所得的續(xù)濾液測定，考察兩者間測定數(shù)據(jù)的差異。(3)取對照品溶液，經(jīng)濾膜過濾后，與原溶液進(jìn)行比較，觀察測定前后數(shù)據(jù)的變化供試品溶液的制備：供試品溶液的制備：取琥珀酸去甲文拉法辛對照品適量（約相當(dāng)于去甲文拉法辛對照品28mg），精密稱定，置25ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置20ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，即得。檢測：檢測：精密量取濾過前后供試品溶液20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -濾膜吸附試驗(yàn)濾膜吸附試驗(yàn)結(jié)論：結(jié)論：由

10、以上結(jié)果可知，直徑為25mm孔徑為0.45m的不同材質(zhì)的濾膜對不同濃度的琥珀酸去甲文拉法辛吸附量均小于2.0%，基本無吸附。中國藥典 附錄XIX A至少5份供試品以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最二小乘法進(jìn)行線性回歸數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖線性關(guān)系試驗(yàn)： 50mg 50mg規(guī)格釋放度檢查線性關(guān)系試驗(yàn)規(guī)格釋放度檢查線性關(guān)系試驗(yàn)對照品貯備液的制備：對照品貯備液的制備：取琥珀酸去甲文拉法辛對照品約21.3mg（約相當(dāng)于去甲文拉法辛對照品14mg），精密稱定，置25ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。線性關(guān)系供試品溶液的制備：線性關(guān)系供試

11、品溶液的制備：精密量取對照品貯備液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置10ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，分別編號為1、2、3、4、5作為線性關(guān)系供試品溶液。測定：測定：精密量取上述線性關(guān)系供試品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并將溶液濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸，琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -線性關(guān)系試驗(yàn)線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)論：結(jié)論：由以上試驗(yàn)結(jié)果可知，50mg規(guī)格去甲文拉法辛溶液在060.45mg/ml范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。 100mg 100mg規(guī)格釋放度檢查線性關(guān)系試驗(yàn)規(guī)格釋放度檢查線性關(guān)系試驗(yàn)對照品貯備液的制備：對照品

12、貯備液的制備：取琥珀酸去甲文拉法辛對照品約42.6mg（約相當(dāng)于去甲文拉法辛對照品28mg），精密稱定，置25ml量瓶中，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。線性關(guān)系供試品溶液的制備：線性關(guān)系供試品溶液的制備：精密量取對照品貯備液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置10ml量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，分別編號為1、2、3、4、5作為線性關(guān)系供試品溶液。測定：測定：精密量取上述線性關(guān)系供試品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并將溶液濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -線性關(guān)系試驗(yàn)線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)論：結(jié)論：由以上試驗(yàn)結(jié)

13、果可知，100mg規(guī)格去甲文拉法辛溶液在0115.92mg/ml范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性不同規(guī)格可以用一個(gè)線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)：濃度范圍內(nèi)就可以（？）中國藥典 附錄XIX A規(guī)定的測試條件下同一均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。1、重復(fù)性2、中間精密度3、重現(xiàn)性數(shù)據(jù)要求：報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對 標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限精密度試驗(yàn)：分別取兩規(guī)格取線性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下，編號為1、5的線性關(guān)系供試品溶液，精密量取20l，分別注入液相色譜儀，每個(gè)濃度的線性供試品溶液均連續(xù)進(jìn)樣6次，分別記錄色譜圖琥珀酸去甲文拉法辛琥珀酸去甲文拉法辛- -釋放度檢查精密度試驗(yàn)釋放度檢查精密度試驗(yàn)結(jié)論：結(jié)論：由上述試驗(yàn)結(jié)果知

14、，兩個(gè)規(guī)格20%、100%濃度對照品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6次，主峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%，表明本法精密度良好。主成分在溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性也是一個(gè)不容忽視的問題。如溶液穩(wěn)定性不佳，應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確注明“取樣后立即測定”。溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：由于本品在質(zhì)量研究過程中除需要研究在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定介質(zhì)（0.9%氯化鈉溶液）中的釋放度外，還需要研究在其他介質(zhì)（0.1mol/L鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液）中的釋放行為，所以我們考察了琥珀酸去甲文拉法在上述各種介質(zhì)中的溶液穩(wěn)定性。溶液穩(wěn)定性考察溶液制備：溶液穩(wěn)定性考察溶液制備：取本品細(xì)粉適量，精密稱定，置100ml量瓶中，加各釋放介質(zhì)適量，超生使溶解，放冷，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為溶液穩(wěn)定性考察溶液。取溶液