生化基本名詞定義

1、一基本名詞1 . 單試劑 : 只有 R1 試劑,如 :Ca,Mg,ALB,TP, 當(dāng)樣本加入到試劑中時(shí)，即刻開始反應(yīng)。2 .雙試劑：有R 1,R2配套兩種試劑，樣本首先加入到試劑1中參與反應(yīng)，育溫后再加入R2,再同反應(yīng)來達(dá)到檢測(cè)的目的。通常R1與樣品反應(yīng)達(dá)到去除干擾或?yàn)榧尤隦2后的進(jìn)一步反應(yīng)做準(zhǔn)備的目的。3 加樣模式：不同的儀器有不同的加樣方式：3.1 雙試劑加樣模式:R1 加入后，加入樣品（S） ，開始為下一步加入R2 后的反應(yīng)作準(zhǔn)備，再經(jīng)一定的時(shí)間后，加入 R2,開始進(jìn)行檢測(cè)所需要的反應(yīng)。3.2 單試劑加樣模式：先加入R1,再加入R2,經(jīng)過一定的時(shí)間再加入樣品，再進(jìn)行檢測(cè)反應(yīng)。4單試劑與雙

2、試劑的界限：在某些雙試劑,由于各試劑成份及所參與反應(yīng)的目的的不同,有的雙試劑可以事先混成單試劑,但有的雙試劑只能用雙試劑通道來做。如：1.1 R1 用來去干擾的目的:R1 試劑用來清除血清中的干擾物，防止R2 與血清中的干擾物反應(yīng)。如化學(xué)氧化法的 TBIL , DBIL , CR （酶），LDL-C等。1.2 單試劑不穩(wěn)定： R1,R2 中的成份相互影響發(fā)生反應(yīng),使試劑中色源提前反應(yīng),引起起始吸光度及吸光度變化率的改變等。（ CHE,GGT）1.3 儀器自身特點(diǎn)：同時(shí)試劑的應(yīng)用也要考慮到檢測(cè)儀器的特點(diǎn)，因?yàn)橛械膬x器（如半自動(dòng)，手工）它沒有雙試劑的加樣模式，那它只能用單試劑來做，一般雙試劑加樣模

3、式的儀器也可以單試劑加樣來做， 但是單試劑加樣的儀器就不一定能做那些只能雙試劑模式的檢測(cè)。5. 標(biāo)準(zhǔn)品 ：實(shí)際上是一個(gè)或幾個(gè)已知濃度的樣本，它在檢測(cè)中作為一個(gè)或幾個(gè)參照物，使以后的所 有的檢測(cè)都與之比校，以此來得到其它樣本的濃度。6. 標(biāo)準(zhǔn)品的定義：6.1 國際標(biāo)準(zhǔn)品由 WHO 或相應(yīng)組織標(biāo)定的，用肯定的、公認(rèn)的、 準(zhǔn)確的物理或化學(xué)方法測(cè)定的定值材料。6.2 國際生物學(xué)活性標(biāo)準(zhǔn)品根據(jù)生物學(xué)反應(yīng)由WHO 或相應(yīng)組織標(biāo)定的國際活性單位的材料。6.3 參考標(biāo)準(zhǔn)血清國家標(biāo)準(zhǔn)化組織根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的法定材料。標(biāo)準(zhǔn)品明確賦值，通過校正后，得到較為規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此得到代表檢測(cè)樣品濃度與該樣品吸光度之間

4、的函數(shù)關(guān)系。6.4 標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性的重要性：標(biāo)準(zhǔn)品作為其它樣品檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，必須保持它的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，一旦標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)問題，后果很嚴(yán)重。在保存一定時(shí)間后，如果標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)際濃度降低了，那么定標(biāo)（校準(zhǔn)）后 檢測(cè)樣品時(shí)該測(cè)值就會(huì)偏高，反之，如果標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際濃度變高了，那么測(cè)定值就會(huì)偏低。所以標(biāo)準(zhǔn)品在運(yùn)輸，儲(chǔ)存過程中一定要慎重，以免其變質(zhì)。6.5 質(zhì)控品：質(zhì)控血清是已有靶值的血清，并且對(duì)它的測(cè)定有一定允許的偏差，在每次的常規(guī)檢驗(yàn)中加入一份或數(shù)份，通過所得結(jié)果來了解本次檢驗(yàn)的情況。質(zhì)控血清檢驗(yàn)的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍 內(nèi)，就說明該檢驗(yàn)沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過允許誤差范圍的異常結(jié)果，提示該檢驗(yàn)不合

5、格， 應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測(cè)標(biāo)本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。同樣質(zhì)控品必須要與試劑 的體系一致，如果兩種方法學(xué)或者兩個(gè)體系的試劑之間的質(zhì)控就不一定能夠做到相互符合。所以試劑與質(zhì) 控必須一致使用。9實(shí)時(shí)反應(yīng)曲線：在自動(dòng)生化分析儀一定周期的監(jiān)測(cè)下，通過時(shí)間與相對(duì)應(yīng)的吸光度值之間的軌跡，描繪得到的曲線。通過實(shí)時(shí)反應(yīng)曲線真實(shí)地反應(yīng)了試劑與樣品反應(yīng)的程度。10標(biāo)準(zhǔn)曲線：在標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)的反應(yīng)中，標(biāo)準(zhǔn)曲線就是在線性范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度與濃度成比例的一條線，多點(diǎn)定標(biāo)常為曲線，一點(diǎn)定標(biāo)為一直線。它們作為以后樣本檢測(cè)的一種規(guī)范。11標(biāo)準(zhǔn)曲線與實(shí)時(shí)反應(yīng)曲線的關(guān)系：標(biāo)準(zhǔn)曲線是針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度之間的

6、關(guān)系而言的，表示該反應(yīng)的函數(shù)關(guān)系式，所有的樣品反應(yīng)都要依據(jù)這個(gè)關(guān)系。而實(shí)時(shí)反應(yīng)曲線是對(duì)每一個(gè)樣品來說的， 只表示該樣品反應(yīng)的程度，只是吸光度與時(shí)間的一種關(guān)系。一般對(duì)一個(gè)新的試劑來說，總是先做標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)（校準(zhǔn)），再進(jìn)行相應(yīng)的樣品檢測(cè)。11多點(diǎn)定標(biāo)和一點(diǎn)定標(biāo)：通過多個(gè)濃度有一定梯度的標(biāo)準(zhǔn)液來定標(biāo)（校準(zhǔn)），規(guī)范出標(biāo)準(zhǔn)曲線的一定的趨勢(shì)，以此來得到濃度與吸光度的函數(shù)。多點(diǎn)定標(biāo)大多用于非線性校準(zhǔn)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般為二 次函數(shù)的拋物線類型。只用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品來定標(biāo)，得到的函數(shù)為Y （濃度）=AX（吸光度）+B,是一條簡(jiǎn)單的直線。13測(cè)試量（Test）: 通常在生化分析儀上對(duì)病人檢測(cè)所用的試劑的用量很小，一般總

7、共為 240-350U1左右，所以根據(jù)一盒試劑來說（大約有150-300mL）,就可以換算成多少的測(cè)試量。同樣可以來說明它有每mL可以做多少的人份，一盒可以做多少的 Test,或者多少人份。14靈敏度1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力；2）臨床應(yīng)用的靈敏度用疾病患者試驗(yàn)陽性的百分率表示15特異性 指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），以無病者試驗(yàn)陰性的百分率表示。16特異性與靈敏度的評(píng)價(jià)方法： 對(duì)試劑進(jìn)行靈敏度與特異性評(píng)價(jià)，首先需要收集有關(guān)的病人血清，然后用公認(rèn)的檢測(cè)該項(xiàng)標(biāo)志物最可靠的試劑進(jìn)行測(cè)定，以確定其為陽性或陰性。通過對(duì)照得到試劑靈敏度與特異性的指標(biāo)。公認(rèn)方法測(cè)定合計(jì)十一受

8、檢試劑結(jié)果+abb-cdd合計(jì)a+cb+db+d表中a為真陽性，b為假陽性，c為假陰性，d為真陰性。被評(píng)價(jià)試劑的各項(xiàng)性能指標(biāo)按以下分式計(jì)算：靈敏度（尸a/（a+c） 100%特異性（尸b/（b+d） x|00%符合率（）=（a+d）/（a+b+c+d）100%一般認(rèn)為靈敏度或特異性>90%為良好。符合率是綜合靈敏度和特異性的指標(biāo)17 準(zhǔn)確度：是指測(cè)定結(jié)果與真值（或靶值）接近的程度。準(zhǔn)確度不能以數(shù)字表示，往往用不準(zhǔn)確度來衡量。測(cè)定結(jié)果與靶值的偏離程度稱為偏差，它表示該項(xiàng)檢驗(yàn)的不準(zhǔn)確度。絕對(duì)偏差=檢驗(yàn)的均值-真值（或靶值）相對(duì)偏差=絕對(duì)偏差真值+ （或靶值）x 100%18 精密度：是指對(duì)同

9、一樣本重復(fù)測(cè)定時(shí)，每次測(cè)定結(jié)果與平均值的接近程度，即重復(fù)測(cè)定值之間的符合程度。19 穩(wěn)定性試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37保存，定期測(cè)定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止，通常認(rèn)為37每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10保存一個(gè)半月。20 開蓋穩(wěn)定性特例：20.1 CO2: 試劑在開蓋情況下，空氣中CO2 會(huì)進(jìn)入試劑中與試劑發(fā)生反應(yīng)，與試劑中NADH 反應(yīng)，便使空白吸光度達(dá)不到特定的要求，引起檢測(cè)能力的降低。使得測(cè)定值偏低。20.2 ALP, CR （苦），Mg, HBDH, BUN, 開蓋后試劑的PH會(huì)因?yàn)榭諝庵蠧O2的進(jìn)入，發(fā)生改變， 也會(huì)引起

10、測(cè)定值的偏差。21 . 線性范圍；試劑在檢測(cè)樣品時(shí)，測(cè)定值落在此范圍內(nèi)時(shí)測(cè)值在一定的（可以允許的誤碼差范圍內(nèi)） ,超過該區(qū)間時(shí),則準(zhǔn)確度將無法保證，測(cè)定值發(fā)生較大的偏差。所以線性范圍也是試劑優(yōu)良與否的評(píng)價(jià)之一。22 . 安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。23 . 經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。24 . 干擾 ： 血清中某些成份與要求被測(cè)定的物質(zhì)結(jié)構(gòu)相仿，化學(xué)性質(zhì)相似，或者同樣可以與試劑成份發(fā)生反應(yīng)，使檢測(cè)過程中產(chǎn)生意外的變化，產(chǎn)生誤差。如脂血干擾，溶血干擾，脂濁干擾，黃疸干擾。此類為血清對(duì)試劑的干擾。同時(shí)也會(huì)發(fā)生不同的試劑之間的干擾

11、。24.1 TBA與膽酸鈉：在一些常規(guī)的試劑中，如 TG, TCH, GSP中其成份通常含有膽酸鈉，如果反應(yīng)杯沒有清洗干凈，殘留的膽酸鈉就會(huì)與TBA 試劑反生反應(yīng)，與血清中的TBA 相比，使檢測(cè)的值發(fā)生異常的偏高。24.2 TP 與銅： 在 TP 試劑中有銅離子的存在，同樣要是沒有清洗干凈反應(yīng)杯的話，殘留的銅離子就會(huì)與CU試劑反應(yīng)，也使測(cè)定的值發(fā)生偏高。24.3 ALP 與鋅：在ALP 試劑中有鋅離子的存在，同樣要是反應(yīng)杯沒有清洗干凈，殘留的鋅離子就會(huì)與鋅試劑反應(yīng)，也使測(cè)定的值發(fā)生偏高。24.4 TBIL 的強(qiáng)氧化與一些酶試劑：化學(xué)氧化法的膽紅素，其中有氧化力較強(qiáng)的氧化劑，在通道中如果清冼不完

12、，就會(huì)有殘余留在反應(yīng)杯上，如果一些酶試劑在此杯進(jìn)行下一次檢測(cè)，殘余的氧化劑就會(huì)對(duì)這些項(xiàng)目發(fā)生干擾。如TG， TCH， CR， UA 等。24.5 介質(zhì)效應(yīng)25 交叉污染：某些試劑成份中的酸堿度不同，氧化還原能力各異，相互之間會(huì)有反應(yīng)，而且在多數(shù)情況下全自動(dòng)生化分析儀通過自動(dòng)蒸餾水一次沖洗不能解決反應(yīng)杯內(nèi)的試劑殘余，因此會(huì)對(duì)下一次檢測(cè)造成污染，使用全自動(dòng)生化儀隨機(jī)組合檢測(cè)項(xiàng)目時(shí)，某些項(xiàng)目不能隨心所欲、必須注意位置的特別設(shè)置。原則是將具相同反應(yīng)原理放在一起，相同酸堿度反應(yīng)放在一起；試劑內(nèi)含有被測(cè)成份的和該項(xiàng)目相隔兩個(gè) 項(xiàng)目位置以上。26參數(shù)設(shè)置：根據(jù)試劑本身特定的性質(zhì)來監(jiān)測(cè)，控制反應(yīng)，最大限度的得

13、到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。27參考值：以前叫正常值確良通過對(duì)該項(xiàng)目正常人群檢測(cè)的臨床數(shù)據(jù)來制定的，規(guī)定出正常人該項(xiàng)目值的大致范圍。由于許多因素（人種，地區(qū)，實(shí)驗(yàn)室儀器，方法學(xué)，各生產(chǎn)廠家的試劑等）都會(huì)影響到 正常值的限定。所以建議各醫(yī)院應(yīng)根據(jù)本地區(qū)實(shí)際情況建立自己的參考值范圍。28速率法：在檢測(cè)反應(yīng)中，反應(yīng)檢測(cè)到的吸光度隨時(shí)間的變化呈現(xiàn)出有固定梯度的升高或降低。對(duì)低濃度的樣品，它的吸光度隨時(shí)間變化的慢，（速率低），而高濃度樣品，它的吸光度隨時(shí)間的快（速率高）。29終點(diǎn)法：試劑與樣品反應(yīng)之前的吸光度在某一定的水平，開始反應(yīng)后，在主波長下出現(xiàn)一個(gè)最大 的吸光度，得到一個(gè)較明顯的吸光度的落差，所以通過標(biāo)準(zhǔn)

14、品吸光度變化值可以限定其它樣品的濃度。終 點(diǎn)法中的反應(yīng)時(shí)間是指開始反應(yīng)后，試劑與反應(yīng)物反應(yīng)到達(dá)一定的穩(wěn)定點(diǎn)，試劑與反應(yīng)物不再反應(yīng)，吸光 度不再隨時(shí)間的變化而發(fā)生改變，既到達(dá)了反應(yīng)平衡。其間所要的時(shí)間就是反應(yīng)時(shí)間。30試劑空白：嚴(yán)格的試劑空白與正常測(cè)定的唯一區(qū)別就是其樣品是水。而奧林巴斯生化儀由于是 先加R1再加樣品然后再加 R2,因此就能夠把加了樣品后的溶液本底也消除掉，這就是兩點(diǎn)終點(diǎn)法，有時(shí) 把這種含有樣品但不含 R2的溶液本底也叫試劑空白，試劑空白的意義就在于消除試劑本底的干擾。試劑 空白的吸光度就叫空白吸光度31水空白：（杯空白）：以足量的純水灌注比色杯而測(cè)得的OD32空白速率：用速率法

15、的試劑因?yàn)槟承┏煞葑约簳?huì)發(fā)生較緩慢的變化，所以用水作樣品時(shí)也會(huì)發(fā)生吸光度的變化，所以用水作樣品得到的試劑吸光度的變化率即空白速率33空白值：當(dāng)水作為樣品得到空白速率反應(yīng)在濃度上就是空白值。34 K因子：酶活性測(cè)定校準(zhǔn)問題中有的主張不進(jìn)行校準(zhǔn)而采用固定K值，有的以為應(yīng)該進(jìn)行校準(zhǔn)常用K值有以下幾種：34.1. 理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（s）來計(jì)算，如NADH為6.22 103。34.2. 實(shí)測(cè)K值：由于儀器波長的精密及徑寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)e值來設(shè)定K值34.3. 廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值（有的廠家提供 6.3 103）34.4. 準(zhǔn)K值：通過校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值

16、35校準(zhǔn)模式：用它來規(guī)范吸光度與濃度之間的函數(shù)關(guān)系式，比如線性：一點(diǎn)校準(zhǔn)（ Y=KX+b ）,二 點(diǎn)（Y=aX+b,通過 水來計(jì)算得到b,通過標(biāo)準(zhǔn)品來得到a.）。非線性：多點(diǎn)校準(zhǔn)（Logit-log（3P）, Logit-log（4P）,spline ）等，用二次函數(shù)或指數(shù)來描繪校準(zhǔn)的曲線與公式。36線性范圍與試齊1J樣本比：對(duì)一些需要通過校準(zhǔn)的試劑而言，如果改變?cè)噭┡c樣品的比例，線性 范圍也會(huì)相應(yīng)的發(fā)生變化。比如，同一 TG試劑的樣本與試劑比由原來的1: 100改成1: 200后，那么它的線性高值就可相應(yīng)的達(dá)到原來的2倍。同理，如果把比例變?yōu)?1: 50則線性范圍也相應(yīng)地變成為原來的一半。所

17、來試劑樣本比與線性范圍成相應(yīng)的比例。37前帶效應(yīng)： 在免疫比濁法中， 多點(diǎn)定標(biāo)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品得到 吸光度反而比前一點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度還要 低，這樣便出現(xiàn)了前帶效應(yīng)。如圖，第五 點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品濃度8得到的吸光度比前一點(diǎn)濃 度6的吸光度要低。產(chǎn)生前帶的原因就是 抗體的效價(jià)不夠高，反應(yīng)能力不足。出現(xiàn)前帶效應(yīng)后，就會(huì)使得高濃度樣品的檢測(cè)值偏低，無法檢測(cè)出高濃度樣品的真實(shí)濃度。38 乳膠增強(qiáng)免疫濁度：膠乳增強(qiáng)免疫濁度測(cè)定（ Latex enhanced trubidimetric Immunoassay LETIA ）是近年來免疫檢測(cè)領(lǐng)域出現(xiàn)的一種新的免疫檢測(cè)技術(shù)。LETIA 的基礎(chǔ)是膠乳凝集試驗(yàn)。其原

18、理是包被了抗原或抗體的膠乳微粒（免疫膠乳），與標(biāo)本中相應(yīng)混合系統(tǒng)形成一定濁度，濁度增加的程度與標(biāo)本中被檢物濃度成正比關(guān)系，在一定波長下進(jìn)行濁度測(cè)定，即可測(cè)出標(biāo)本中被檢物的含量。一般情況下，抗原抗體反應(yīng)后形成免疫復(fù)合物，可用濁度法定量測(cè)定，但形成抗原一抗體復(fù)合物需要較長時(shí)間。如把可溶性抗原或抗體通過適當(dāng)方法，如物理吸附或化學(xué)交聯(lián)法包被于膠乳微粒表面，由于這種微粒是化學(xué)性能穩(wěn)定的固相載體，不溶性抗原抗體復(fù)合物可快速地在載體表面之間形成，提高了抗原抗體反應(yīng)的敏感性，固此稱之為L ET I Ao39影響L ET I A的主要因素是：（一）包被膠乳微粒的抗原或抗體的純度對(duì)測(cè)定的敏感性和特異性有直接影響。不純的抗原或抗體將導(dǎo)臻前帶現(xiàn)象，線性范圍狹窄和非特異反應(yīng)。因此采用單克隆抗體和親和層析技術(shù)純化抗原或抗體是提高免疫膠乳敏感性和特異性的主要方法（二）由于測(cè)定用的波長與粒徑大小有關(guān)；因此粒徑的均一性是影響測(cè)定精度一個(gè)重要因素。在合成膠乳時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制各種理化條件，使合成的粒徑精確地控制在0.1-0.2 ntf具有穩(wěn)定的化學(xué)性能；（三）緩沖液和稀釋液應(yīng)選擇最適PH和電解質(zhì)濃度，并應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑，以提高免疫膠乳的穩(wěn) 定性。40 膠乳凝集試驗(yàn)。 其原理是包被了抗原或抗體的膠乳微粒（免疫膠乳）， 與標(biāo)本中相應(yīng)混合系統(tǒng)形成一定濁度，濁度增加的程度與標(biāo)本中被檢物濃度成正比關(guān)系，在一定波長下進(jìn)行濁度測(cè)