試驗八細(xì)菌生長曲線的測定及【內(nèi)容充實】

1、參考資料-頁眉頁腳可刪除實驗八細(xì)菌生長曲線的測定及 血球計數(shù)板測定微生物生長一、細(xì)菌生長曲線的測定及細(xì)菌的生長曲線就是把一定量的菌體細(xì)胞接種到包容積的液體培養(yǎng)基中，在 適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在此過程中，其細(xì)胞數(shù)目將隨培養(yǎng)時間的延續(xù)而發(fā)生規(guī) 律性的變化，如以細(xì)胞數(shù)目的對數(shù)值（或O.D.值）為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時間為橫坐 標(biāo)作一條曲線，即為細(xì)菌的生長曲線，它反映了細(xì)菌的群體生長規(guī)律。大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細(xì)胞每 20min分裂一次。 依據(jù)其生長速率的不同，可把細(xì)菌的生長曲線劃分為延滯期，對數(shù)期，穩(wěn)定 期和衰亡期等四個時期。 微生物OD值是反映菌體生長狀態(tài)的一個指標(biāo)

2、， OD是optical delnsity （光密 度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。 通常400700nm都是微生物測定 的范圍，505nm測菌絲菌體、560nm測酵母、600nm測細(xì)菌。 本實驗測定細(xì)菌生長曲線的方法是，將待測菌種接入一只大試管的培養(yǎng)液 中，在適宜的培養(yǎng)溫度和良好的通氣狀態(tài)下，定時取出此試管，在600納米波長處測定菌液濃度（O. D.值），在一定的范圍內(nèi)，菌液濃度與光密度值成線性關(guān)系。因此，根據(jù)菌液的O. D.值可以推知細(xì)菌生長繁殖的進(jìn)程。將所測得的一組O.D.值 與其相應(yīng)的培養(yǎng)時間作圖，即可繪制出該菌的生長曲線。 實驗操作1、菌種培養(yǎng)：取大腸桿菌斜面菌種1支，以無菌

3、操作挑取1環(huán)菌苔，接入肉膏 蛋白陳培養(yǎng)液（LB）中，靜止培養(yǎng)12-14h,備用。2、制備LB培養(yǎng)基100ml置于200ml三角瓶內(nèi)，備用。3、標(biāo)記：取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即 0、1.5、3、4、 6、8、10、12、14、16 和 20h。4、接種：分別用5ml無菌吸管吸取5ml大腸桿菌培養(yǎng)液（培養(yǎng)1214h）W入盛有 100ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無資料本參考資料-頁眉頁腳可刪除菌大試管中。5、培養(yǎng)：將已接種的試管置搖床37c振蕩培養(yǎng)（振蕩頻率250r/min）,分別培養(yǎng)0、 1.5、3、4、6、8、10、12、14、1

4、6和20h,將標(biāo)有相應(yīng)時間的試管取出，立即 放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。6、比濁測定：用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用 600nm波長進(jìn)行比 濁測定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用 LB液體培 養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，使其光密度值在 0.10.65之內(nèi)（測定OD值前，將待測定 的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布）。7、繪制細(xì)菌生長曲線：以時間為橫坐標(biāo)，OD600值為縱坐標(biāo)，繪制大腸桿菌的 生長曲線。二、血球計數(shù)板測定微生物生長基本原理血球計數(shù)板是一塊特別的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條崎。中央有一短 橫溝和兩個平臺，兩崎的表面比兩個平臺的表面高 0.1mm,每

5、個平臺上刻有不同 規(guī)格的格網(wǎng)，中央1mm2面積上刻有400個小方格。血球計數(shù)板有兩種規(guī)格，一種是將1cm2面積分為25個大格，每大格再分為 16個小格（25漢6）;另一種是16個大格，每個大格再分為25個小格（1625）。兩 者都是總共有400個小格。當(dāng)專用蓋玻片置于兩條崎上，從兩個平臺側(cè)面加入菌 液后，400個小方格（1mm2面積）計數(shù)室上形成0.1mm3的體積。通過對一定大格 內(nèi)微生物數(shù)量的統(tǒng)計?？捎嬎愠?mL菌液所含的菌體數(shù)。在血球計數(shù)板上，刻有一些符號和數(shù)字，其含義是：XB-K-25為計數(shù)板的型 號和規(guī)格，表示此計數(shù)板分25大格；0.1mm為蓋上蓋玻片后計數(shù)室的高； 1/400mm2表示計數(shù)室面積是1mm2,分400個小格，每小格面積是1/400 mm2。資料本參考資料-頁眉頁腳可刪除A.血球計數(shù)板的正面B.血球計數(shù)板的例面圖1血球計數(shù)板的構(gòu)造1、蓋片；2、計數(shù)室A.25大格x 16小格計數(shù)板R 16大格x 25小格什敷版圖2兩種不同刻度的計數(shù)板本方法適用于酵母菌和霉菌抱子的數(shù)量測定。若要測定細(xì)菌數(shù)量時誤差較 大。本法測得的是菌體總數(shù)、不能區(qū)分是活菌體還是死菌。實驗操作1、血球計