尿素分解菌導(dǎo)學(xué)案

1、課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一、篩選菌株1篩選微生物的原理：人為提供有利于 生長(zhǎng)的條件（包括、溫度、等），同時(shí)或其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。2、 選擇培養(yǎng)基：允許 的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)或其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。3、 欲得到分離分解尿素的細(xì)菌可以用以 唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)樵摷?xì)菌可以產(chǎn)生 ，將尿素分解成，使培養(yǎng)基的PH，所以若作進(jìn)一步的鑒定可向該培養(yǎng)基長(zhǎng)加入0二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目1、 微生物活菌計(jì)數(shù)的常用方法是 ，其原理是：當(dāng)樣品的稀釋度足夠 時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約有多少活菌。利用

2、 公式： 進(jìn)行計(jì)算。（ C 代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積， M代表稀釋 倍數(shù)）2、 為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋度下至少涂布 個(gè)平板，取菌落數(shù)的，且這三個(gè)平板的菌落數(shù)差異過(guò)大，3、用這種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目，因?yàn)?，因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。4、 也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方 法。三、設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的0四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1土壤取樣：細(xì)菌適宜在酸堿度接近 的土壤中生長(zhǎng)，絕大多數(shù)細(xì)菌在距地表約 的土壤2、 樣品稀釋：測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選

3、用 二、的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)； 測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用、的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)；測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用、的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。3、 微生物的培養(yǎng)與觀察：細(xì)菌一般在 的溫度下培養(yǎng)；放線菌一般在的溫度下培 養(yǎng);真菌一般在的溫度下培養(yǎng)。4、 菌落的特征包括菌落的、和等方面。五、操作提示無(wú)菌操作：取土樣的小鏟子和盛土樣的信封使用前都需要;應(yīng)在取土樣；在土壤稀釋過(guò)程中，每一步都要在 操作。練習(xí)題1. 分離土壤中分解尿素的細(xì)菌 ，對(duì)培養(yǎng)基的要求是（）。加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂 加葡萄糖 不加葡萄糖加硝酸鹽 不加硝酸鹽A. B.C.D.2. 下圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示

4、意圖。據(jù)圖分析正確的是A. 3號(hào)試管中的菌落稀釋倍數(shù)為103倍B. 4號(hào)中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰為5號(hào)的10倍C. 5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為X10 9個(gè)D. 該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要高3. 可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是A 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B .以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C .以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹川試劑D 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑4. 在農(nóng)田土壤的表層自生固氮菌較多，用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可將自生固氮菌與其他細(xì)菌分開，對(duì)培養(yǎng)基的要求是加抗生素不加抗生素

5、加氮素不加氮素加葡萄糖不加葡萄糖37C恒溫箱中培養(yǎng)2830C溫度下培養(yǎng)A. B.C . D .5. 從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，下列實(shí)驗(yàn)操作不正確的A. 將土壤用無(wú)菌水稀釋，制備10510 使用 法可以獲得如上圖中的單個(gè)菌落，用該方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇菌落數(shù)在 間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為50個(gè)，所用稀釋液的體積為 ml，稀釋倍數(shù)為101 2 3 4 5時(shí)，則每毫升樣品中的菌落數(shù) 為。 土壤稀釋液B. 將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上C. 用加入剛果紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌D. 從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株6. 關(guān)于對(duì)分

6、解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離、計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)敘述，錯(cuò)誤的是A. 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品 稀釋液中的一個(gè)活菌。B. 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品大約含有多少活菌。C. 設(shè)置對(duì)照的目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾D. 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基的pH的變化，還 不能準(zhǔn)確鑒定培養(yǎng)基中的細(xì)菌就是能夠分解尿素的那種。7. 下列關(guān)于從土壤中分離細(xì)菌的操作步驟中，正確的是()土壤取樣稱取10g 土壤取出加入盛有 90mL無(wú)菌水的錐形瓶中吸取進(jìn)行平板涂布依次稀釋至io1、io2、io3、io 采用固體平板

7、培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，要將培養(yǎng)皿 (正放或倒、io5、106、107稀釋度A.tttB .ttt C .ttt D .ttt8. 下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基是()A.KHPO、NstHPO、MgSQB.KHPQ、NqHPO、MgSQC.KHPQ、NqHPO、MgSQD.KHPQ、NqHPO、MgSQ7H2。、葡萄糖、尿素、瓊脂、水7H2。、葡萄糖、瓊脂、水7“。、尿素、瓊脂、水7“。、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水;9. 幽門螺桿菌簡(jiǎn)稱 Hp,主要寄生在胃幽門、胃竇等附近的黏膜上，是人類至2i世紀(jì)初唯一的已知胃部細(xì)菌. Hp可產(chǎn)生高活性的尿素酶.(1) 制備幽門螺桿菌培養(yǎng)基時(shí)，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至性.培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌的常用方法是 倒平板時(shí)要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是.(2) 圖表示的是用 法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果圖是在純化過(guò)程中通過(guò) 法分離培養(yǎng)的結(jié)果，在培養(yǎng)基上接種時(shí)接種環(huán)需通過(guò)灼燒滅菌，完成圖中劃線操作,至少需要灼燒接種環(huán) 次.(3) 為檢測(cè)某人體內(nèi)是否感染了Hp,可讓其服用14C標(biāo)記的，定時(shí)收集呼出的氣體，通過(guò)分析呼氣中14C標(biāo)記的CQ的含量即可判斷該檢測(cè)方法和卡爾文研究光合 作用的方法一樣可稱為 法.10. 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但是，尿素CO (NH) 2并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的