植物組培外植體消毒詳解

1、1/ 4 下載文檔可編輯植物組培外植體消毒詳解外植體的消毒植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間，表面上附著大量 的微生物，這是組織培養(yǎng)的一大障礙。因此在材料接種培養(yǎng)前必須要 消毒處理，消毒一方面要求把材料表面上的各種微生物殺滅， 同時(shí)又 不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影響其生長(zhǎng)。 因此，外植體的消 毒處理是植物組織培養(yǎng)工作中的重要一環(huán)。（1）常用的消毒劑 常用的消毒劑如下表所示。 理想的消毒劑應(yīng)具有消毒效果好， 易被無(wú)菌水沖洗掉或能自行分解， 對(duì)材料損傷小， 對(duì)人體及其他生物 無(wú)害，來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉。常用消毒劑的使用方法及效果1酒精酒精是最常用的表面消毒劑， 以70%75%酒精殺菌效果最好

2、，95%或無(wú)水酒精會(huì)使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固， 形成一層干燥膜， 阻止了酒精的繼續(xù)滲入，殺菌效果大大降低。酒精具有較強(qiáng)的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)變性，殺菌效果好。 同時(shí)它還具有較強(qiáng)的濕潤(rùn)作用， 可排除材料上的空氣， 利于其他消毒 劑的滲入。但酒精對(duì)植物材料的殺傷作用也很大，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，植 物材料的生長(zhǎng)將會(huì)受到影響， 甚至被酒精殺死， 使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí) 間。但酒精不能徹底消毒， 一般不單獨(dú)使用，多與其他消毒劑配合使 用。2/ 4 下載文檔可編輯2升汞又稱氯化汞，Hg2+可以與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì) 變性，從而殺死菌體。 升汞的消毒效果極佳， 但易在植物材料上殘留， 消毒后需用無(wú)菌水反

3、復(fù)多次沖洗。 升汞對(duì)環(huán)境危害大， 對(duì)人畜的毒性 極強(qiáng)，使用后應(yīng)做好回收工作。3次氯酸鈉次氯酸鈉是一種較好的消毒劑，它可以釋放出活性氯離子， 從而殺死菌體。其消毒能力很強(qiáng)，不易殘留，對(duì)環(huán)境無(wú)害。但次氯酸 鈉溶液堿性很強(qiáng)，對(duì)植物材料也有一定的破壞作用。4漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸鈣Ca(ClO)2，消毒效果很好， 對(duì)環(huán)境無(wú)害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。5過(guò)氧化氫也稱雙氧水，消毒效果好，易清除，又不會(huì)損傷外植體，常 用于葉片的消毒。6新潔爾滅這是一種廣普表面活性消毒劑，對(duì)絕大多數(shù)植物外植體傷害 很小，殺菌效果好。(2)消毒方法1莖尖、莖段及葉片等的消毒消毒前先對(duì)植物組織進(jìn)行修整，去

4、掉不需要的部分，然后用 自來(lái)水沖洗。 對(duì)于一些表面不光滑或長(zhǎng)有絨毛的材料， 可用洗滌劑清 洗，必要時(shí)3/ 4 下載文檔可編輯用毛刷充分刷洗，硬質(zhì)材料可用刀刮。消毒時(shí)在超凈臺(tái)上操作，先用70%酒精浸泡1030s,以無(wú)菌 水沖洗23次，然后按材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)實(shí)程度，分別采用2%次氯酸鈉浸泡1015min或用0.1%升汞浸510min。消毒時(shí)要不斷 攪動(dòng)，使植物材料與消毒劑充分地接觸。 若材料有絨毛， 最好在消毒 液中加入幾滴Tween-20,最后用無(wú)菌水沖洗35次。2果實(shí)及種子的消毒先用自來(lái)水沖洗1020mi n,再用酒精迅速漂洗一下。果實(shí)用2做氯酸鈉浸10min，后用無(wú)菌水沖洗23次。種子

5、則先用10%次氯 酸鈉浸泡2030min,難以消毒的可用0.1%升汞消毒510min。對(duì)于 種皮太硬的種子， 也可預(yù)先去掉種皮， 再用4%次氯酸鈉浸泡810min。3花藥的消毒 用于組織培養(yǎng)的花藥多未成熟，其外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，處于無(wú)菌狀態(tài)。消毒時(shí)將整個(gè)花蕾或幼穗用70%酒精浸泡數(shù)秒 鐘，然后用無(wú)菌水沖洗23次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用無(wú) 菌水沖洗23次。4根及底下部器官的消毒由于這類材料生長(zhǎng)于土壤中， 表面帶菌量大， 消毒較為困難。 可先用自來(lái)水沖洗，軟毛刷刷洗，用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸510min或2漱氯酸鈉中浸1015min,最后用無(wú)菌水沖洗3次。在操作時(shí)要根據(jù)材料的大小、幼嫩、質(zhì)地等差異做出判斷后， 再選4/4 下載文檔可編輯擇適宜的消毒劑種類、濃度和消毒時(shí)間，切不可生搬硬套。消毒 的最佳效果應(yīng)以最大限度地殺死材料上的微生物，而又對(duì)材料的損傷 最小為好。使用濃度:肖葩時(shí)間/min.*除的4易.對(duì)植掬毒占升汞#0.1722-10.較血聶好劇醞酒精J易*好#有“次氯酸Z536易，1很好無(wú)漂白梢粉，53。易很垢低離一過(guò)鼠化氫10*125-15.最易好.新潔爾火/0.5