雙孢蘑菇菌種要求_附件

1、雙孢蘑菇菌種要求我國(guó)采用三級(jí)擴(kuò)大繁(網(wǎng)載) 栽培雙孢蘑菇使用的菌種是人工培育的純菌絲體及其培養(yǎng)基的混合體。 育程序(即母種、原種、栽培種)培育雙孢蘑菇菌種。1 范圍雙孢蘑菇( Agaricusbisporus )菌種的質(zhì)量要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、 貯運(yùn)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雙孢蘑菇( Agaricusbisporus )的生產(chǎn)、流通和使用。2 引用標(biāo)準(zhǔn)下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文， 通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。 在本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)， 所 示版本均為有效。 所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂， 使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的 可能性。GB1911990 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)準(zhǔn)GB4789.

2、28 1994 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法、培養(yǎng)基和試劑GB96871988 食品包裝用聚乙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB9688 1988 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB/T12728 1991 食用菌術(shù)語(yǔ)3 定義 本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。3.1 母種 stockculture 經(jīng)各種方法分離、選育或雜交得到的具有出菇能力的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。3.2 原種 pre-culturespawn 由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。 栽培種 spawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。3.4 拮抗現(xiàn)象 antagonism 具有不同遺傳基因的菌落間產(chǎn)生不生長(zhǎng)區(qū)帶或形成不同形式線形

3、邊緣的現(xiàn)象。3.5 無(wú)棉塑料蓋 plasticstop 可代替塑料蓋，帶有某種高分子或纖維材料可滿足濾菌和透氣要求的塑料蓋。3.6 玻璃菌種瓶 glassspawnbottle圓柱形，容積750mL,耐126C高溫,無(wú)色、淡綠色或淡蘭色的透明玻璃瓶。瓶體總高190mm±2mm，瓶頸高 25mm ± 1mm，瓶口外徑 40mm ± 1mm，瓶體外徑 82mm ± 1mm。3.7 塑料菌種瓶 polypropylenespawnbottle圓柱形，容積850mL，耐126 C高溫，白色、半透明，衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)符合 GB9688規(guī)定的塑料瓶。瓶體總高165mm &#

4、177; 2mm，瓶頸高28mm ± 1mm，瓶口外徑63mm ± 1mm，瓶體外徑 90mm ± 1mm。生長(zhǎng)緩慢、 菌絲體表面特征成角狀異常3.8 角變 sector因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、的現(xiàn)象。培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、 發(fā)暗或菌絲變稀弱的3.9 高溫抑制線 hightemperaturedline 食用菌菌種在生長(zhǎng)過(guò)程中受高溫的不良影響， 現(xiàn)象。3.10 同工酶 isoenzyme 催化相同生化反應(yīng)， 而結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)不同的酶分子。 通過(guò)凝膠電泳使同工酶分離成遷移率不同的區(qū)帶， 經(jīng)生物化學(xué)染色后顯示出的同工酶譜， 可對(duì)生物品種進(jìn)行酶分子水平

5、的鑒別或 鑒定。4 質(zhì)量要求4.1 母種4.1.1 容器規(guī)格采用 18mmX180mm 、 20mmX200mm 的玻璃試管。4.1.2 培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（ PDA 培養(yǎng)基），按 GB4789.28 中 4.79 規(guī)定配置。4.1.3 感官指標(biāo)符合表 1 規(guī)定。表1項(xiàng)目要求 棉塞或無(wú)棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求 培養(yǎng)基灌入量為試管總體積的十分之一至五分之一 培養(yǎng)基斜面長(zhǎng)度為試管總長(zhǎng)度的二分之一至五分之一 斜面接種塊大小 35mmX35mm培養(yǎng)基斜面正面外觀 菌絲體特征潔白或米白、濃密、羽毛狀或葉脈狀 菌絲體表面均勻、平整、無(wú)角變菌絲分泌物無(wú) 菌落邊緣整齊，無(wú)膏

6、狀、蠟狀細(xì)菌或酵母菌菌落及霉菌菌落 培養(yǎng)基斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，顏色均勻、無(wú)暗斑、無(wú)色素 培養(yǎng)物氣味有雙孢蘑菇菌種特有的香味，無(wú)酸、臭、霉等異味 培養(yǎng)物鏡檢菌絲粗壯，無(wú)雜菌菌絲及孢子，無(wú)蟲(chóng)及蟲(chóng)卵。4.1.4 菌絲生長(zhǎng)速度在適溫（24C± 1C）下，15- 20天長(zhǎng)滿試管。4.1.5母種遺傳和栽培性狀供種單位，母種需經(jīng)酯酶（Est）同工酶類型鑒定，確認(rèn)其遺傳類型與對(duì)照相 同后，需再經(jīng)出菇試驗(yàn)確定產(chǎn)量及品質(zhì)等栽培農(nóng)藝性狀合格后，方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。4.1.5.1菌絲體Est同工酶的聚丙烯酰胺凝膠電泳類型包括G型（呈現(xiàn)e1,e3特征帶）、H型（呈現(xiàn)e2,e4和e30-33特征帶卜H

7、G1HG2型（呈現(xiàn)e1,e3,e30-33特征帶）和HG4型（呈現(xiàn)e1,2,3,4 和 e30-33 特征帶 ）等。以 Est 區(qū)帶向正極泳動(dòng)距離與溴酚藍(lán)指示劑向正極泳動(dòng)距離的比值作為電 泳相對(duì) 遷移率（Rm） 。e1,e2,e3,e4,e30,e31,e32和 e33 的 Rm 值分 另U為24 小時(shí)內(nèi)萌發(fā)恢復(fù)，定0.820,0.810,0.760,0.750,0.128,0.100,0.070 和 0.010。4.1.5.2菌絲萌發(fā)、定植能力接種到適合的培養(yǎng)基后，在正常條件下 植迅速、菌 絲健壯， 20 天以內(nèi)長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。4.1.5.3結(jié)菇轉(zhuǎn)潮能力覆土后1216天結(jié)菇，分布均勻；1822天

8、采菇，每潮菇間隔710天。4.1.5.4抗逆性對(duì)溫度、 濕度、 酸堿度等生長(zhǎng)條件變化耐受能力較強(qiáng)； 對(duì)主要病蟲(chóng)害的抵抗能 力較強(qiáng)。4.1.5.5生物學(xué)效率在正常條件下生物學(xué)效率不低于30%。4.2 原種4.2.1 容器規(guī)格玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶，分另符合 3.6 和 3.7 規(guī)定。4.2.2 培養(yǎng)基4.2.2.1 腐熟麥桿或稻桿 （干）77%，腐熟牛糞粉 （干）20%,石膏粉 1%,碳酸鈣 2%,含水量 62%± 1%,pH7.5。4.2.2.2 腐熟棉籽殼（干） 97%，石膏粉 1%,碳酸鈣 2%,含水量 55%± 1%,pH7.5。4.2.3 感官指標(biāo)符合表 2 規(guī)定。

9、表2項(xiàng)目要求棉塞或無(wú)棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求 培養(yǎng)基上表面距瓶口的距離 50mm± 5mm接種量每支母種接原種 4 6 瓶菌種瓶外觀 菌絲體特征潔白濃密、生長(zhǎng)旺健 培養(yǎng)物表面菌絲體生長(zhǎng)均勻，無(wú)角變，無(wú)高溫抑制線 培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁，無(wú)干縮培養(yǎng)物表面分泌物無(wú)各種雜菌孢子、菌絲無(wú)拮抗現(xiàn)象無(wú)培養(yǎng)物氣味有蘑菇菌種特有的香味，無(wú)酸、臭、霉等異味 培養(yǎng)物鏡檢菌絲粗壯、無(wú)雜菌菌絲和孢子、無(wú)蟲(chóng)及蟲(chóng)卵424菌絲生長(zhǎng)速度：原種瓶應(yīng)發(fā)滿菌絲，在適溫（24C± 1 C）下菌絲長(zhǎng)滿瓶不超過(guò) 45天。4.3 栽培種4.3.1 容器規(guī)格：玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶，也可采用不小

10、于15cm X 28cm ,厚0.04mm-0.06mm 的聚丙烯塑料袋。塑料袋的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)符合 GB9687 和 GB9688 規(guī)定。4.3.2 培養(yǎng)基除同 4.2.2.1 和 4.2.2.2 外，另可用以下兩種。4.3.2.1 谷粒 98%，石膏粉 2%,含水量 50% ± 1%,pH7.5 8.0。4.3.2.2 其它經(jīng)省級(jí)或省級(jí)以上鑒定適合于雙孢蘑菇菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。4.3.3 感官指標(biāo)符合表 3 規(guī)定。表3項(xiàng)目要求 棉塞或無(wú)棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求 培養(yǎng)基面距瓶（袋）口的距離 50mm± 5mm接種量每瓶原種接栽培種 3050 瓶（袋） 菌

11、種瓶（袋）外觀菌絲體特征潔白濃密、生長(zhǎng)旺健 不同部位菌絲體生長(zhǎng)均勻，無(wú)角變，無(wú)高溫抑制線 培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶（袋）壁，無(wú)干縮培養(yǎng)物表面分泌物無(wú)各種雜菌孢子、菌絲無(wú)拮抗現(xiàn)象無(wú)培養(yǎng)物氣味有蘑菇菌種特有的香味，無(wú)酸、臭、霉等異味 培養(yǎng)物鏡檢菌絲粗壯、無(wú)雜菌菌絲和孢子、無(wú)蟲(chóng)及蟲(chóng)卵4.3.4菌絲生長(zhǎng)速度栽培種瓶 （袋）應(yīng)發(fā)滿菌絲，在適溫（24C± 1C）下菌絲長(zhǎng)滿菌種瓶（袋） 不超過(guò) 45 天。4.3.5 種源應(yīng)使用通過(guò)省級(jí)或省級(jí)以上菌種審定委員會(huì)審定、認(rèn)定或登記的品種，并從具有 相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種。5 抽樣5.1 質(zhì)檢部門的抽樣應(yīng)具有代表性。5.2 母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時(shí)間分

12、批編號(hào)，原種、栽培種按菌種來(lái)源、制種方法和接種時(shí)間分批編號(hào)。按批隨機(jī)抽取被檢樣品。5.3 母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%，5%， 1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于 10支、瓶（袋） ；超過(guò) 100 支、瓶（袋）的，可進(jìn)行兩級(jí)抽樣。6 試驗(yàn)方法6.1 感官檢驗(yàn)5X6.1.3 表 1、表 2、表 3 中除接種量、培養(yǎng)物氣味和培養(yǎng)物鏡檢三項(xiàng)外的各項(xiàng)，用肉眼或 放大鏡觀察。以鼻嗅判斷。用放大倍數(shù)不低于 10X40 的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水 30 個(gè)視野。6.1.4 表 1、表 2、表 3 中培養(yǎng)物氣味，6.1.5 表 1、表 2、表 3 中培養(yǎng)物鏡檢， 封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少

13、于6.1.6 表 2、表 3 中接種量，需察看菌種廠的生產(chǎn)紀(jì)錄。按無(wú)菌操作接入 GB4789.28 中 4.8 規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染；培養(yǎng)液澄6.2 細(xì)菌檢驗(yàn) 取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，25C -28C振蕩培養(yǎng)1 2天， 清，為無(wú)細(xì)菌污染。6.3 母種遺傳和栽培性狀檢驗(yàn),刮取菌絲 ,按 1:3:0.5 的比例混合菌絲 （g）、0.1Mol/L 磷酸緩沖液 ,臺(tái)式離心機(jī) 10000r/min 離心 5min, 取上清液 ,按 5:1:1 的比例混6.3.1Est 同工酶鑒定 取菌齡為 15-20 天的試管母種 （mL） 和石英砂 （g）, 研磨成

14、勻漿 合上清液、40%蔗糖和0.01%溴酚藍(lán)溶液作為電泳樣品，4C下冷藏備用。采用聚丙烯酰胺凝 膠電泳。用pH8.9Tris-HCI緩沖液配制9%分離膠，用pH8.3Tris-甘氨酸作電極緩沖液。點(diǎn)樣 75uL,3 C下120V電泳20min后穩(wěn)壓 200V,4h。用固藍(lán) RR鹽60mg,0.1Mol/L 磷酸緩沖液 （pH6.0）80mL a -萘乙酯38mg和3 -萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的染色液染色，顯現(xiàn)酶譜， 再根據(jù)特征帶分型。6.3.2 栽培性狀將被檢母種制成原種。采用 4.2.2.1 的培養(yǎng)基配方（含水量提高到68%），配制 360 千克培養(yǎng)基，接種后分3組（每組2M2）進(jìn)

15、行常規(guī)管理，根據(jù)表4所列項(xiàng)目，做好栽培記錄，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果。 同時(shí)將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對(duì)照，亦做同樣處理。對(duì)比二者的檢驗(yàn)結(jié)果，以時(shí)間計(jì)的檢驗(yàn)項(xiàng)目中， 被檢母種的任何一項(xiàng)時(shí)間較對(duì)照菌株推遲 5天以上（含 5天）者，為不合格； 產(chǎn)量性狀差異顯著低于對(duì)照菌株者， 為不合格； 菇體外觀形態(tài)與對(duì)照明顯不同或畸形者， 為 不合格。表4檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果 母種發(fā)滿所需時(shí)間，天轉(zhuǎn)潮間隔時(shí)間，天 原種發(fā)滿所需時(shí)間，天 總產(chǎn)， Kg栽培種發(fā)滿所需時(shí)間，天 平均單產(chǎn)， Kg菌種萌發(fā)所需時(shí)間，天 平均單菇重， g菌絲發(fā)滿培養(yǎng)基所需時(shí)間，天 生物學(xué)效率， %覆土至扭結(jié)所需時(shí)間，天柄的直徑， mm6.4 留

16、樣各級(jí)菌種要留樣備查，下貯存，母種 5 個(gè)月，7 檢驗(yàn)規(guī)則菇型、色澤 覆土至采菇所需時(shí)間，天 菇蓋直徑、厚度、柄長(zhǎng)、留樣的數(shù)量應(yīng)每個(gè)批號(hào)母種3-5支，原種和栽培種5-7瓶，于4C -6C原種 4 個(gè)月，栽培種 2 個(gè)月。7.1 判定規(guī)則按質(zhì)量要求進(jìn)行。檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合質(zhì)量要求時(shí)，為合格菌種，其中任何一項(xiàng) 不符合要求，均為不合格菌種。8 標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存8.1 標(biāo)志8.1.1 產(chǎn)品標(biāo)志每支、瓶（袋）菌種要貼有清晰注明以下要素的標(biāo)志。雙孢蘑菇母種）As2796） xxx 菌種廠） 2000.xx.xx ）a. 產(chǎn)品名稱b. 品種名稱C.生產(chǎn)單位d.接種日期8.1.2 包裝標(biāo)志每箱菌種要貼有清

17、晰注明以下要素的包裝標(biāo)志。a. 產(chǎn)品名稱、品種名稱b. 廠名、廠址、聯(lián)系電話C.出廠日期d. 保質(zhì)期、貯存條件、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)e. 發(fā)貨單位f. 收貨單位g. 數(shù)量h. 毛重、凈重i. 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)8.1.3 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示按 GB191 規(guī)定，應(yīng)注明以下圖示標(biāo)志：a. 小心輕放標(biāo)志b. 防水防潮防凍標(biāo)志C.防曬防高溫標(biāo)志d. 防止倒置標(biāo)志e. 防止重壓標(biāo)志8.2 包裝內(nèi)部用棉花、 碎紙、 報(bào)紙等具8.2.1 母種外包裝采用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱， 有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。8.2.2 原種、栽培種外包裝采用有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱，每箱20 瓶，內(nèi)部用碎紙、報(bào)紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。紙箱上部和底部用8Cm 寬的膠帶封口，并用打包帶捆扎兩道，箱內(nèi)附產(chǎn)品合格證書(shū)和使用說(shuō)明（包括菌種種性、培養(yǎng)基配方及適用范圍）8.3 運(yùn)輸不得與有毒物品混裝。8.3.1運(yùn)輸中須有防震、防曬、防雨淋、防凍、防雜菌污染的措施。8.3.1 氣溫達(dá)30 C