CyclinD1與細胞周期調(diào)控

1、與細胞周期調(diào)控Cyclin D1盧夢玲閆超賴多徐漢虹( 華南農(nóng)業(yè)大學天然農(nóng)藥與化學生物學教育部重點實驗室 昆蟲毒理研究室，廣州 510642)摘 要: 細胞周期是細胞生命活動中一個最重要的過程，其關鍵是 G1 期的啟動。細胞周期蛋白( Cyclin) 、細胞周期蛋白依賴性激酶( CDKs) 和 CDK 抑制因子( CKIs) 是參與細胞周期調(diào)控的主要因子。Cyclin D1 是調(diào)控細胞周期 G1 期的關鍵蛋 白，是一個比其他 Cyclins 更加敏感的指標，對細胞周期調(diào)控至關重要。綜述 Cyclin D1 的結(jié)構(gòu)和功能及其在腫瘤組織中的表 達特征，初步分析 Cyclin D 在昆蟲細胞周期調(diào)控

2、的研究。關鍵詞: 細胞周期蛋白 D1 細胞周期 細胞周期調(diào)控 腫瘤Cyclin D1 and Cell Cycle RegulationLu MenglingYan ChaoLai Duo Xu Hanhong( Key Laboratory of Natural Pesticide and Chemical Biology，Minsitry of Education，Laboratory of InsectToxicology，South China Agricultural University，Guangzhou 510642)Abstract:Cell cycle is the mos

3、t important process of cellular activities，whose key is the start of the G1 phase Cyclins，Cyclin de-pendent kinases( CDKs) and CDK inhibitors( CKIs) play major roles in cell cycle regulations Cyclin D1，as a key protein in G1 phase，is a more sensitive indicator than other Cyclins Herein we reviewed a

4、bout the structure，function of Cyclin D1 and its expression intumour tissue，and also preliminarily analyzed the application of Cyclin D in insect cell cycle regulationKey words:Cyclin D1 Cell cycle Regulation of cell cycleTumour細胞周期是保證細胞進行生命活動的基本過程，通過細胞周期時相的變遷中細胞進入增殖、分 化、衰老和死亡等生理狀態(tài)1。因此，細胞周期的 準確調(diào)控對生物

5、體正常的生存、繁殖、發(fā)育和遺傳具 有決定性作用。真核細胞內(nèi)有一個調(diào)控機構(gòu)，使細 胞周期能夠有條不紊地依次進行。細胞周期的調(diào)控 通過細胞周期各時相中各自特異性的細胞周期蛋白 實現(xiàn)，其中細胞周期蛋白( Cyclin) 、細胞周期蛋白依 賴性激酶( Cyclin-dependent kinases，CDKs) 和 CDK 抑制因子( CDK inhibitors，CKIs) 是參與細胞周期調(diào) 控的主要因子。而 Cyclin D1 是調(diào)控細胞周期 G1 期的關鍵蛋白，對細胞周期調(diào)控至關重要。研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)控細胞周期 G1 期的關鍵蛋白 Cy- clin D1 已被公認為是一種原癌基因，Cyclin D1

6、 的過 度表達與腫瘤和癌癥的發(fā)生有一定的聯(lián)系，對細胞 周期調(diào)控起著十分重要的作用。Cyclin 參與下的細胞周期調(diào)控細胞周期的調(diào)控可分為外源和內(nèi)源性調(diào)控。外 源性調(diào)控主要是細胞因子及其他外界刺激引起; 內(nèi) 源性調(diào)控主要是通過 Cyclin-CDK-CDI 的網(wǎng)絡調(diào)控1來實現(xiàn)2，3。CDK 在細胞周期中保持恒定的水平，而細胞周期蛋白發(fā)生規(guī)律性的變化并調(diào)節(jié) CDK 激酶的活性變化。Cyclin 和 CDK 共同驅(qū)使細胞周期 從一個時期進入下一個時期。因此，有學者形象地 將 CDK 分子比作控制細胞周期的“引擎”，而把 cyc-3。lin 比作控制“引擎”的油門由此可見，Cyclin 在細胞周期調(diào)控

7、中起著很重要的作用。1. 1Cyclin 概述1983 年，Evans 等4 首次在海洋無脊椎動物中發(fā)現(xiàn)一組蛋白質(zhì)呈周期性出現(xiàn)，并調(diào)節(jié)細胞的生長，因此將其確定為細胞周期蛋白( Cyclin) 。隨后，Lo-收稿日期: 2011-05-03作者簡介: 盧夢玲，女，碩士研究生，研究方向: 昆蟲細胞毒理學; E-mail: menglinglu88 gmail com通訊作者: 徐漢虹，教授，博士生導師，研究方向: 天然源農(nóng)藥、昆蟲細胞毒理學; E-mail: hhxu scau edu cnhka 等5首次從非洲爪蟾( Xenopus) 成熟卵中分離出成熟促進因子( maturation prom

8、oting factor，MPF) ， 并證明 Cyclin 為其一組分，是調(diào)控細胞分裂的核心 因子。此后，Cyclin 在其他生物如青蛤( clams) 6、 海星( starfish) 7和果蠅( Drosophila) 8 等生物中均 被發(fā)現(xiàn)并證實。1988 年，科學家們發(fā)現(xiàn)細胞周期調(diào) 節(jié)蛋白能與細胞分化周期編碼蛋白結(jié)合并激活相應 的蛋白激酶，從而促進細胞分裂。目前至少發(fā)現(xiàn)有11 種不同的 Cyclin，分別為 A、B1、B2、C、D1、D2、 D3、E、F、G 和 H。根據(jù) Cyclin 調(diào)控細胞周期時相的 不同，可分為 G1 期和 M 期兩大類。各類 Cyclin 均 含有一段約 1

9、00 個氨基酸的保守序列，稱為周期蛋 白框( Cyclin box) 。該序列介導 Cyclin 與 CDK 結(jié) 合。CDK 與 Cyclin 結(jié)合后具有激酶的活性，使靶蛋 白磷酸化而產(chǎn)生相應的生理效應，如將核纖層蛋白 磷酸化導致核纖層解體、核膜消失，將 H1 磷酸化導 致染色體的凝縮等等，這些效應的最終結(jié)果是細胞 周期的不斷運轉(zhuǎn)。目前在動物中發(fā)現(xiàn)的 CDK 有 7 種。各種 CDK 分子均含有一段相似的激酶結(jié)構(gòu)域， 區(qū)域中 的 保 守 序 列 即 PSTAIRE 與 Cyclin 的 結(jié) 合 有關。CKIs 在細胞周期中起負調(diào)控作 用。 CKIs 是 CDK 抑制蛋白，通過競爭性地抑制 Cy

10、clin 或 Cyclin / CDK 復合物，導致 Cyclin 生物學功能喪失，對細胞 生長起負調(diào)控作用。目前發(fā)現(xiàn)的 CKI 分為兩大家 族: Ink4( inhibitor of CDK 4) 和 Kip( kinase inhibition表 1 細胞周期各時相中的 Cyclin 種類細胞周期時相Cyclin 種類G1 / SG2 / MCyclin C、Cyclin D、Cyclin ECyclin A、Cyclin BCyclin C 與所有 Cyclin 的同源性最低，主要在果蠅及人類細胞中發(fā)現(xiàn)，它與其他 G1-Cyclin 不同的 是其 mRNA 和蛋白質(zhì)水平在 G1 早期達最

11、高，可能 在 G1 早期發(fā)揮作用。Cyclin D 首先在酵母菌中被 發(fā)現(xiàn)，它能激活 CDK6，驅(qū)動細胞通過 START。它有3 個亞型，包括 D1、D2 和 D3，具組織特異性。Cyclin D1 與 Cyclin D2 功能相似，都在酵母子細胞中起作 用，Cyclin D3 在酵母母細胞中起作用。Cyclin E 在 Cyclin D 之后出現(xiàn)，于 G1 / S 轉(zhuǎn)化過程中表達，在 G1 晚期發(fā)揮正調(diào)控細胞周期的作用。M-Cyclins 是在 G2 / M 交界期誘導細胞分裂的 Cyclins，包括 Cyclin A 與 Cyclin B，見表 1。Cyclin A 蛋白由 CCNA 基因

12、編碼，在 Cyclin E 之后表達，可阻 滯 G1 期向 S 期過渡，也可促進細胞從 G2 期向 M 期 轉(zhuǎn)化。Cyclin B 是有絲分裂蛋白激酶的一個亞單 位，能促進 G2 期向 M 期的過渡。哺乳動物 Cyclin B 在 S 晚期合成。M 期中細胞 周期蛋白 Cyclin A 和 Cyclin B 通過泛素途徑降解是 細胞脫離有絲分裂所必須的。Cyclin D1 的結(jié)構(gòu)及其功能生命個體細胞周期的關鍵是 G1 期的啟動，而 Cyclin D1 是調(diào)控細胞周期 G1 期的關鍵蛋白，是一 個比其他 Cyclins 更加敏感的指標，因此 Cyclin D1 對細胞周期調(diào)控至關重要。細胞在長期

13、的進化過程 中衍生出保證細胞周期中 DNA 復制和染色體分配 的檢測機制，通常被稱為細胞周期檢測點 ( check point) 又稱為限制點( restriction point) 。細胞周期主 要有 3 個檢測點，即 G1 / S 期、G2 / M 期以及紡錘體 裝配檢測點9。其中最重要的檢測點是 G1 晚期 START，如果 START 調(diào)節(jié)失靈，細胞將越過檢測點 直接進 入 S 期，并允許細胞復制未修復的突變 DNA，從而積累形成基因改變的腫瘤表型。G1 / S 期 檢測點缺陷導致腫瘤的主要原因是 p53 的缺失和2P16ink4a 、P15ink4b 、P18ink4cprotein

14、 ) 。 Ink4包 括和P19ink4d ，特異性抑制 CDK 4 / Cyclin D1、CDK 6 / Cyc-復 合 物。 Kip 包 括 P21cip1 ( cyclinlin D1inhibitionprotein 1 ) 、P27 kip1 ( kinase inhibition protein 1 ) 和P57 kip2 等，能抑制大多數(shù) CDK 的激酶活性，P21 cip1還能與 DNA 聚合酶 的輔助因子 PCNA( prolifera-ting cell nuclear antigen )合成。結(jié) 合，直 接 抑 制 DNA 的1. 2細胞周期各時相的 CyclinsG1

15、 期是細胞在增殖過程中能接受從外界傳入的增殖或抑制增殖信號的唯一時期，G1-Cyclins 作用在 G1 期或 G1 / S 交界期，啟動細胞周期和促進DNA 合成的 Cyclin，包括 Cyclin C、D 及 E( 表 1) 。肺癌24、乳腺癌25，26、頭頸部癌27和食道癌28) 中起促進作用。在人類腫瘤中，多種機制包括基因改變、轉(zhuǎn)錄后 調(diào)控、翻譯后蛋白穩(wěn)定等促進 Cyclin D1 的 高 表 達29?；蚋淖儼ㄈ旧w易位、基因擴增、基因 組多態(tài)性。染色體易位是一種常見的 B 細胞淋巴 瘤的發(fā)病的遺傳機制30。11q13 基因擴增引起的 Cyclin D1 過量表達在多種腫瘤中都有報

16、道，如頭頸 癌31、垂 體 瘤32、食管鱗狀細胞 癌33 和 乳 腺 癌34，35等。邵晉晨等36報道，正常組織中 Cyclin D1 及 p53 蛋白的表達與癌變組織有顯著性差異; 另外，多數(shù)研 究者認為，Cyclin D1 的過表達現(xiàn)象是多種腫瘤的首 發(fā)事件37。而張莉萍等38 用苦參堿作用 K562 細 胞，導致 Cyclin D1 / Cdk5 表達增強，DNA 合成能力 降低，細胞從增殖進入分化狀態(tài)。為證明 Cyclin D1 在人鼻咽癌 ( NPC ) 細胞系中的表達和作 用，Zhao 等39采用 Western blotting 技術分析 Cyclin D1 的表Cyclin D

17、1 上調(diào)。2. 1 Cyclin D1 的結(jié)構(gòu)Cyclin D1 的編碼基因位于 11q13 上，有 5 個外 顯子，全長約 15 kb10。與其他 Cyclins 相比，CyclinD1 的 N-末端缺少一個“降解盒”片段，因此是最小 的 Cyclin。該 Cyclin 半衰期很短，不足 25 min。在有 生長因子的情況下，Cyclin D1 在細胞周期中首先被 合成，并于 G1 中期達到高峰。2. 2Cyclin D1 細胞周期調(diào)控功能與腫瘤組織表達 特征Cyclin D1 的主要功能是促進細胞增殖。Cyclin D1 通過結(jié)合并激活 G1 時期特有的周期蛋白依賴 性激酶 CDK4，G1

18、 期周期抑制蛋白( Rb) 被磷酸化， 磷酸化的 Rb 蛋白從其所結(jié)合的 E2F 轉(zhuǎn)錄因子上解 離，E2F 轉(zhuǎn)錄因子起始轉(zhuǎn)錄激活細胞周期的基因，從而推動細胞周期由 G1 時期進入到 S 時期11。此 外，研究發(fā)現(xiàn)，除了促進細胞進行分裂外，D 型 Cyc- lin 還具有某些獨立于 CDK 激酶活性的促進基因轉(zhuǎn) 錄的功能12。Cyclin D1 可以結(jié)合組蛋白去乙?；?P / CAF，亦可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子 TFD13等，通過 和這些轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，Cyclin D1 起到促進基因轉(zhuǎn) 錄的功能。達，并用免疫印跡分析 NPC 細胞發(fā)現(xiàn)有 Cyclin D1，D2，D3 的表達，且 Cyclin D1

19、 的過表達可導致 G1 / S控制點的失調(diào)，而抑制 Cyclin D1 的表達可抑制細胞40進入 S 期的進程。Ciemerych 等 分別建立了僅表達 Cyclin D1、D2 和 D3 的 3 種鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在 胚胎發(fā)育的晚期均出現(xiàn)異常，甚至死亡。有研究發(fā)目前，Cyclin已被公認為是一種 原 癌 基D1因14，其過度表達可致細胞增殖失控而惡性化。研究表明，在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了 Cyclin D1 基因過表 達和基因擴增，包括乳腺癌、膀胱癌、甲狀旁腺腫 瘤、淋 巴 瘤、黑 色 素 瘤 / 肺癌及細胞中心型淋巴 瘤等15 17。1991 年，Motkura 等18 在研究人甲狀旁腺腺瘤 時

20、發(fā)現(xiàn)了 Cyclin D1 基因。研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤 Cyc-lin D1 過表達。如 2004 年，Wu 等19發(fā)現(xiàn)食管鱗癌組織 Cyclin D1 過表達，且高分化癌表達明顯強于低 分化癌; 2004 年，Toncheva 等20發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌 Cyc- lin D1 蛋白表達陽性率明顯高于正常結(jié)直腸組織;2007 年，Yuan 等21發(fā)現(xiàn)幾乎所有外套細胞淋巴瘤 病例中 Cyclin D1 蛋白活性均升高; 2007 年，Burn- worth 等22發(fā)現(xiàn) Cyclin D1 蛋白在各種惡性皮膚腫 瘤中的表達顯著升高。Cyclin D1 過量表達在不同 類型的癌癥( 外套細胞淋巴瘤( MCL

21、) 23、非小細胞41現(xiàn) ，加入生長因子后細胞有 Cyclin D1 的表達;Cyclin D1 導入鼠成纖維細胞實現(xiàn)穩(wěn)定表達后能使 之易于轉(zhuǎn)化; Cyclin D1 轉(zhuǎn)基因鼠引起乳腺增生和乳 腺上皮腫瘤。功能性敲除 Cyclin D1 若加入 Cyclin D1 抗體，成纖維細胞在 G1 期停滯，不能進入 S 期; 在食管癌細胞株導入 Cyclin D1 反義核酸使細胞惡 性程度明顯受到抑制。另有研究表明，表達野生型 p53 細胞受照射后會發(fā)生 G1 期阻滯42，故推斷這 種阻滯可能與 Cyclin D 的異常表達有關43。關于細胞周期蛋白 D1 過度表達導致細胞失 控、癌變的研究已經(jīng)不少，

22、醫(yī)學上也提出以 Cyclin D1 異常表達作為診斷癌癥一項指標的設想，以及研 究 Cyclin D1 在細胞周期調(diào)控中的作用，從而尋找出 治療癌癥的藥物。5 Evans T，Rosenthal ET，Youngblom J，et al Cyclin: a protein speci-fied by maternal mRNA in sea urchin eggs that is destroyed at each cleavage division Cell，1983，33: 389-3966 Lohka MJ，Hayes MK，Maller JL Purification of matur

23、ation-promo- ting factor，an intracellular regulator of early mitotic events Proc Natl Acad Sci，1988，85: 3009-30137Katherine I，Swenson KM，F(xiàn)arrell JV Rudermanthe clam embryo pro- tein cyclin a induces entry into M phase and the resumption of meio- sis in Xenopus oocytes Cell，1986，47( 96) : 861-8708 La

24、bbe JC，Capony JP，Caput D，et al MPF from starfish oocytes at first meiotic metaphase is a heterodimer containing one molecule of cdc2 and one molecule of cyclin B EMBOJ，1989，8: 3053-30589 Finley R，Jr Thomas BJ，Zipursky SL，et al Isolation of Drosophila Cyclin D，a protein expressed in the morphogenetic

25、 furrow before en- try into S phase Proc Natl Acad Sci，1996，93( 7) : 3011-301510 王黎明，鹿彩蓮，紀祥瑞，等 細胞周期調(diào)控相關蛋白 p53、p16、p21、Rb 在子宮內(nèi)膜癌的表達和意義 現(xiàn)代婦科進展，2001，10( 6) : 414-41711 Coqueret O Linking Cyclins to transcription control Gene，2002，299: 35-5512 Mcmahon C，Suthiphongchai T，Ewen ME，et al P / CAF associates

26、with cyclinD1 and potentiates its activaion of the estrogen receptor Proc Natl Acad Sci USA，1999，96( 10) : 5382-538713 Adnane J，Shao Z，Robbins PD Cyclin D1 associates with the TBP associated factor TAF( ) 250 to regulate Sp1 mediated transcrip- tion Oncogene，1999，18: 239-24714 Tosiya I Genomic organ

27、ization chromosomal localization and inde- pendent expression of human Cyclin D genes Genomics，1992，13: 56515 苗麗君，王靜，李珊珊，等 磷酸化 AKT 及 Cyclin D1，MMP-9d在非小細胞肺癌中的表達及相關性研究 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2007，17( 7) : 786-79016 郭柏鳴，張志華，陳一戎，等 膀胱癌中 Smad4、Ki-67、Cyclin D1基因表達及臨床意義 蘭州大學學報: 醫(yī)學版，2008，34 ( 3 ) :43-4717 秦艷，梁建芳，鄭繪霞，等 RA

28、SSF1A 及 Cyclin D1 在乳腺癌及 癌前病變中的表達及意義 山西醫(yī)科大學學報，2008，39 ( 2 ) :139-14118 Fu M，Wang C，Li Z，et al Minireview: Cyclin D1: normal and ab- normal functions Endocrinology，2004，145: 5439-4719 Motokura T，Bloom T，Kim HG，et al Anovel Cyclin encoded by a bcl-1 linked candidate oncogene Nature，1991，350 ( 6318 ) :5

29、12-51520Wu MY，Zhuang CX，Yang HX，et al Expression of Egr-1，c-fos and Cyclin D1 in esophageal cancer and its precursors: An immunohis- tochemical and in situ hybridization study World J Gastroenterol，2004，10: 476-80Cyclin D 對昆蟲細胞周期的調(diào)控細胞周期蛋白 D 在昆蟲細胞周期調(diào)控方面研 究較少。Cyclin D 是目前在果蠅中發(fā)現(xiàn)的唯一的 D 型 Cyclin，通過與 Cycl

30、in D1 相類似的機制推動細胞 分裂8。果蠅中和 Cyclin D 結(jié)合的細胞周期蛋白 依賴性激酶是 CDK4。研究表明，Cyclin D 在果蠅的發(fā)育中發(fā)揮重要的 作用。敲除果蠅體內(nèi)的 Cyclin D，會導致成體果蠅個 體變小，其體重將比正常的果蠅減少 10% 20% 左 右，且幼蟲翅原基( wing disc) 的細胞數(shù)目明顯減少， 檢測胚胎發(fā)育時期的中腸細胞發(fā)現(xiàn)突變體的 S 時 期的細胞數(shù)目大量的減少44。在果蠅眼睛中過量 表達 Cyclin D 和 CDK4，將會導致細胞數(shù)目增多，果 蠅眼睛變大。而在果蠅翅原基內(nèi)過表達 Cyclin D 和 CDK4，則會導致翅原基中產(chǎn)生過量的細胞

31、45。翅 原基是完全變態(tài)昆蟲的成蟲盤之一，發(fā)育成為成蟲 的翅，經(jīng)過數(shù)以千萬倍的增長，翅原基最終會發(fā)育為 成蟲的翅膀。翅原基數(shù)目的減少或增多，會影響昆 蟲翅膀的形成。若使昆蟲體內(nèi)的 Cyclin D 選擇性的 敲除或過量表達，都可能會使昆蟲的生長發(fā)育受到 一定程度的影響。由于果蠅中的 Cyclin D 通過與 Cyclin D1 相類 似的機制推動細胞分裂，Cyclin D 基因的過表達或 不表達也可能導致細胞周期的異常調(diào)控，使其細胞 增殖失控，細胞數(shù)目非正常的增多或減少，最終導致 細胞異常分化甚至癌變。近年來，在昆蟲毒理研究 方面，細胞周期作為一個重要的檢測手段被廣泛應 用，Cyclin D

32、是細胞周期的關鍵蛋白，深入研究 Cyc- lin D 在昆蟲細胞周期調(diào)控中的作用，可為防治害蟲 的基因藥物研發(fā)提供基礎資料。3參考文獻1 魯潤龍，顧月華 細胞生物學M 合肥: 中國科學技術大學出版 社，1991: 2292 Sherr CJ The Pezcoller lecture: cancer cell cycles revisited CancerRes，2000，60: 3689-953 Hunter T，Pines J Cyclins and cancer: Cyclin D and CDK inibitors come of age Cell，1994，79: 573-5824

33、申景平，劉立仁 細胞周期調(diào)控機制為癌癥研究奠定基礎 國外 科技態(tài)，2001，388( 11) : 6-921 Toncheva D，Petrova D，Tzenova V，et al Tissue microarray analysisof Cyclin D1 gene amplification and gain in colorectal carcinomas Tumour Biol，2004，25: 157-6022 Burnworth B，Arendt S，Muffler S，et al The multi-step process of human skin carcinogenes

34、is: a role for p53，Cyclin D1，hTERT，p16， and TSP-1 Eur J Cell Biol，2007，86: 763-8023 Jares P，Colomer D，Campo E Genetic and molecular pathogenesis of mantle cell lymphoma: Perspectives for new targeted therapeu- tics Nat Rev Cancer，2007，7: 750-76224 Jin M，Inoue S，Umemura T，et al Cyclin D1，p16 and reti

35、noblasto- ma gene product expression as a predictor for prognosis in non- small cell lung cancer at stages I and II Lung Cancer，2001，34:207-21825 Barnes DM，Gillett CE Cyclin D1 in breast cancer Breast CancerRes Treat，1998，2: 1-1526 Roy PG，Thompson AM Cyclin D1 and breast cancer BREAST，2006，15( 6) :

36、718-72727 Bartkova J，Lukas J，Muller H，et al Abnormal patterns of D-type Cyclin expression and G1 regulation in human head and neck canc- er Cancer Res，1995，55: 949-95628 Shamma A，Doki Y，Shiozaki H，et al Cyclin D1 overexpression in esophageal dysplasia: A possible biomarker for carcinogenesis ofe- so

37、phageal squamous cell carcinoma Int J Oncol，2000，16:261-26629 Kim JK，Diehl JA Nuclear Cyclin D1: An oncogenic: driver in hu- man cancer Journal of Cellular Physiology，2009，220 ( 2 ) :292-29630 Kuppers R Mechanisms of B-cell lymphoma pathogenesis Nat RevCancer，2005，5: 251-26231 Izzo JG，Papadimitrakop

38、oulou VA，Li XQ，et al Dysregulated cyclin D1 expression early in head and neck tumorigenesis: In vivo evi- dence for an association with subsequent gene amplification Onco- gene，1998，17: 2313-232232 Hibberts NA，Simpson DJ，Bicknell JE，et al Analysis of cyclin D1 ( CCND1) allelic imbalance and overexpression in sporadic human pituitary tumors Clin Cancer Res，1999，5: 2133-213933 Shinozaki H，Ozawa S，Ando N，et al Cyclin D1amplification as anew predictive classification for squamous cell carcinoma of the e- sophagus，adding ge