實驗二器械的清洗和消毒

1、實驗 2 器械的清洗與消毒【實驗原理】在組織培養(yǎng)過程中，離體細(xì)胞對任何毒性物質(zhì)都十分敏感。毒性物質(zhì)包括解體的微生物及細(xì)胞殘余物以及非營養(yǎng)的化學(xué)物質(zhì)，因此對新采用和重新使用的培養(yǎng)皿等培養(yǎng)用品都要嚴(yán)格清洗和消毒?！緦嶒?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)并掌握細(xì)胞培養(yǎng)使用的器皿、器械的洗滌和消毒?！緝x器、材料及試劑】1儀器：超凈工作臺，干燥箱，高壓鍋，過濾器。2材料：紫外燈，0.22m 微孔濾膜。3試劑：75%酒精，0.1%新潔爾滅，高錳酸鉀，重鉻酸鉀，濃硫酸?！静僮鞑襟E】1清洗（1）玻璃器皿的清洗步驟：按浸泡刷洗浸酸沖洗等四步程序進(jìn)行。浸泡：新購進(jìn)的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來水浸泡過

2、夜、水洗，然后再用2%5%鹽酸浸泡過夜或煮沸 30min，水洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進(jìn)行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。刷洗：用軟毛刷、優(yōu)質(zhì)洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH 上升的趨勢，所以易選用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)洗滌劑。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。會嚴(yán)重破壞玻璃器皿的光潔度。特別注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗滌劑沖干凈。浸酸：將器皿浸泡于清潔液24h，如急用也不得少于 4h。清潔液由重鉻酸鉀、濃硫酸及

3、蒸餾水配制而成，具有很強(qiáng)的氧化作用，去污能力很強(qiáng)。經(jīng)清潔液浸泡后，玻璃器皿殘留的末刷洗掉的微量雜質(zhì)可被完全清除。沖洗：先用自來水充分沖洗，吸管等沖流10min，瓶皿需每瓶灌滿、倒掉，反復(fù)10 次以上。然后再經(jīng)蒸餾水漂洗 3 次,不留死角。晾干或烘干備用。對已用過的器皿，凡污染者必先經(jīng)煮沸30min 或放 3%鹽酸中浸泡過夜，未污染者可不需滅菌處理，但仍要刷洗、清潔液浸酸過夜，沖洗等?！靖健壳鍧嵰旱呐渲坪褪褂米⒁馐马?. 清潔液(配方見表 2-1)配方成分弱酸次強(qiáng)液強(qiáng)液重鉻酸鉀（g）5010060清水（ml）10001000200濃硫酸（ml）90160800硫酸濃度（v/v）8%14%80%選

4、用耐酸塑料桶或不銹鋼桶配制為宜。先將重鉻酸鉀溶于水（用玻璃棒攪拌助溶，有時不能完全溶解）。緩緩加入濃硫酸，切忌過急，否則將產(chǎn)熱而發(fā)生危險(絕不可將重錯酸餌液倒入濃硫酸中)。清潔液配好呈棕紅色，待變綠色時表明失效。由于清潔液的腐蝕性極強(qiáng)，配制與應(yīng)用時必須小心，并做好防護(hù)。2矽酸鈉洗液貯存液(×100)砂酸納 80 克加偏磷酸鈉 9 克加熱溶在 1000ml 水中。使用時用水稀釋 100 倍，將器皿放入煮沸 20min，冷卻后沖洗，再用 2%HCl 浸泡 2h 后，自來水沖洗。矽酸鈉洗液較清潔液安全，但價格較貴。（2）塑料器皿清洗自來水充分浸泡沖洗2%Na0H 浸泡過夜自來水沖洗2%5%

5、鹽酸浸泡 30min自來水沖洗蒸餾水漂洗 3 次晾干紫外線照射 30min(或先用 75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外線照射 30min)。凡能耐熱的塑料器皿，最好經(jīng) 101.3kPa(121.3)高壓滅菌。（3）膠塞等橡膠類處理新購置者先經(jīng)自來水沖洗2%NaOH 煮沸 15min自來水沖洗2%5%HCl 煮沸 15min自來水沖洗 5 次以上蒸餾水沖洗 5 次以上蒸餾水煮沸 10min，倒掉沸水讓余熱烘干瓶塞等?；蛘麴s水沖洗晾干，整齊擺放于小型金屬盒內(nèi)經(jīng) 101.3kPa 高壓滅菌。（4）金屬器械的清洗新購進(jìn)的金屬器械常涂有防銹油，先用沾有汽油的紗布擦去油脂，再用水洗凈，最后用酒精棉球擦拭，晾干

6、。用過的金屬器械應(yīng)先以清水煮沸消毒，再擦拭干凈。使用前以蒸餾水煮沸 10min，或包裝好以 101.3kPa高壓 15min。（5）除菌濾器的處理用過的濾器將濾膜去除，用三蒸水充分洗凈殘余液體，置干燥箱中烘干備用。2包裝包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染，所以經(jīng)清洗烤干或晾干的器材，應(yīng)嚴(yán)格包裝后再行消毒滅菌處理。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。包裝分為局部包裝和全包裝兩類，前者用于較大瓶皿，一般用硫酸紙和牛皮紙將瓶口包扎好；后者適于較小培養(yǎng)瓶皿、吸管、注射器、金屬器械和膠塞等，以下為常用瓶皿、吸管、無菌衣帽等的包裝方法，其它物品可參照處理。瓶類

7、：硫酸紙罩以瓶口,外罩二層牛皮紙用繩扎緊。小瓶皿、膠塞、刀剪等器械可裝人飯盒，飯盒再以牛皮紙包好，繩扎好。吸管、滴管口用脫脂棉塞上(不要太緊或太松)裝人消毒筒內(nèi)，濾器、濾瓶、橡皮管等都要用牛皮紙包好瓶口等，外罩一層牛皮紙包好，再用包布包好。無菌衣、帽、口罩，均以牛皮紙或包布包好，繩扎好。3消毒滅菌嚴(yán)格的消毒滅菌對保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。熱滅菌：玻璃器皿，160170，90120min 或 1804560min。蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等

8、，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用 68kPa(115)高壓滅菌 10min；布類、玻璃制品、金屬器械等用 103kPa(121.3)高壓滅菌 1520min。濾過除菌：適于含有不耐熱成分的培養(yǎng)基和試劑的除菌，用孔徑為 0.22m 微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等，用此濾膜過濾兩次，可使支原體達(dá)到某種程度的去除，但不能除去病毒。紫外線：紫外線的波長為 200300nm，最強(qiáng)是在 254 nm，615 平方米最少一只紫外燈，高度要在 2.5m 以下，濕度 45%60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，實驗前應(yīng)不低于30 分鐘的照射時間。熏蒸消毒：當(dāng)遇有細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)多次污染，或?qū)嶒炇覂蓚€月一次的常規(guī)消毒，均可用高錳酸鉀 57.5g，加甲醛（40%）1015ml，混合放入一開放容器內(nèi)，立即可見白色甲醛煙霧，消毒房間需封閉 24小時，致少 4 小時以上。煮沸消毒：緊密情況時使用，金屬器械和膠蹇在水中煮2030 分鐘，趁熱傾去水分即可使用。化學(xué)消毒：化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制進(jìn)行消毒滅菌