學(xué)習(xí)手冊-微生物形態(tài)觀察-顯微鏡使用和維護(hù)

1、學(xué)習(xí)手冊子情境：顯微鏡使用和維護(hù)引導(dǎo)文-單元設(shè)計(jì)-技能考核標(biāo)準(zhǔn)-實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)書子情境：引導(dǎo)文微生物形態(tài)觀察顯微鏡使用和維護(hù)閱讀材料材料一：顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)一、顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個(gè)部件。廣義的說也包括照明光源、濾光器、蓋玻片和載玻片等。（一）、物鏡物鏡是決定顯微鏡性能的最重要部件，安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，接近被觀察的物體，故叫做物鏡或接物鏡。1、物鏡的分類 物鏡根據(jù)使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡；其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡（常用放大倍數(shù)為90100倍）。 根據(jù)放大倍數(shù)的不同可分為 低倍物鏡（10倍以下）、中倍物鏡（20倍左右）高倍物鏡

2、（4065倍）。 根據(jù)像差矯正情況，分為消色差物鏡（常用，能矯正光譜中兩種色光的色差的物鏡）和復(fù)色差物鏡（能矯正光譜中三種色光的色差的物鏡，價(jià)格貴，使用少）。2、物鏡的主要參數(shù)： 物鏡主要參數(shù)包括：放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。、放大倍數(shù)是指眼睛看到像的大小與對應(yīng)標(biāo)本大小的比值。它指的是長度的比值而不是面積的比值。例：放大倍數(shù)為100×，指的是長度是1m的標(biāo)本，放大后像的長度是100m，要是以面積計(jì)算，則放大了10,000倍。 顯微鏡的總放大倍數(shù)等于物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。、數(shù)值孔徑也叫鏡口率，簡寫NA 或A，是物鏡和聚光器的主要參數(shù)，與顯微鏡的分辨力成正比。干燥物鏡的數(shù)值孔徑為0

3、.05-0.95，油浸物鏡（香柏油）的數(shù)值孔徑為1.25。、工作距離是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本最清楚時(shí)物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān)，物鏡的焦距越長，放大倍數(shù)越低，其工作距離越長。例：10倍物鏡上標(biāo)有10/0.25和160/0.17，其中10為物鏡的放大倍數(shù)；0.25為數(shù)值孔徑；160為鏡筒長度（單位mm）；0.17為蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度（單位 mm）。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm，40倍物鏡有效工作距離為0.48mm 。 3、物鏡的作用是將標(biāo)本作第一次放大，它是決定顯微鏡性能的最重要的部件分辨力的高低。分辨力也叫分辨率或分辨本領(lǐng)。分辨力的大小是用分辨距離

4、（所能分辨開的兩個(gè)物點(diǎn)間的最小距離）的數(shù)值來表示的。在明視距離（25cm）之處，正常人眼所能看清相距0.073mm的兩個(gè)物點(diǎn)，這個(gè)0.073mm的數(shù)值，即為正常人眼的分辨距離。顯微鏡的分辨距離越小，即表示它的分辨力越高，也就是表示它的性能越好。顯微鏡的分辨力的大小由物鏡的分辨力來決定的，而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長決定的。當(dāng)用普通的中央照明法（使光線均勻地透過標(biāo)本的明視照明法）時(shí)，顯微鏡的分辨距離為d=0.61/NA 式中d物鏡的分辨距離，單位  nm。     照明光線波長，單位  nm。   

5、; NA 物鏡的數(shù)值孔徑例如油浸物鏡的數(shù)值孔徑為1.25，可見光波長范圍為400700nm ，取其平均波長550 nm，則d=270 nm，約等于照明光線波長一半。一般地，用可見光照明的顯微鏡分辨力的極限是0.2m。（二）、目鏡因?yàn)樗拷^察者的眼睛，因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。1、目鏡的結(jié)構(gòu)通常目鏡由上下兩組透鏡組成，上面的透鏡叫做接目透鏡，下面的透鏡叫做會(huì)聚透鏡或場鏡。上下透鏡之間或場鏡下面裝有一個(gè)光闌（它的大小決定了視場的大?。?yàn)闃?biāo)本正好在光闌面上成像，可在這個(gè)光闌上粘一小段毛發(fā)作為指針，用來指示某個(gè)特點(diǎn)的目標(biāo)。也可在其上面放置目鏡測微尺，用來測量所觀察標(biāo)本的大小。目鏡的長度越

6、短，放大倍數(shù)越大（因目鏡的放大倍數(shù)與目鏡的焦距成反比）。2、目鏡的作用是將已被物鏡放大的，分辨清晰的實(shí)像進(jìn)一步放大，達(dá)到人眼能容易分辨清楚的程度。常用目鏡的放大倍數(shù)為516倍。3、目鏡與物鏡的關(guān)系物鏡已經(jīng)分辨清楚的細(xì)微結(jié)構(gòu)，假如沒有經(jīng)過目鏡的再放大，達(dá)不到人眼所能分辨的大小，那就看不清楚；但物鏡所不能分辨的細(xì)微結(jié)構(gòu)，雖然經(jīng)過高倍目鏡的再放大，也還是看不清楚，所以目鏡只能起放大作用，不會(huì)提高顯微鏡的分辨率。有時(shí)雖然物鏡能分辨開兩個(gè)靠得很近的物點(diǎn)，但由于這兩個(gè)物點(diǎn)的像的距離小于眼睛的分辨距離，還是無法看清。所以，目鏡和物鏡即相互聯(lián)系，又彼此制約。（三）、聚光器聚光器也叫集光器。位于標(biāo)本下方的聚光器

7、支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中，聚光鏡可分為明視場聚光鏡（普通顯微鏡配置）和暗視場聚光鏡。1、光鏡的主要參數(shù)數(shù)值孔徑（NA ）是聚光鏡的主要參數(shù)，最大數(shù)值孔徑一般是1.21.4，數(shù)值孔徑有一定的可變范圍，通常刻在上方透鏡邊框上的數(shù)字是代表最大的數(shù)值孔徑，通過調(diào)節(jié)下部可變光闌的開放程度，可得到此數(shù)字以下的各種不同的數(shù)值孔徑，以適應(yīng)不同物鏡的需要。有的聚光鏡由幾組透鏡組成，最上面的一組透鏡可以卸掉或移出光路，使聚光鏡的數(shù)值孔徑變小，以適應(yīng)低倍物鏡觀察時(shí)的照明。2、聚光鏡的作用聚光鏡的作用相當(dāng)于凸透鏡，起會(huì)聚光線的作用，以增強(qiáng)標(biāo)本的照明。一般地把聚光鏡的聚光焦點(diǎn)設(shè)計(jì)在它上端透鏡平面上方約

8、1.25mm處。（聚光焦點(diǎn)正在所要觀察的標(biāo)本上，載玻片的厚度為1.1mm左右）3、可變光闌可變光闌也叫光圈，位于聚光鏡的下方，由十幾張金屬薄片組成，中心部分形成圓孔。其作用是調(diào)節(jié)光強(qiáng)度和使聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相適應(yīng)?？勺児怅@開得越大，數(shù)值孔徑越大（觀察完畢后，應(yīng)將光圈調(diào)至最大）。在可變光闌下面，還有一個(gè)圓形的濾光片托架。（四）反光鏡反光鏡是一個(gè)可以隨意轉(zhuǎn)動(dòng)的雙面鏡，直徑為50mm，一面為平面，一面為凹面，其作用是將從任何方向射來的光線經(jīng)通光孔反射上來。平面鏡反射光線的能力較弱，是在光線較強(qiáng)時(shí)使用，凹面鏡反射光線的能力較強(qiáng)，是在光線較弱時(shí)使用。反光鏡通常一面是平面鏡，另一面是凹面鏡，

9、裝在聚光器下面，可以在水平與垂直兩個(gè)方向上任意旋轉(zhuǎn)。反光鏡的作用是使由光源發(fā)出的光線或天然光射向聚光器。當(dāng)用聚光器時(shí)一般用平面鏡，不用時(shí)用凹面鏡；當(dāng)光線強(qiáng)時(shí)用平面鏡，弱時(shí)用凹面鏡。觀察完畢后，應(yīng)將反光鏡垂直放置。（五）照明光源顯微鏡的照明可以用天然光源或人工光源1、天然光源光線來自天空，最好是由白云反射來的。不可利用直接照來的太陽光。2、人工光源、對人工光源的基本要求：有足夠的發(fā)光強(qiáng)度；光源發(fā)熱不能過多。、常用的人工光源：顯微鏡燈；日光燈（六）濾光器安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過，而吸收掉其他的光線，即為了改變光線的光譜成分或削弱光的強(qiáng)度。分為兩大類：濾光片和液體濾

10、光器。（七）蓋玻片和載玻片蓋玻片和載玻片的表面應(yīng)相當(dāng)平坦，無氣泡，無劃痕。最好選用無色，透明度好的，使用前應(yīng)洗凈。蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是0.17±0.02mm，如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不合適，都回影響成像質(zhì)量。載玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是1.1±0.04mm，一般可用范圍是11.2mm，若太厚會(huì)影響聚光器效能，太薄則容易破裂。材料二 顯微鏡的機(jī)械裝置二、顯微鏡的機(jī)械裝置   顯微鏡的機(jī)械裝置是顯微鏡的重要組成部分。其作用是固定與調(diào)節(jié)光學(xué)鏡頭，固定與移動(dòng)標(biāo)本等。主要有鏡座、鏡臂、載物臺、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、與調(diào)焦裝置組成。（一）、鏡座和鏡臂    1、

11、鏡座  作用是支撐整個(gè)顯微鏡，裝有反光鏡，有的還裝有照明光源。    2、鏡臂  作用是支撐鏡筒和載物臺。分固定、可傾斜兩種。（二）、載物臺（又稱工作臺、鏡臺）載物臺作用是安放載玻片，形狀有圓形和方形兩種，其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個(gè)通光孔，通光孔后方左右兩側(cè)各有一個(gè)安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動(dòng)式兩種。有的載物臺的縱橫坐標(biāo)上都裝有游標(biāo)尺，一般讀數(shù)為0.1mm，游標(biāo)尺可用來測定標(biāo)本的大小，也可用來對被檢部分做標(biāo)記。（三）、鏡筒鏡筒上端放置目鏡，下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。分為固定式和可調(diào)節(jié)式兩種。機(jī)械筒長

12、（從目鏡管上緣到物鏡轉(zhuǎn)換器螺旋口下端的距離稱為鏡筒長度或機(jī)械筒長）不能變更的叫做固定式鏡筒，能變更的叫做調(diào)節(jié)式鏡筒，新式顯微鏡大多采用固定式鏡筒，國產(chǎn)顯微鏡也大多采用固定式鏡筒，國產(chǎn)顯微鏡的機(jī)械筒長通常是160mm。安裝目鏡的鏡筒，有單筒和雙筒兩種。單筒又可分為直立式和傾斜式兩種，雙筒則都是傾斜式的。其中雙筒顯微鏡，兩眼可同時(shí)觀察以減輕眼睛的疲勞。雙筒之間的距離可以調(diào)節(jié)，而且其中有一個(gè)目鏡有屈光度調(diào)節(jié)（即視力調(diào)節(jié)）裝置，便于兩眼視力不同的觀察者使用。（四）、物鏡轉(zhuǎn)換器物鏡轉(zhuǎn)換器固定在鏡筒下端，有34個(gè)物鏡螺旋口，物鏡應(yīng)按放大倍數(shù)高低順序排列。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí)，應(yīng)用手指捏住旋轉(zhuǎn)碟旋轉(zhuǎn)，不要用手指

13、推動(dòng)物鏡，因時(shí)間長容易使光軸歪斜，使成像質(zhì)量邊壞。（五）、調(diào)焦裝置顯微鏡上裝有粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。有的顯微鏡粗準(zhǔn)焦螺旋與裝在同一軸上，大螺旋為粗準(zhǔn)焦螺旋，小螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋；有的則分開安置，位于鏡臂的上端較大的一對螺旋為是粗準(zhǔn)焦螺旋，其轉(zhuǎn)動(dòng)一周，鏡筒上升或下降10mm。 位于粗準(zhǔn)焦螺旋下方較小的一對螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，其轉(zhuǎn)動(dòng)一周，鏡筒升降值為0.1mm，細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦范圍不小于1.8mm。材料三、顯微鏡及其部件的使用顯微鏡及其部件的使用1、使用單筒顯微鏡時(shí)，要養(yǎng)成用左眼觀察的習(xí)慣（因一般用右手畫圖），觀察時(shí)要兩眼同時(shí)睜開，不要睜一只閉一只，因?yàn)檫@樣易于疲勞。為了訓(xùn)練學(xué)生習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開觀察

14、，可剪一塊長約14cm，寬約6cm的長方形硬紙片，在靠近左端處挖一個(gè)直徑比鏡筒上端外徑略小的圓孔，把圓孔套在鏡筒上段，觀察時(shí)兩眼同時(shí)睜開，利用紙片的右端擋住右眼的視線，這樣訓(xùn)練一段時(shí)間后，就能習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開，然后把紙片去掉。 2、直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座連接處，是一個(gè)機(jī)械關(guān)節(jié)，可用于調(diào)節(jié)鏡筒的傾斜度，便于觀察，鏡臂不能過于后傾，一般不超過40°。但是在使用臨時(shí)裝片觀察時(shí)，禁止使用傾斜關(guān)節(jié)（當(dāng)鏡筒傾斜時(shí)，載物臺也隨之傾斜，載玻片上的液體易流出），尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用，以免污損鏡體。 3、目鏡和物鏡的使用 一般都是用一個(gè)放大倍數(shù)適中的目鏡（10×）和最低倍的物鏡開

15、始觀察，逐步改用倍數(shù)較高的物鏡，從中找到符合實(shí)驗(yàn)要求的放大倍數(shù)。轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，先用低倍鏡觀察，調(diào)節(jié)到正確的工作距離（成像最清晰）。如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí)，視野中的物像范圍縮小了很多）。低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦（同高調(diào)焦），在用低倍物鏡觀察清晰時(shí)，換高倍物鏡應(yīng)可以見到物像，但物像不一定很清晰，可以轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)節(jié)。 通常認(rèn)為，使用任何一個(gè)物鏡時(shí)，有效放大倍數(shù)的上限是1，000乘它的數(shù)值孔徑，下限是250乘它的數(shù)值孔徑。如40×物鏡的數(shù)值孔徑是0.65，則上、下限分別為：1000

16、15;0.65=650倍和250×0.65163倍，超過有效放大倍數(shù)上限的叫做無效放大，不能提高觀察效果。低于下限的放大倍數(shù)則人眼無法分辨，不利于觀察。一般最實(shí)用的放大倍數(shù)范圍是500700乘數(shù)值孔徑之間的數(shù)字。 4、油浸物鏡的使用 使用油浸物鏡時(shí)，一般不要使用同高調(diào)焦。同高調(diào)焦只適用于每臺顯微鏡的原配物鏡，在使用低倍和高倍物鏡時(shí)，是一個(gè)極有利的方便條件，但在使用油浸物鏡時(shí)，則受到一定限制，一般地說，用油鏡觀察未加蓋玻片的標(biāo)本片（載玻片）時(shí)，利用同高調(diào)焦的安全度較大，而對于有蓋玻片的標(biāo)本片，要小心使用，因?yàn)橛徒镧R的工作距離很短，在設(shè)計(jì)和裝配時(shí)所考慮的同高是對標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片的。 用油

17、浸物鏡時(shí)，只在標(biāo)本片上滴香柏油。觀察完畢后，要及時(shí)進(jìn)行清潔工作，如不及時(shí)進(jìn)行，香柏油粘上灰塵，擦拭時(shí)灰塵粒子可能磨損透鏡，香柏油在空氣中暴露時(shí)間長，還會(huì)變稠、變干，擦拭很困難，對儀器很不利。擦拭要細(xì)心，動(dòng)作要輕。油浸物鏡前端先用干的擦鏡紙擦一兩次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦兩次，最后再用干的擦鏡紙擦一次。標(biāo)本片上的香柏油可用“拉紙法”（即把一小張擦鏡紙蓋在香柏油上，然后在紙上滴一些二甲苯，趁濕把紙往外拉，這樣連續(xù)三四次，即可干凈，一般不會(huì)損壞未加蓋玻片的涂片標(biāo)本）擦凈。擦鏡紙也要防塵，一般在使用前，將每頁剪成8小塊，貯存在一個(gè)干凈的小培養(yǎng)皿中，用起來既節(jié)省又方便。5、聚光器的使用

18、方法、使用聚光器的原因 當(dāng)放大倍數(shù)增加時(shí)，一方面由于放大倍數(shù)越高，透鏡數(shù)目越多，被透鏡吸收的光線也越多；另一方面由于視場（指的是所能看到被檢標(biāo)本的范圍）的亮度與放大倍數(shù)的平方成反比，即放大倍數(shù)越高，視場越暗。為了得到足夠的亮度，必須安裝聚光器，把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。、觀察時(shí)聚光器應(yīng)處的高度 觀察時(shí)，要保證得到最好的觀察效果，聚光器的聚光焦點(diǎn)應(yīng)正好落在標(biāo)本上。要實(shí)現(xiàn)這個(gè)條件，就必須調(diào)節(jié)聚光器的高度。當(dāng)用平行光照明時(shí)，聚光器的聚光焦點(diǎn)是在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm之處，因此，人們常常要求在觀察時(shí)將聚光器上升到它上端透鏡平面僅稍稍低于載物臺平面的高度，這樣聚光焦點(diǎn)就可能落到位于標(biāo)準(zhǔn)

19、厚度載玻片上的標(biāo)本上。當(dāng)使用比標(biāo)準(zhǔn)厚度薄的載玻片來承放標(biāo)本時(shí)，聚光器的位置要相應(yīng)地降低一些，而當(dāng)使用過厚地載玻片時(shí)，聚光焦點(diǎn)只能落在標(biāo)本下方，不利于精細(xì)的觀察。、聚光器與物鏡的配合 這里所謂的配合，就是使聚光器和物鏡這兩者的數(shù)值孔徑取得一致，以更好的進(jìn)行較為精細(xì)的觀察。假如聚光器的數(shù)值孔徑低于物鏡，那物鏡的部分?jǐn)?shù)值孔徑就浪費(fèi)了，從而達(dá)不到它的最高分辨力。假如把聚光器的數(shù)值孔徑大于物鏡的數(shù)值孔徑，則一方面不能提高物鏡的規(guī)定分辨力，另一方面反會(huì)由于照明光束過寬，使物象的清晰度下降。聚光器與物鏡配合的操作方法是：在完成照明、調(diào)焦操作后，取下目鏡直接向鏡筒中看，把聚光器下的可變光闌關(guān)到最小，再慢慢地開

20、大。開到它的口徑與所見視場的直徑恰好一樣大，然后按上目鏡，即可進(jìn)行觀察。每轉(zhuǎn)換一次物鏡，都要隨著進(jìn)行依次這樣的配合操作。有的聚光器可變光闌的邊框上刻有表示開啟口徑的尺度，可以根據(jù)刻度來進(jìn)行配合。完成下列信息！顯微鏡的基本部件都是什么？相關(guān)資料：材料一：普通光學(xué)顯微鏡的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法。2、把握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造（一）普通光學(xué)顯微鏡的機(jī)械裝置1、鏡座：是移動(dòng)顯微鏡的把手，其作用是支撐整個(gè)顯微鏡。有的顯微鏡的鏡座內(nèi)還裝有反光鏡和光源組。2、鏡臂：是移動(dòng)顯微鏡的把手，它支撐和固定鏡筒、載物臺及調(diào)焦裝置

21、。直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座連接處有活動(dòng)關(guān)節(jié)，可按需要將鏡臂調(diào)節(jié)至適當(dāng)傾斜度。3、鏡筒：是顯微鏡上方的空心圓筒，其內(nèi)噴以無光黑漆（避免光線亂反射），上端套接目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器連接。鏡筒有單筒和雙筒兩種。單筒可分為豎立式和傾斜式兩種；雙筒都是傾斜式的。雙筒鏡筒有調(diào)距裝置，可調(diào)節(jié)兩鏡筒之間的寬度，其中的一個(gè)鏡筒上還裝有視度調(diào)節(jié)。鏡筒上緣到物鏡轉(zhuǎn)換器螺旋下真?zhèn)€間隔稱為鏡筒長度或機(jī)械長度。調(diào)節(jié)式鏡筒附有刻度，一般可調(diào)范圍為155-250 毫米；固定式的為160 或170 毫米。4、物鏡轉(zhuǎn)換器：連接于鏡筒的下端，其上有3-4 個(gè)圓孔，可順序安裝不同倍數(shù)的物鏡，使用時(shí)?據(jù)需要轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器來更換觀察用的物鏡。

22、5、載物臺：亦稱工作臺，固定在鏡臂上，方形或圓形，中心有一通光孔，臺面上裝有推進(jìn)器和簧，可推動(dòng)和固定標(biāo)本。有的顯微鏡在載物臺兩邊或一邊（或在推進(jìn)器上面，或在載物臺下面）裝有兩個(gè)移動(dòng)手輪，轉(zhuǎn)動(dòng)移動(dòng)手輪可使載物臺前后左右移動(dòng)，便于觀察標(biāo)本的任一視野。有的顯微鏡在載物臺的縱向和橫向上裝有游標(biāo)尺，可測定標(biāo)本的大小，也可用來對被檢視野作標(biāo)記，以便下次觀察時(shí)再檢查該視野。ZXCI 普通光學(xué)顯微鏡的標(biāo)本移動(dòng)器的橫向移動(dòng)范圍為60 毫米，縱向移動(dòng)范圍為25 毫米，游標(biāo)格值0.1 毫米。6、調(diào)焦裝置：安裝在鏡臂的兩側(cè)，與鏡筒或載物臺連接。調(diào)焦裝置包括粗動(dòng)調(diào)焦手輪和微動(dòng)調(diào)焦手輪，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦手輪可使鏡筒或載物臺上下移

23、動(dòng)，以調(diào)節(jié)焦距，使標(biāo)本與物鏡的間隔即是物鏡的工作間隔。ZXCI 普通光學(xué)顯微鏡的粗微動(dòng)調(diào)焦范圍為15 毫米，微動(dòng)調(diào)焦格值為0.002 毫米。    圖1-1-1 顯微鏡的結(jié)構(gòu)1.目鏡；2.鏡筒；3.鏡臂；4.玻片?；5.游標(biāo)卡尺；6.粗準(zhǔn)焦螺旋；7. 細(xì)準(zhǔn)焦螺旋；8.底座；9.光源；10.虹彩光圈；11.聚光器；12.載物臺；13.物鏡；14.轉(zhuǎn)換器（二）普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)裝置1、目鏡：也稱接目鏡，安裝在鏡筒的上端。目鏡的作用是把物鏡放大的實(shí)像進(jìn)一步擴(kuò)大。目鏡由上下兩組透鏡組成，上面的叫接目透鏡，下面的叫會(huì)聚透鏡。上下透鏡之間裝有一個(gè)光闌。光闌的大小決

24、定視野的大小。目鏡的光闌上還可以放置測微目尺。顯微鏡通常配備有10 倍、16 倍等幾種目鏡。2、物鏡：也稱接物鏡，安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，物鏡的作用是把標(biāo)本作第一次放大。據(jù)需要時(shí)的條件不同，可以把物鏡分為干燥物鏡（包括低倍物鏡和高倍物鏡）和油浸物鏡。干燥物鏡在使用時(shí)，標(biāo)本片與物鏡之間的介質(zhì)是空氣。干燥物鏡按放大倍數(shù)還可以分為低倍物鏡、中倍物鏡和高倍物鏡。一般把10 倍以下的物鏡叫低倍物鏡，把20 倍的物鏡叫中倍物鏡，40-45 倍或60 倍的物鏡叫高倍物鏡。這些物鏡上標(biāo)有5×、10×、20×、40×、45×、60×。油浸物鏡是物鏡中放大倍

25、數(shù)最高的鏡頭（90×或100×），使用油鏡時(shí)，在標(biāo)本上加一滴鏡油作為介質(zhì)。國產(chǎn)顯微鏡的油鏡常標(biāo)有“油”字，國外產(chǎn)品則常用“oil”（oil Immersion）或“HI”（Hemcyeneous Immersion）字樣，以供識別。物鏡上通常標(biāo)有放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑（亦稱鏡口率）、工作間隔等主要參數(shù)。3、聚光器：也叫集光器，由聚光鏡和可變光闌組成。聚光鏡由一片或數(shù)片透鏡組成，其作用相當(dāng)于凸透鏡，起聚光的作用，以增強(qiáng)射進(jìn)物鏡的光線?？勺児怅@也叫光圈，位于聚光鏡的下方，由十幾片金屬薄片組成，中心部呈圓孔。推動(dòng)可變光闌的把手可以任意調(diào)節(jié)孔徑的大小，其作用是通過調(diào)節(jié)光強(qiáng)度，使聚光鏡的

26、數(shù)值孔徑和物鏡的數(shù)值孔徑相一致。可變光闌開得越大，則數(shù)值孔徑越大；反之，則數(shù)值孔徑越小。4、反光鏡：一般裝在聚光器下方的鏡座上，可以在水平和.直方向任意旋轉(zhuǎn)。它的一面是平面鏡，另一面是凹面鏡，其作用是使光源發(fā)出的光或自然光射向聚光鏡。光強(qiáng)時(shí)用平面鏡，光弱時(shí)用凹面鏡。有的顯微鏡的人工光源安裝在鏡座內(nèi)，其反光鏡也固定在鏡座內(nèi)。（三） 普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)原理由單透鏡構(gòu)成的放大鏡和由幾個(gè)透鏡組成的實(shí)體顯微鏡（解剖鏡）稱單式顯微鏡生物學(xué)教學(xué)及科研所用的光學(xué)顯微鏡一般是復(fù)式顯微鏡。1光學(xué)顯微鏡成像的原理 由外界進(jìn)射的光線經(jīng)反光鏡反射向上，或由內(nèi)光源發(fā)射的光線經(jīng)集光鏡向上，再經(jīng)聚光鏡會(huì)聚在被檢標(biāo)本上，使標(biāo)

27、本得到足夠的照明，由標(biāo)本反射或折射出的光線經(jīng)物鏡進(jìn)進(jìn)使光軸與水平面傾斜45 度角的棱鏡，在目鏡的焦平面上，即在目鏡的視場光闌處，成放大的側(cè)光實(shí)像，該實(shí)像再經(jīng)目鏡的接目透鏡放大成虛像，所以人們看到的是虛像（圖1-l-2）。 2顯微鏡的放大倍數(shù)被檢物體經(jīng)顯微鏡的物鏡和目鏡放大后的總放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)和目鏡放大倍數(shù)的乘積。如用放大40 倍的物鏡和放大10 倍的目鏡的總放大倍數(shù)是400 倍。3分辨率 物鏡前面發(fā)光點(diǎn)發(fā)射的光線進(jìn)進(jìn)物鏡的角度稱開口角度。透鏡的放大率與開口角度成正比，與焦距成反比。數(shù)值口徑（又稱開口率numerical aperture 簡寫為NA）是光線投射到物鏡上的最大開口角度一

28、半的正弦，乘上標(biāo)本與物鏡間介質(zhì)的折射率的乘積。NAn×SinNA 為數(shù)值口徑；n 是介質(zhì)折射率；為最大開口角度的半數(shù)。由于介質(zhì)為空氣時(shí)n1，最大值只能到90 度（實(shí)際上不可能達(dá)到90 度），Sin901，所以干燥系下物鏡的數(shù)值口徑都小于l。使用油鏡時(shí)，物鏡與標(biāo)本間的介質(zhì)為香柏油（n1.515）或液體石蠟（n=1.52），不僅能增加照明度，更重要的是增大數(shù)值口徑，目前技術(shù)下最大的數(shù)值口徑為1.4。 評價(jià)一臺顯微鏡的質(zhì)量優(yōu)劣，不僅要看其放大倍數(shù)，更重要的是看其分辨率。分辨率是指顯微鏡能夠辨別發(fā)光的兩個(gè)點(diǎn)或兩?細(xì)線間最小間隔的能力。該最小的間隔稱為鑒別限度（R）：R2nSin2NAR 為鑒

29、別限度；為光的波長。日光的波長0.5607m0.6m，假如用NA1.4 的物鏡，則R0.62×1.40.22m4工作間隔工作間隔是指觀察標(biāo)本最清楚時(shí)，物鏡透鏡的下表面與標(biāo)本之間（無蓋玻片時(shí)）或與蓋玻片之間的間隔。物鏡的放大倍數(shù)越大，其工作間隔越短，油鏡的工作間隔最短、約為0.2mm，所以使用油鏡時(shí)，要求蓋玻片的厚度為0.17mm。固然不同放大倍數(shù)的物鏡工作間隔不同，但生產(chǎn)廠家已進(jìn)行校正，使不同放大倍數(shù)物鏡轉(zhuǎn)換時(shí)，都能觀察到標(biāo)本，只需進(jìn)行細(xì)調(diào)焦便可使物象清楚。5目鏡的放大倍數(shù) 據(jù)計(jì)算，顯微鏡的有效放大倍數(shù)是：E×O1000×NAE 為目鏡放大倍數(shù)，O 為物鏡放大倍數(shù)

30、目鏡的有效放大倍數(shù)是：E1000NAO 據(jù)上式可知，在與物鏡的組合中，目鏡有效的放大倍數(shù)是有限的，過大的目鏡放大倍數(shù)并不能進(jìn)步顯微鏡的分辨率。如用90×，NA 為1.4 的物鏡，目鏡有效的最大倍數(shù)是15×。（二）相差顯微鏡的使用方法 相差顯微鏡與普通顯微鏡基本相同，只是在普通顯微鏡上附加光闌和相板等相差濾光裝。1、環(huán)狀光闌：是由環(huán)狀圓孔構(gòu)成的光闌，大小不同的環(huán)狀光闌成一轉(zhuǎn)盤，安裝于聚光鏡下面。更換放大率不同的物鏡時(shí)，要同時(shí)更換與其適應(yīng)的光闌。2、相板：裝于物鏡的后焦平面，有推遲直射光和衍射光相位，以及吸收光線收變亮度的作用。帶有相板的物鏡，稱為相差物鏡。3、合軸調(diào)整看遠(yuǎn)鏡：

31、為使環(huán)狀光闌的中心與物鏡的光軸完全在一直線上，必須拔出目鏡，裝上特制的低倍看遠(yuǎn)鏡，使相板的暗環(huán)與環(huán)狀光闌的明環(huán)合軸。其使用方法是在普通光學(xué)顯微鏡上換上相差聚光器和相差物鏡，將用水封載的玻片標(biāo)本放在載物臺上，轉(zhuǎn)動(dòng)相聚光器，使與物鏡的開口率或放大倍數(shù)相一致，鏡檢見物像。取下目鏡，換上合軸調(diào)整看遠(yuǎn)鏡，伸縮看遠(yuǎn)鏡筒，使看清物鏡相板上暗環(huán)和環(huán)狀光闌上的亮環(huán)；移動(dòng)彩虹光圈，使暗環(huán)和亮環(huán)圓心重合；升降聚光器，使兩環(huán)完全重合，即在亮環(huán)內(nèi)外側(cè)看到暗的邊沿。取下看遠(yuǎn)鏡，換上補(bǔ)償目鏡進(jìn)行鏡檢。鏡檢時(shí)只能以微動(dòng)螺旋調(diào)焦而不能轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器，否則需重新進(jìn)行合軸調(diào)整。更換物鏡時(shí)也要重新進(jìn)行合軸調(diào)整，然后才能觀察。相差顯微術(shù)需

32、用水作封載劑并加蓋玻片。載玻片和蓋玻片厚度分別為1.0-1.2、0.17-0.18毫米，清潔無損。 三、實(shí)驗(yàn)材料（一）儀器和其他物品普通光學(xué)顯微鏡、液體石蠟或香柏油（二）微生物材料枯草芽孢桿菌的染色標(biāo)本四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容顯微鏡的使用方法。（一）顯微鏡的放置 顯微鏡應(yīng)豎立放置在案上（二）光源 顯微鏡不能采用直射陽光。晴天可用近窗的散射光作光源。也可用日光燈作為光源。而專為顯微鏡照明而制造的聚絲電燈是較好的光源。 在接通電源后，取下目鏡，直接向鏡筒內(nèi)觀察，并調(diào)節(jié)聚光鏡上的孔徑光闌，使其孔徑與視野恰好一樣大或略小于視野，其目的是使進(jìn)射光展開的角度與物鏡的數(shù)值口徑（開口率NA）相一致，既可充分發(fā)揮該物鏡的分

33、辨力，又能把超過該物鏡可能接受的多余光擋住，否則能產(chǎn)生干擾影響清楚度。所以，原則上使用不同的物鏡時(shí)應(yīng)相應(yīng)調(diào)節(jié)孔徑光闌。放回目鏡后，通過調(diào)節(jié)聚光器上的視?光闌或調(diào)節(jié)照明度控制鈕，選擇最佳的照明效果。（三）低倍鏡和高倍鏡的使用1標(biāo)本放置2調(diào)焦 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)螺旋，升高鏡臺（或下降鏡筒）、使低倍物鏡的前端接近載片，用左眼在目鏡上觀察，并轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降（或鏡筒上升），可看到物像，然后轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)螺旋，使物假清楚。3換高倍鏡 用低倍鏡看到物像后，轉(zhuǎn)動(dòng)標(biāo)本移動(dòng)器上的螺旋，選擇合適的視野，并把要觀察的部位置于視野的中心，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器把高倍鏡置鏡筒下方。顯微鏡在設(shè)計(jì)制造時(shí)，都是共焦點(diǎn)的，即低倍鏡對焦后

34、，轉(zhuǎn)換高倍鏡時(shí)一般都能對準(zhǔn)焦點(diǎn)，能看到物像，只需轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋便可使物像清楚。通過調(diào)節(jié)集光鏡上的視?光闌或照明度控制鈕使獲得最佳照明。（四）油鏡的使用 由于細(xì)菌個(gè)體微小，需要用油鏡進(jìn)行觀察。1滴加鏡油 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降（或使鏡筒上升） 在染色標(biāo)本處滴加12 滴液體石蠟或香柏油。2轉(zhuǎn)換油鏡 轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，把油鏡置鏡筒下方。3調(diào)焦 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺上升（或鏡筒下降），讓鏡頭的前端浸進(jìn)鏡油中。操縱時(shí)要從側(cè)面仔細(xì)觀察，只能讓鏡頭浸進(jìn)鏡油中緊貼著標(biāo)本而避免讓鏡頭撞擊載玻片，導(dǎo)致玻片和鏡頭損?。然后在目鏡下進(jìn)行觀察，并緩慢?轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使鏡臺下降（或使鏡筒上升）即可看到清楚的物像。 轉(zhuǎn)

35、動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使鏡臺下降（或使鏡筒上升）時(shí)，若油鏡已離開油滴，必須重新進(jìn)行上述調(diào)節(jié)操縱。不得邊用左眼在目鏡上觀察，邊轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使鏡臺上升（或鏡筒下降）使鏡頭前端浸進(jìn)油滴中，這樣易使鏡頭撞擊載玻片，損?標(biāo)本和鏡頭。4調(diào)節(jié)孔徑光闌和視光闌 把孔徑光闌開到最大，使與油鏡的數(shù)值口徑相?配，通過調(diào)節(jié)視?光闌和照明度控制鈕選擇合適的照明。5 顯微鏡使用后的處置 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)螺旋，使鏡臺下降（或使鏡筒上升），取出染色標(biāo)本玻片，然后先用擦鏡紙接往油鏡上的香柏油，再用擦鏡紙沾少量二甲苯（不能用酒精）擦往沾在油鏡上的鏡油，最后用擦鏡紙擦凈二甲苯及鏡油。用液體石蠟作鏡油時(shí)，可以只用擦鏡紙即可擦凈，不必用（或僅用極少

36、量）二甲苯。把鏡頭轉(zhuǎn)成“八”字形，套上鏡罩后放進(jìn)顯微鏡柜中。（五）普通光學(xué)顯微鏡的維護(hù) 顯微鏡是珍貴精密的光學(xué)儀器，正確的使用、維護(hù)與保養(yǎng)，不但觀察物體清楚還可延長顯微鏡的使用壽命。防潮：顯微鏡應(yīng)放置在透風(fēng)干燥，灰塵少，不受陽光直接曝曬的?方。不使用時(shí)有機(jī)玻璃或塑料布防塵罩罩起來。也可套上布罩后放進(jìn)顯微鏡箱內(nèi)或顯微鏡柜內(nèi)。最好還在鏡箱內(nèi)放一袋干燥劑（最常用的是變色硅膠，干燥的硅膠呈藍(lán)色，吸潮后變?yōu)榈t色，淡紅色硅膠烘干呈藍(lán)色后，可繼續(xù)使用）。防塵：顯微鏡觀察室內(nèi)應(yīng)保持清潔，盡量避免塵?。目鏡和物鏡如有塵污應(yīng)用擦鏡紙擦凈。最好用塑料袋罩上并放進(jìn)鏡箱。防腐蝕：顯微鏡不要與揮發(fā)性藥品及酸、堿類藥品接

37、觸，以免受腐蝕。防熱：顯微鏡不要放在日光曝曬，也不要放在靠近火爐、電爐或熱氣片的地方。防震：從顯微鏡箱或柜內(nèi)取出或放進(jìn)顯微鏡時(shí)，應(yīng)一手提鏡劈，另一手托鏡座，讓顯微鏡豎立，防止目鏡從鏡筒中脫落。保持清潔：顯微鏡的目鏡、物鏡、聚光鏡和反光鏡等光學(xué)部件必須保持清潔，防止長霉。鏡檢時(shí)通過轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡、物鏡及調(diào)整焦距等措施判定灰塵或污臟所在的部位，如附有灰塵，則先用洗耳球?往灰塵，或用擦鏡紙輕輕擦往。若有污臟，用擦鏡紙或脫脂棉球沾無水乙醚7 份和無水乙醇3 份的混合液輕輕擦拭。然后用擦鏡紙擦干。顯微鏡的金屬油漆部件和塑料部件，可用軟布沾中性洗滌劑進(jìn)行擦拭，不要使用有機(jī)溶劑。請回答問題：（1）用來調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱

38、的結(jié)構(gòu)是 77 遮光器遮光器和 99 反光鏡反光鏡（2）取顯微鏡時(shí)，握鏡的部位是 1313 鏡臂鏡臂（3）轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)使得鏡筒的升降范圍很小的結(jié)構(gòu)是 1212 細(xì)準(zhǔn)焦螺旋細(xì)準(zhǔn)焦螺旋（4）安放好顯微鏡后，轉(zhuǎn)動(dòng) 1111 粗準(zhǔn)焦螺旋粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒上升，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn) 66 通光孔通光孔，轉(zhuǎn)動(dòng) 77 遮光器遮光器，使最大光圈對準(zhǔn)通光孔，轉(zhuǎn)動(dòng) 99 反光鏡反光鏡，使光線反射入鏡筒（5）固定好玻片標(biāo)本后，雙手同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng) 1111 粗準(zhǔn)焦螺旋粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降至接近玻片標(biāo)本為止，此時(shí)眼睛一定要從側(cè)面注視 44 物鏡物鏡下圖為一普通光學(xué)顯微鏡構(gòu)造圖，請據(jù)圖回答：微生物形態(tài)觀察-顯微鏡使用和維

39、護(hù) 學(xué)習(xí)情境設(shè)計(jì)方案學(xué)習(xí)領(lǐng)域課程名稱微生物形態(tài)觀察總學(xué)時(shí)72學(xué)習(xí)情境名稱顯微鏡使用和維護(hù)使用學(xué)時(shí)2學(xué)習(xí)目標(biāo)1.知識目標(biāo)l 掌握顯微鏡的構(gòu)造l 掌握顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)l 掌握光學(xué)顯微鏡的成像原理l 掌握顯微鏡的性能l 掌握顯微鏡的使用操作及注意事項(xiàng)2.能力目標(biāo)專業(yè)能力l 能夠正確做觀察前的準(zhǔn)備l 能夠正確使用低倍鏡觀察l 能夠熟練地掌握用高倍鏡觀察l 夠熟練地掌握用油鏡觀察方法能力l 閱讀操作標(biāo)準(zhǔn)的能力l 動(dòng)手實(shí)施能力l 創(chuàng)新能力l 自主學(xué)習(xí)新技術(shù)、新知識的能力l 分析問題、解決問題的能力社會(huì)能力l 團(tuán)隊(duì)工作能力。l 與人溝通能力。l 工作安全和保護(hù)能力3.素質(zhì)目標(biāo)l 培養(yǎng)規(guī)范意識l 樹立嚴(yán)謹(jǐn)、科

40、學(xué)的態(tài)度l 加強(qiáng)安全意識教學(xué)內(nèi)容及組織過程教學(xué)方法l 1.顯微鏡觀察標(biāo)本前的準(zhǔn)備l 2.利用顯微鏡低倍鏡觀察l 3.利用顯微鏡高倍鏡觀察l 4.利用顯微鏡油鏡觀察宏觀教學(xué)法：引導(dǎo)文教學(xué)法任務(wù)組織（5分鐘）分配任務(wù)（發(fā)放生產(chǎn)指令），發(fā)放引導(dǎo)文；組織幾個(gè)學(xué)習(xí)小組；每組各選出一名組長講述法、頭腦風(fēng)暴，參觀法、引導(dǎo)問題法、文字處理標(biāo)識、事故案例法任務(wù)策劃（10分鐘）根據(jù)各自學(xué)習(xí)，通過討論等方式，確定顯微鏡使用和維護(hù)方案。討論法、可視化報(bào)告法、互動(dòng)交流教學(xué)法產(chǎn)品試制（100分鐘）根據(jù)確定方案，教師參與實(shí)施顯微鏡使用和維護(hù)；在方案中要注重與實(shí)際生產(chǎn)相結(jié)合，整個(gè)過程要模擬實(shí)驗(yàn)室車間檢驗(yàn)菌種整個(gè)過程。這個(gè)過程

41、中師生共同分析、解決使用顯微鏡過程中遇到的問題。角色扮演法、小組合作、取長補(bǔ)短法、仿真訓(xùn)練法任務(wù)評審（10分鐘）各組成員對不同情況不同階段對應(yīng)的操作措施進(jìn)行評價(jià)；各組成員對任務(wù)的組織、策劃、產(chǎn)物的觀測等過程進(jìn)行自評和互評；教師就各組成員在不同階段的個(gè)方面的表現(xiàn)情況進(jìn)行評價(jià)；教師根據(jù)使用顯微鏡過程中的情況提出問題，學(xué)生通過討論方式嘗試給出解釋方法，教師總結(jié)歸納解決方法。交互評價(jià)法、旋轉(zhuǎn)交換討論法、教師歸納法教學(xué)環(huán)境與資源：1.生物發(fā)酵實(shí)訓(xùn)室2.精品課網(wǎng)站資源教師知識與能力要求：l 掌握顯微鏡的使用方法，光學(xué)原理以及結(jié)構(gòu)的名稱，能夠示范性的操作，講解使用的注意事項(xiàng)。l 掌握顯微鏡的維護(hù)方法，能夠?qū)︼@微鏡出現(xiàn)的問題進(jìn)行檢修和維護(hù)。l 具備閱讀操作標(biāo)準(zhǔn)的能力。l 具有觀察力及課堂的把控能力l 具有與學(xué)生合作，溝通的能力。學(xué)生知識與能力準(zhǔn)備：l 具備查閱資料等基本技能l 閱讀生產(chǎn)工藝能力l 一定的動(dòng)手能力l 一定自學(xué)能力和分析問題能力成果形式：賴氨酸的菌種擴(kuò)大培養(yǎng)及菌種保藏方案?？己嗽u價(jià)：評價(jià)方式：過程性評價(jià)作業(yè)