乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV-DNA的相關(guān)性分析

1、乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV-DNA的相關(guān)性分析    摘要：目的：分析乙型肝炎病毒（HBV）血清學(xué)檢測(cè)出現(xiàn)的組合模式與HBV-DNA定量之間的關(guān)系，而為臨床診斷、治療、預(yù)后提供有價(jià)值的判斷標(biāo)準(zhǔn)。方法：1 483例血清標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法對(duì)其免疫學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，并采用實(shí)時(shí)熒光定量（PCR-熒光探針?lè)ǎz測(cè)血清HBV-DNA。結(jié)果：473例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)的標(biāo)本，其HBV-DNA檢出率為99.57%（471例），平均HBV-DNA拷貝數(shù)為5.82×6；504例HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)

2、的標(biāo)本，其HBV-DNA檢出率為42.46%（214例），平均HBV-DNA拷貝數(shù)為1.85×5；428例HBsAg(+)HBcAb(+)的標(biāo)本其HBV-DNA檢出率為40.18%（172例），平均HBV-DNA拷貝數(shù)為1.05×4；58例HBsAg(+)HBeAg(+)的標(biāo)本其HBV-DNA檢出率為94.82%（55例），平均HBV-DNA拷貝數(shù)為3.34×3。結(jié)論：熒光定量PCR檢測(cè)血清HBV-DNA準(zhǔn)確靈敏，可以檢測(cè)HBV的真實(shí)感染和復(fù)制狀態(tài)，結(jié)合；乙型肝炎病毒的血清標(biāo)志物檢測(cè)，對(duì)于乙型肝炎臨床診斷，治療方案的選擇，療效觀察及預(yù)后判斷有極其重要的作用。

3、60;   關(guān)鍵詞：肝炎病毒/乙型；乙型肝炎標(biāo)志物；熒光定量PCR；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）     乙型肝炎病毒是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的傳染病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，約有12億人為乙型肝炎病毒攜帶者，每年100萬(wàn)人死于乙型肝炎1。乙型肝炎血清標(biāo)志物檢測(cè)是目前診斷乙型肝炎最常用的指標(biāo)，但它主要反映人體對(duì)乙型肝炎免疫反應(yīng)狀態(tài)，但不能直接反應(yīng)HBV在患者體內(nèi)的具體含量，因其價(jià)格低廉，操作方便快捷，現(xiàn)仍是檢測(cè)乙型肝炎的常用方法，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，熒光定量PCR技術(shù)廣泛用于臨床的診斷與治療，它是直接檢測(cè)血清中的乙型肝炎病毒D

4、NA，是反應(yīng)人體內(nèi)乙型肝炎病毒復(fù)制的直接指標(biāo)，也是最特異，最靈敏的指標(biāo)，反映了乙型肝炎病毒數(shù)量不同在患者肝臟中的復(fù)制情況2。通過(guò)檢測(cè)乙型肝炎患者血清病毒含量和血清標(biāo)志物，將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，掌握他們之間的變化規(guī)律，以探討該方法的實(shí)用性及臨床應(yīng)用價(jià)值。1 資料與方法1.1  一般資料：乙型肝炎患者血清標(biāo)本來(lái)源于陜西省榆林市第一醫(yī)院2006年3月2009年3月的門(mén)診及住院患者，共1 483份。男925例，女558例，年齡177歲，平均39歲，臨床診斷符合2000年全國(guó)傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議診斷標(biāo)準(zhǔn)3。1.2  儀器與試劑：血清標(biāo)志物儀器為RT-2100酶標(biāo)儀測(cè)定，試劑由上?？迫A生物股份

5、有限公司提供；HBV-DNA檢測(cè)儀器DA-7600熒光定量擴(kuò)增儀由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供；試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。1.3  方法：乙型肝炎血清標(biāo)志物采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），嚴(yán)格按操作說(shuō)明檢測(cè)，結(jié)果由酶標(biāo)儀測(cè)定，每一批標(biāo)本均設(shè)陰陽(yáng)性和臨界對(duì)照，熒光定量PCR測(cè)定HBV-DNA嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)和儀器廠家提供的方法進(jìn)行。每批試驗(yàn)設(shè)立4個(gè)HBV-DNA標(biāo)準(zhǔn)品系列濃度，分別為1×104 IU/ml、1×105 IU/ml、1×106 IU/ml、1×107 IU/ml，其檢測(cè)靈敏度為1×102 

6、 IU/ml，嚴(yán)格按照Kword等提出的防污染措施進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作4。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：定量結(jié)果采用求算術(shù)平均值的方法計(jì)算HBV-DNA平均拷貝數(shù)，組間樣本率比較采用u檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用t檢驗(yàn)，最后用SPSS軟件統(tǒng)計(jì)處理。2 結(jié)果血清標(biāo)志物經(jīng)ELISA所分的模式：見(jiàn)表1。表1  血清標(biāo)志物經(jīng)ELISA所分模式組別例數(shù)（n=1 483）HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)(大三陽(yáng))473HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)（小三陽(yáng)）504HBsAg(+)HBcAb(+)428HBsAg(+)HBeAg(+)58HBsAg(-)HBsAb(-)HBeAg

7、(-)HBeAb(-)HBcAb(+)20表1結(jié)果顯示：標(biāo)志乙型肝炎感染期的血清HBsAg、HBeAg、HBcAb、均陽(yáng)性的標(biāo)本（大三陽(yáng)），473例中PCR-熒光探針?lè)z測(cè)HBV-DNA幾乎全為陽(yáng)性（陽(yáng)性率為99.57），標(biāo)志長(zhǎng)期HBV攜帶者的血清HBsAg、HBeAb、HBcAb（俗稱(chēng)小三陽(yáng)）的504例標(biāo)本中PCR-熒光探針?lè)z測(cè)HBV-DNA有214例為陽(yáng)性（陽(yáng)性率為42.46）其余HBsAg陰性的常見(jiàn)血清標(biāo)志物模式HBV-DNA有10%陽(yáng)性。這些說(shuō)明依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒的感染及治療情況并不完全可靠。通過(guò)表12可以找出乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物和HBV-DNA數(shù)量之間的相關(guān)性。

8、表2  乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物和HBV-DNA數(shù)量之間的相關(guān)性組別項(xiàng)目大三陽(yáng)（例）小三陽(yáng)（例）HBsAg(+)HBcAb(+)（例）HBsAg(+)HBeAg(+)（例）HBsAg(-)HBsAb(-)HBeAg(-)HBeAb(-)HBcAb()（例）血清標(biāo)志物4735044285820HBV-DNA47121417255陽(yáng)性率(%)HBV-DNA含量×6×5×4×3×3P值3 討論HBV-DNA含量是診斷乙型肝炎病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接和可靠依據(jù)，血清HBV-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，真實(shí)的反映了乙型肝炎病毒感染，復(fù)制及病

9、程變化，乙型肝炎血清標(biāo)志物是HBV感染的常用檢測(cè)手段，由于HBV的表達(dá)和機(jī)體免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱受多種因素影響。從本組實(shí)驗(yàn)表明：乙型肝炎患者血清HBV標(biāo)志物不同，其HBV-DNA陽(yáng)性率有差異。大三陽(yáng)，即HBsAg、HBeAg、HBcAb均陽(yáng)性的患者中，HBV-DNA陽(yáng)性率最高，達(dá)99.57%：其次HBsAg、HBeAg陽(yáng)性的患者，HBV-DNA陽(yáng)性率也為94.82%；然后是小三陽(yáng)HBsAg、HBeAb、HBcAb均陽(yáng)性的患者中HBV-DNA陽(yáng)性率為42.46%，再下來(lái)是HBsAg、HBcAb陽(yáng)性的患者。說(shuō)明HBeAg陽(yáng)性是病毒復(fù)制活躍的標(biāo)志，結(jié)果顯示HBeAg陽(yáng)性者HBV-DNA含量明顯高于陰性者，

10、而陰性者中仍有HBV-DNA陽(yáng)性（42.46%）說(shuō)明即使HBeAg轉(zhuǎn)陰HBV-DNA復(fù)制并不一定停止，提示HBV-DNA復(fù)制處于較低水平，這種情況可能與前C區(qū)變異有關(guān)，部分患者仍有傳染性。所以對(duì)HBeAg陰性的患者如轉(zhuǎn)氨酶異常應(yīng)及時(shí)進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)，這樣有助于乙型肝炎患者的治療方案選擇及預(yù)后判斷。從表中數(shù)據(jù)顯示，即使HBsAg為陰性的情況下也不能完全排除乙型肝炎的感染，主要原因是患者處于感染初期或低水平的HBV感染，導(dǎo)致血清標(biāo)志物消失或濃度偏低，也可能是由于編碼HBsAg的HBV S區(qū)基因發(fā)生點(diǎn)突變所致，使得ELISA法不能測(cè)出乙型肝炎標(biāo)志物。綜上分析表明：?jiǎn)渭円揽恳倚透窝籽鍢?biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果來(lái)進(jìn)行診斷和判斷病情是不夠的，他只能反映機(jī)體對(duì)乙型肝炎的免疫應(yīng)答狀況，而熒光定量PCR可以定量檢測(cè)HBV-DNA的濃度，靈敏性高，特異性強(qiáng)，更能清楚地反映乙型肝炎患者的病毒活動(dòng)程度，真實(shí)地反映HBV的感染和復(fù)制情況，所以HBV-DNA檢測(cè)在臨床診斷，藥物療效評(píng)價(jià)，病程判斷等方面具有十分重要的臨床價(jià)值。4 參考文獻(xiàn)1 劉樹(shù)林.PCR檢測(cè)HBV-DNA與HBV血清標(biāo)志物常見(jiàn)模式和pres2相互關(guān)系研究J.重慶醫(yī)學(xué),2001,30(2):100.2 李