內(nèi)鏡超聲、表皮生長因子受體、轉(zhuǎn)化生長因子β1受體檢查在大腸癌

1、內(nèi)鏡超聲、表皮生長因子受體、轉(zhuǎn)化生長因子1受體檢查在大腸癌診斷中的價(jià)值【摘要】目的研究術(shù)前內(nèi)鏡超聲檢查(EUS)及表皮生長因子受體(EGFR)、轉(zhuǎn)化生長因子1受體(TGF?R1)表達(dá)在大腸癌術(shù)前分期診斷中的價(jià)值。方法對(duì)35例大腸癌患者進(jìn)行了EUS，并對(duì)其活檢組織用免疫組化法檢測(cè)了EGFR、TGF-R1的表達(dá)。結(jié)果EUS診斷大腸癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移準(zhǔn)確率為77，術(shù)前TNM分期與術(shù)后病理Dukes分期對(duì)照，準(zhǔn)確率為74。35例中EGFR表達(dá)陽性17例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，分別為80，25(P0.01)。TGF-R1的陽性表達(dá)為54，并與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)性(P0.05)

2、，與大腸癌Dukes分期存在負(fù)相關(guān)性(P0.05)。與術(shù)后病理對(duì)照，EUS及EGFR、TGF-R1在大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面的判斷是一致的。結(jié)論EGFR、TGFR1均是可反映大腸癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。將兩種受體的檢測(cè)與EUS結(jié)合起來，對(duì)目前尚不理想的術(shù)前TNM分期是一個(gè)有益的補(bǔ)充。【關(guān)鍵詞】大腸癌；內(nèi)鏡超聲檢查；表皮生長因子受體；轉(zhuǎn)化生長因子1受體Diagnosis of colorectal cancer: roles of endoscopic ultrasonography and assays of epidermal growth factor receptor transforming

3、growth factorbeta type receptorZHAI Hongtao（Department of Surgery, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034,China）ZHANG Qilian（Department of Surgery, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034,China）ZHAI Xiaomei（Department of Surgery, First Hospital, Beijing Medical

4、 University, Beijing 100034,China）【Abstract】 Objective The roles of endoscopic ultrasonography (EUS) and assays of epidermal growth factor receptor (EGFR) and transforming growth factor beta type receptor (TGFR1) in diagnosing colorectal cancer was evaluated. Methods EUS was exercised on 35 patients

5、 with colorectal cancer. The biopsied tissues were assessed for expressions of EGFR and TGFR1 with immunohistochemistry. Results With EUS the diagnostic accuracy for lymphatic metastasis fell in 77 percent, while the percentage of accuracy of staging with preoperative TNM standards as compared with

6、postoperative Dukes was 74. EGFR expressed positively in 17/35 cases with a higher positivity in those who had lymphatic metastasis than those had not (being 80 and 25 respectively, P0.01).Whereas TGFR1 positive expression was found in 54 percent of individuals with a negative correlation (P 0.05) i

7、n terms of lymphatic metastasis and Dukes staging (P 0.05). With regard to predicting colorectal lymphatic metastasis the findings of EUS, EGFR and TGFR1 were in accordance with that of pathology. Conclusion Since EGFR and TGFR1 are the criteria capable of standing for the biobehaviour of colorectal

8、 cancer, combination of these assessments with EUS may be a supplement to the imperfect TNM staging.【Key words】 Colorectal carcinoma; Endoscopic ultrasonography ; Epidermal growth factor receptor ;Transforming growth factor beta type receptor術(shù)前明確原發(fā)癌腫的病變范圍，判斷淋巴結(jié)是否受累、有無遠(yuǎn)隔臟器轉(zhuǎn)移，了解腫瘤生物學(xué)特性，有助于制定和選擇合理的治療方案

9、，判斷預(yù)后。內(nèi)鏡超聲檢查術(shù)（endoscopicultrasonography,EUS）近年來越發(fā)廣泛的應(yīng)用于消化道腫瘤的術(shù)前分期診斷，對(duì)手術(shù)方式及綜合治療的選擇有重要意義。既往研究發(fā)現(xiàn)表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，而腫瘤細(xì)胞失去對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子(transforminggrowthfactor?,TGF?）的反應(yīng)性在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也具有重要作用1,2。本課題研究了上述兩種受體同時(shí)在大腸癌活檢標(biāo)本中的表達(dá)情況，并與術(shù)前EUS結(jié)果比較，探討以上各項(xiàng)檢查相結(jié)合在腫瘤的術(shù)前分期診斷中的作用。表1 各種病理特征與內(nèi)鏡

10、超聲檢查診斷正確例數(shù)對(duì)照病理特征例數(shù)EGFR淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性2015320陽性153066Dukes分期A期84220B期1211100C、D期153066注：EUS：內(nèi)鏡超聲檢查 表2大腸癌病理特征與EGFR的關(guān)系病理特征例數(shù)TGFR1淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性205555陽性1511301Dukes分期A期84211B期121344C、D期1511301注：EGFR：表皮生長因子受體;EGFR與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有等級(jí)正相關(guān)性；EGFR與大腸癌Dukes分期有等級(jí)正相關(guān)性 表3大腸癌病理特征與TGFR1的關(guān)系病理特征例數(shù)EUS診斷正確例數(shù)局部浸潤限于壁內(nèi)117侵及全層2424淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性2016陽性15

11、11Dukes分期A期85B期1210C、D期1511大體類型(局部分型)潰瘍型1915浸潤型66腫塊型1010注：TGFR1：轉(zhuǎn)化生長因子1受體；TGFR1與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有等級(jí)負(fù)相關(guān)性；TGFR1與大腸癌Dukes分期有等級(jí)負(fù)相關(guān)性資料與方法臨床資料：1996年5月至1997年7月，共對(duì)35例大腸癌進(jìn)行了研究。男20例，女15例，年齡2477歲，平均58歲。此35例術(shù)前行EUS，鉗取腫瘤組織34塊進(jìn)行EGFR及TGF?R1測(cè)定。另30例因腹瀉、大便習(xí)慣改變、血便而行腸鏡檢查結(jié)果正常者，取其正常大腸粘膜12塊，作正常對(duì)照，檢測(cè)EGFR、TGF?R1。男18例，女12例，年齡2073歲,平均

12、56歲。方法：所用超聲內(nèi)鏡為OlympusCFUM?3,CFUM?20型。根據(jù)病變位置及類型選用水囊法與充水法兩種檢查方法。將活檢組織10甲醛固定24h，常規(guī)脫水，石蠟包埋后連續(xù)切片，切片厚度5m，用LSAB法檢測(cè)EGFR、TGF?R1。每批染色均設(shè)陽性及陰性對(duì)照。判斷標(biāo)準(zhǔn)：EUS腫瘤分期，根據(jù)Tio1996年所建議EUS對(duì)大腸癌的臨床分期，T分期為：Tis：原位癌，癌組織限于上皮層或侵犯固有層（粘膜層內(nèi)）；T1:腫瘤侵犯未超越粘膜下層；T2:腫瘤侵犯達(dá)肌層；T3:腫瘤侵犯超出肌層達(dá)漿膜下或無腹膜覆蓋的結(jié)腸或直腸周圍組織；T4:腫瘤穿過內(nèi)臟腹膜或直接侵犯其它器官、結(jié)構(gòu)3。EUS對(duì)淋巴結(jié)良惡性區(qū)

13、分標(biāo)準(zhǔn)為：腫大淋巴結(jié)呈低回聲，圓形，邊界清楚者為惡性；回聲強(qiáng)，呈橢圓形，邊界模糊者為良性4。EUS對(duì)N分期標(biāo)準(zhǔn)：N0：無局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；N1：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：M0：無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；M1：遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,肝轉(zhuǎn)移和(或)腹膜播散。其分期標(biāo)準(zhǔn)為：1期：T1N0M0，T2N0M0；2期：T3N0M0，T4N0M0；3期：任何T，N1M0；4期：任何T，N，M11。以上四期與病理Dukes分期(A期：癌僅限于腸壁內(nèi)；B期：浸潤至腸壁外；C期：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；D期：有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)分別相對(duì)應(yīng)。免疫組化結(jié)果：陰性：腫瘤細(xì)胞均不著色；弱陽性（）：著色腫瘤細(xì)胞數(shù)2/3。統(tǒng)計(jì)方法:用SPSS/PC統(tǒng)計(jì)軟件,進(jìn)行2檢驗(yàn)；S

14、pearman等級(jí)相關(guān)性分析。結(jié)果EUS對(duì)大腸癌侵犯深度的判斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期的判斷見表1；EGFR表達(dá)與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期關(guān)系見表2；TGFR1表達(dá)與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期關(guān)系見表3。EUS對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移判斷正確率為77，Dukes討論分期診斷正確率為74。EGFR的表達(dá)與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有正相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)0.9020,P0.05)。EGFR與大腸癌Dukes分期等級(jí)正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)0.6728,P0.05)。EGFR與TGF?R1在大腸癌中表達(dá)成負(fù)相關(guān)。TGF?R1與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有負(fù)相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)0.6471,P0.01)。TGF?R1與大腸癌Du

15、kes分期有負(fù)相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)0.4170，P 0.05)。與術(shù)后病理結(jié)果相對(duì)比，術(shù)前EUS及EGFR、TGF?R1檢測(cè)結(jié)果都能較正確地反映大腸癌N分期，在這一點(diǎn)上三者是一致的。1.超聲內(nèi)鏡插入腔內(nèi)時(shí)可以利用光學(xué)系統(tǒng)對(duì)腔的內(nèi)壁進(jìn)行觀察，同時(shí)利用超聲系統(tǒng)對(duì)腔壁及鄰近組織、器官進(jìn)行超聲檢查,所以超聲內(nèi)鏡具有內(nèi)鏡和超聲兩種功能，彌補(bǔ)了兩者相互之不足，提高了診斷能力。直到EUS的出現(xiàn)才使腫瘤術(shù)前TNM分期成為可能。惡性腫瘤在超聲下表現(xiàn)為不規(guī)則低回聲，依據(jù)正常結(jié)構(gòu)受到破壞的層次為腫瘤的浸潤深度的理論,對(duì)一般腫瘤浸潤深度判斷的準(zhǔn)確率可達(dá)80以上。病理對(duì)照研究表明，EUS判斷腫瘤浸潤深度過深與腫瘤深處炎癥反

16、應(yīng)有關(guān)，目前超聲影像還難以區(qū)分腫瘤浸潤與炎癥反應(yīng),這些病例一般是潰瘍型癌，本研究中潰瘍型癌的術(shù)前EUS檢查T分期正確率為79，而浸潤型癌和腫塊型癌的EUS全部正確，究其原因均與潰瘍型癌引起的深部炎癥有關(guān)。判斷浸潤深度過淺可能與腫瘤的微小浸潤有關(guān)。作為一種影像學(xué)檢查手段，當(dāng)淋巴結(jié)的微小浸潤尚未引起淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)改變時(shí)，還不能為EUS所發(fā)現(xiàn)，而且淋巴結(jié)的炎癥有時(shí)也很難與癌轉(zhuǎn)移鑒別，本研究中EUS判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移假陽性的4例中有3例術(shù)后病理結(jié)果為淋巴結(jié)炎性腫大。另外，由于EUS穿透力差，使用7.5mHz探頭，最大穿透力僅10cm，因此，對(duì)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否仍需進(jìn)行CT或體表超聲等檢查。2.EGFR廣泛分布于正常

17、的哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞表面，EGFR氨基酸排列順序與癌基因CerbB2產(chǎn)物相似，EGFR的表達(dá)和激活與許多癌前病變和惡性疾病有關(guān)。目前有許多證據(jù)表明EGFR在腫瘤的惡性增殖中起一定作用1。在一些細(xì)胞中EGFR在TGF?及EGF的作用下激活，可以誘導(dǎo)基質(zhì)蛋白的產(chǎn)生和分泌。EGFR通過對(duì)細(xì)胞骨架的重構(gòu)、粘附、移動(dòng)、表達(dá)及蛋白脂酶的活化等多種作用，可能在腫瘤的轉(zhuǎn)移中起到重要的作用。本項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在術(shù)前活檢標(biāo)本中EGFR的表達(dá)與腫瘤浸潤深度無相關(guān)性，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中其陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，分別為80(12/15),25(5/20)，差異有顯著性意義（P0.01），說明EGFR高表達(dá)的原發(fā)癌更易發(fā)

18、生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。作為正常對(duì)照的30例正常大腸粘膜標(biāo)本用同樣方法檢測(cè)EGFR，無一例陽性，而腫瘤組陽性表達(dá)48(17/35),兩者相比，差異有顯著性意義（P0.01）。3.一般而言，對(duì)上皮細(xì)胞TGF是一種細(xì)胞生長的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,對(duì)人和動(dòng)物的多種類型上皮細(xì)胞及其所發(fā)生的腫瘤增殖多表現(xiàn)為抑制作用2。TGF?的分泌對(duì)周圍組織還起了旁分泌作用,包括:(1)刺激成纖維細(xì)胞的增殖和膠原的合成；(2)抑制周圍正常細(xì)胞的增殖；(3)抑制淋巴細(xì)胞的對(duì)腫瘤的免疫作用,從而為自身癌細(xì)胞的生長篩選一個(gè)有利的環(huán)境。如癌細(xì)胞對(duì)自分泌TGF?的抑制作用不敏感,則TGF?往往僅發(fā)揮其旁分泌的作用，從而間接地促進(jìn)腫瘤的生長、浸潤。

19、在TGF?抵抗的機(jī)制中最有可能的是丟失TGF?受體5。我們檢測(cè)了35例大腸癌組織及30例正常大腸粘膜TGF?R1的表達(dá)情況。在大腸癌組織中TGF?R1表達(dá)陽性者54（19/35），30例正常大腸粘膜標(biāo)本均有的TGFR1表達(dá)，差異有顯著性意義（P0.05）。所以，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果支持大腸癌組織逃脫TGF?R1對(duì)其生長的抑制與TGFR1的丟失有關(guān)。此外將TGF?R1在大腸癌標(biāo)本中的表達(dá)情況與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期之間作相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)TGF?R1與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)性（P0.05），與大腸癌Dukes分期間也存在負(fù)相關(guān)性（P0.05）。本研究同時(shí)檢測(cè)了此35例大腸癌標(biāo)本的EGFR、T

20、GF?R1表達(dá)情況。這些結(jié)果表明EGFR及TGF?R1的受體在大腸癌組織中與正常大腸粘膜中的受體表達(dá)明顯不同，兩者與大腸癌的發(fā)生發(fā)展有相關(guān)性(P0.05)。本研究中對(duì)35例大腸癌患者術(shù)前同時(shí)進(jìn)行EUS及EGFR、TGF?R1檢測(cè)，與術(shù)后病理結(jié)果相比較，結(jié)果表明以上三者都能較正確地反映大腸癌分期，在這一點(diǎn)上三者是一致的，將術(shù)前檢測(cè)EGFR、TGF?R1與EUS結(jié)合起來，對(duì)目前尚不理想的術(shù)前TNM分期是一個(gè)有益的補(bǔ)充。作者單位：翟洪濤（100034北京醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院外科）張齊聯(lián)（100034北京醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院外科）年衛(wèi)東（100034北京醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院外科）梁晉雨（100034北京醫(yī)科大學(xué)第一