E-選擇素介導(dǎo)的大鼠腦缺血再灌注后繼發(fā)炎癥損傷的實驗干預(yù) 醫(yī)學(xué)論文

1、    E-選擇素介導(dǎo)的大鼠腦缺血再灌注后繼發(fā)炎癥損傷的實驗干預(yù) 醫(yī)學(xué)論文              本文由中國論文范文收集整理。                作者：盛文利， 李銳， 許曉偉， 王彥莉， 黃如訓(xùn)， 曾進勝【摘要】   【目的】通過在大鼠腦缺血后再灌注期間使用左旋精氨酸干預(yù)

2、黏附分子E-選擇素的表達從而減輕炎癥損傷?！?方法 】 先后復(fù)制易卒中型腎血管性高血壓大鼠（RHRSP）模型和右側(cè)大腦中動脈缺血2 h再灌注（MCAO/R）線栓模型(n=192)，并設(shè)立MCAO假手術(shù)組(n=48)。入選MCAO大鼠隨機分為3個組，分別于缺血早期給予左旋精氨酸（n=72）、右旋精氨酸（n=48）和等體積生理鹽水(n=72)。測定缺血側(cè)腦組織NO代謝物含量、MPO活性、間接免疫熒光染色和RT-PCR方法檢測E-選擇素表達?！窘Y(jié)果】 左旋精氨酸組缺血后至再灌注0、4和8 h后NO代謝物含量（52±12 、81±34、131±27）高于相應(yīng)時間段的鹽水組

3、（43±14、40±17、105±39）和右旋精氨酸組（38±13、34±16、109±29）。左旋精氨酸組大鼠缺血及再灌注早期E-選擇素表達及MPO活性低于右旋精氨酸組和鹽水組?！窘Y(jié)論】 大鼠腦缺血早期使用左旋精氨酸可以增加缺血區(qū)域NO含量，減少缺血再灌注早期E-選擇素的表達和中性粒細胞的浸潤。 【關(guān)鍵詞】   腦梗死； E-選擇素； 左旋精氨酸（L-arg）； 一氧化氮； 易卒中型腎血管性高血壓大鼠(RHRSP)    Abstract:【Objective】 To evaluate whe

4、ther L-arginine could decrease E-selelctin expression and reduce inflammation damage during focal cerebral ischemia and reperfusion of the rat.【Methods】 Middle cerebral artery occlusion and reperfusion( MCAO/R) model according Longas method and sham operation model were made in the stroke-prone reno

5、vascular hypertensive rats(RHRSP). MCAO/R rats were randomly divided into 3 groups receiving L-argnine(n=72), D-arginine (n=48) or 0.9% saline vehicle(n=72). Nitrite(NO2-) ，nitrate(NO3-) and  myeloperoxidase activity of ischemic brain tissue were detected, and the expression of E-selectin was m

6、easured by immunofluoresecent staining and RT-PCR. 【Results】 At 0 h, 4 h and 8 h later of reperfusion, Nitrite(NO2-) and nitrate(NO3-) detected in the L-arginine of MCAO group（52±12, 81±34, 131±27） were higher than those in saline（43±14, 40±17, 105±39） or D-arginine（38&

7、#177;13, 34±16, 109±29） of MCAO groups. During the earlier time of ischemia/reperfusin, the expression of E-selectin ,and myeloperoxidase activity in the groups of MCAO with L-arginine infusions , downregulated in contrast to the other two MCAO groups. 【Conclusions】 L-arginine administered

8、 in the early stage of ischemia can upregulate the NO, which can inhibit the expression of E-selectin.    Key words: cerebral infarction； E-selectin； L-arginine（L-arg）； nitric oxide (NO)； stroke-prone renovascular hypertensive rats (RHRSP)    腦卒中是 目前 威脅人類健康的三大疾病之一，具有發(fā)病率

9、高、致殘率高、死亡率高的特點，給患者本人、其家庭和 社會 帶來沉重負擔(dān)。目前公認的缺血性腦卒中急性期有效的 治療 方法是時間窗內(nèi)溶栓治療，盡早恢復(fù)缺血區(qū)血流，減輕腦缺血損傷。但是缺血損傷是一個多因素相互作用、相互 影響 的病理生理過程。除了缺血本身，缺血導(dǎo)致的血液流變紊亂、凝血機制障礙以及白細胞浸潤引起的炎癥反應(yīng)等均參與了組織損傷。再灌注血流帶來氧氣和葡萄糖，可以緩解缺血損傷，但卻伴隨著更為嚴重的白細胞阻塞血管及浸潤組織現(xiàn)象，使得組織損傷加重，產(chǎn)生一系列繼發(fā)事件。缺血后，尤其伴隨再灌注加重的炎癥反應(yīng),特別是血管內(nèi)流動的白細胞黏附于血管內(nèi)皮繼而滲出到血管外組織，對已缺血組織可造成二次損傷（sec

10、ondary injury）。在炎癥中，活化的內(nèi)皮細胞表面表達E選擇素（E-selectin）參與白細胞在血管內(nèi)的慢速滾動，便于隨后的黏附和滲出活動。已有實驗顯示使用E-選擇素抗體抑制E-選擇素表達可減輕白細胞的黏附和浸潤，增加缺血區(qū)腦血流量和減小腦梗死體積 。本實驗旨在通過在大鼠腦缺血再灌注過程中補充一氧化氮（nitric oxide,NO）前體物質(zhì)左旋精氨酸（L-arginine,L-arg）增加組織中NO，觀測E-選擇素的表達和反映中性粒細胞浸潤程度的髓過氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）活性的變化，探討缺血后NO對E-選擇素及炎癥反應(yīng)的影響，為減輕腦缺血再灌注時的炎癥

11、損傷提供新途徑。    1   材料與方法     1.1   動物模型制作及分組    質(zhì)量80100 g健康雄性SD大鼠(n=192)，按照雙腎雙夾法復(fù)制易卒中型腎血管性高血壓大鼠（stroke-prone renovascular hypertensive rats,RHRSP）模型。選用術(shù)后1012周、無自發(fā)性卒中表現(xiàn)、血壓峰值穩(wěn)定于180 mmHg以上，質(zhì)量為350450 g的RHRSP鼠，采用Longa法制作右側(cè)大腦中動脈缺血再灌注（middle cer

12、ebral artery occlusion and reperfusion，MCAO/R)模型。2 h 后將栓線拔至頸外動脈殘段實現(xiàn)頸內(nèi)動脈完全再灌注。假手術(shù)組大鼠僅將尼龍線插至距頸總動脈分叉處1.0 cm 不入顱腔,術(shù)后2 h 將栓線拔至頸外動脈殘段。選擇MCAO術(shù)后評分13分大鼠隨機分為3組，分別于MCAO術(shù)后5 min 和再灌注5 min 前經(jīng)右側(cè)股靜脈緩慢注射L-arg（BBI公司 AB0205；300 mg/kg；n=72）或者等體積生理鹽水（n=72）或者右旋精氨酸（D-arginine, D-arg，吉而生化公司 GLS A20829；n=48）。4組大鼠均于再灌注0、4、8、12、24、48 h 取標(biāo)本。在手術(shù)結(jié)束麻醉清醒后及處死前按照Longa 5 分制法對大鼠進行行為學(xué)神經(jīng)功能缺損評分。 關(guān)鍵詞:損傷,實驗,干預(yù),選擇,缺血,E-