苦碟子注射液治療貴州小型豬肝纖維化的實驗研究

1、苦碟子注射液治療貴州小型豬肝纖維化的實驗研究 10-08-24 15:20:00 編輯：studa20作者：趙菊花，吳曙光，巫全勝，郭科男，董小君，李術(shù)釵，魏劍林，錢寧【摘要】 目的觀察苦碟子注射液對復(fù)合因素所致的貴州小型豬肝纖維化治療作用。方法貴州小型豬15頭，隨機分為空白組、模型組、治療組3組，分成造模和治療兩個階段。除空白組外的其他2組前8周為造模階段，用40l4橄欖油(0.5 ml/kg)和兔血清(0.5 ml/kg)分別腹腔注射，空白組用橄欖油和生理鹽水(NS)各0.5 ml/kg分別腹腔注射，1周兩次，共8周;治療階段：實驗的第9周開始，治療組給予苦碟子注射液0.8 ml/kg(相

2、當(dāng)苦碟子生藥16g)，其余2組給予NS 0.8 ml/kg，均為每天腹腔注射1次，共28 d。各組分別于實驗?zāi)┨幩绖游锶⊙透谓M織塊，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白蛋白/球蛋白比值(A/G);行HE、Masson染色在光鏡下及透射電鏡觀察肝臟組織病理學(xué)變化，以評價肝臟損傷程度和藥物的治療作用。結(jié)果苦碟子注射液能顯著降低復(fù)合因素所致貴州小型豬肝纖維化動物模型的血清ALT、AST含量(P0.01)，減輕肝損傷引起的ALB降低及A/G比例倒置(P0.05或P0.01);光鏡切片示苦碟子注射液能減輕貴州小型豬肝纖維化模型的肝細(xì)胞變性、壞死

3、，使增生的纖維成分減少，甚至消失。電鏡照片顯示：苦碟子注射液能減輕貴州小型豬肝纖維化模型的肝細(xì)胞損傷，穩(wěn)定質(zhì)膜，使細(xì)胞間質(zhì)中膠原纖維沉積減少。結(jié)論苦碟子注射液對貴州小型豬肝纖維化模型具有顯著的治療作用，其可能的機制還有待進一步研究。 【關(guān)鍵詞】 苦碟子注射液; 貴州小型豬; 肝纖維化; 治療作用肝纖維化(HF)是多種慢性肝病的共同病理基礎(chǔ)，是肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解的不平衡，以致ECM在肝內(nèi)大量沉積形成肝纖維化。HF是肝硬化的早期階段和必經(jīng)階段，早期肝纖維化得到合理的治療，其病理變化是可以逆轉(zhuǎn)，但若病因持續(xù)存在則有25%40%最終可能發(fā)展成不可逆轉(zhuǎn)的肝硬化乃至肝癌13，所以阻斷和逆轉(zhuǎn)

4、肝纖維化已成為慢性肝病治療中的一個關(guān)鍵問題。雖然近十余年來針對肝纖維化發(fā)生的各個環(huán)節(jié)進行抗肝纖維化治療已取得一些進展，但是肝纖維化的治療仍然是目前臨床工作的難點，尚無理想的藥物,中醫(yī)藥治療本病有很好的前景。我們前期工作已從臨床、動物實驗兩方面證實了苦碟子具有確切的活血化瘀功效4，5，并對嚙齒類動物大鼠實驗性肝纖維化有明顯的改善作用6，7，而偶蹄目類動物貴州小型豬各個器官更接近人類器官，本課題組用苦碟子注射液治療貴州小型豬肝纖維化模型，取得較好療效?，F(xiàn)報道如下。1 材料1.1 動物貴州小型豬15頭(雌性7頭,雄性8頭)，體質(zhì)量(2.71.1)kg,普通級，由貴陽中醫(yī)學(xué)院動物實驗研究所提供。實驗前

5、血清谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)白蛋白(ALB)及總蛋白(TP)、白蛋白/球蛋白比(A/G)均正常。飼料由貴州臺農(nóng)飼料有限公司提供。1.2 藥物、試劑及儀器苦碟子注射液由沈陽雙鼎制藥有限公司提供，產(chǎn)品批號041013011，規(guī)格10 ml/支，相當(dāng)200 g生藥制成;CCl4(分析純)由上海三浦化工有限公司生產(chǎn)，批號200303;橄欖油由上?；瘜W(xué)試劑分裝廠生產(chǎn)，批號200217。血清ALT、AST檢測試劑由北京化工廠臨床試劑分廠生產(chǎn)，批號041224;Masson染色液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);兔血清自備，常規(guī)紫外線照射消毒后低溫保存?zhèn)溆?。HITACHI(

6、日立)7020全自動生化分析儀;ReichertJungE型超薄切片機;H600型透射電鏡。2 方法2.1 實驗分組與方法 將15頭貴州小型豬適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機分為3組，即：空白組、模型組、治療組，每組各5頭。造模階段(實驗前8周)：除了空白組以外其他兩組貴州小型豬前8周用40l4橄欖油(0.5 ml/kg)和兔血清(0.5 ml/kg)分別腹腔注射，空白組用橄欖油(0.5 ml/kg)和生理鹽水(NS 0.5 ml/kg)分別腹腔注射，1周兩次，共8周。治療階段：實驗的第9周開始，治療組給于苦碟子注射液0.8 ml/kg(相當(dāng)苦碟子生藥16 g)，其余兩組給于NS 0.8 ml/kg，每天

7、腹腔注射1次，共28 d。所有的動物自由飲水和攝食。各組動物分別于第12周末次注藥后禁食24 h行前腔靜脈采血，收集血清，供血清生化學(xué)檢測;并處死動物，立即在相同部位取肝組織分別固定于10%甲醛液和4%戊二醛鋨酸液，供組織學(xué)和電鏡觀察。2.2 觀察指標(biāo)一般情況觀察;應(yīng)用HITACHI(日立)7020全自動生化分析儀測定血清ALT，AST，ALB，TP，A/G;取肝組織塊用10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟連續(xù)切片，鄰片作HE、Masson染色作光鏡觀察;取肝組織塊用4%戊二醛鋨酸液固定，超薄切片，作電鏡觀察。2.3 統(tǒng)計學(xué)處理所得數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以s表示,用單因素方差分

8、析及組間兩兩比較用Tukey HSD法比較組間差異的顯著性。3 結(jié)果3.1 一般情況整個實驗過程中各組動物均無死亡。空白組：精神佳，活動自如，毛色光滑，飲食量無改變。模型組：精神較差，在注射藥物當(dāng)天喜臥不活動，毛色不光滑，時有厭食嘔吐現(xiàn)象。治療組：在造模階段基本情況同模型組，在進入治療階段后精神尚可，活動量、每餐飲食量較前明顯增多。3.2 體質(zhì)量增長結(jié)果見表1。表1 體質(zhì)量增長情況與空白組比較，* P0.05，* P0.01;與模型組比較，P0.05從表1可見在整個實驗中，空白組體質(zhì)量呈隨齡遞增的上升曲線，模型組從5周開始與空白組有顯著差異(P0.05)，治療組從第6周開始和空白組有差異(P0.05);在實驗的第9周開始，兩組動物體質(zhì)量都呈明顯的上升趨勢，但治療組的動物體質(zhì)量增長較模型組快，兩組之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.3 肝功能情況見表2。表2 各組血清ALT，AST，ALB，TP，A/G的比較與空白組比較，P0.01;與模型組比較，*P0.05，*P0.01;n=5