單分子知識點

1、光漂白(photonic bleaching)是在光照條件下使其發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或是構(gòu)象改變,而失去發(fā)熒光的特性,就是所謂的漂白.它常用于生物體內(nèi)擴散速率常數(shù)的測定.光漂白抗性就是抗光漂白性吧我是這么理解的。下面的是搜索的關(guān)于綠色熒光蛋白_GFP的發(fā)光特性GFP吸收的光譜,最大峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副峰(藍光);發(fā)射光譜最大峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder).GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,因此為熒光素FITC設(shè)計的熒光顯微鏡濾光片組合同樣適用于GFP觀察.盡管450490nm(藍光)是GFP的副吸收峰,但由

2、于長波能量低,細胞忍受能力強,因此更適合于活體檢測.GFP的性質(zhì)GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素(fluorescein)強,特別在450490nm藍光波長下更穩(wěn)定.GFP需要在氧化狀態(tài)下產(chǎn)生熒光,強還原劑能使GFP轉(zhuǎn)變?yōu)榉菬晒庑问?但一旦重新暴露在空氣或氧氣中,GFP熒光便立即得到恢復(fù).而一些弱還原劑并不影響GFP熒光.中度氧化劑對GFP熒光影響也不大,如生物材料的固定,脫水劑戊二酸或甲醛等.GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此更適用于定量測定與分析.但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效

3、果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白.由于GFP熒光是生物細胞的自主功能,熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的.常用的顯微技術(shù)共聚焦顯微鏡原理：共焦顯微鏡Confocal Laser Scanning Microscope(CLSM或LSCM)在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡(Beam Splitter)，將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向，在其焦點上有一個帶有針孔（Pinhole）的擋板，小孔就位于焦點處，擋板后面是一個 光電倍增管（photomultiplier tube，PMT）?？梢韵胂?，探測光焦

4、點前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng)，必不能聚焦到小孔上，會被擋板擋住。于是光度計測量的就是焦點處的反射光強度。其意義是：通過移動透鏡系統(tǒng)可以對一個半透明的物體進行三維掃描。共聚焦顯微鏡能提供無比精確的三維成像，以及對亞細胞結(jié)構(gòu)和動力學(xué)過程的精準測試。 傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源，標(biāo)本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾；激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點掃描，標(biāo)本上的被照射點，在探測針孔處成像，由探測針孔后的光電倍增管（PMT）或冷電耦器件（cCCD）逐點或逐線接收，迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共

5、軛的，焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔，焦平面以外的點不會在探測針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。共聚焦激光掃描顯微（英文Confocal laser scanning microscopy，CLSM，LCSM）是一項高分辨率三維光學(xué)成像技術(shù)1。主要特點在于其光學(xué)分層能力，即獲得特定深度下焦點內(nèi)的圖像。圖像通過逐點采集，以及之后的計算機重構(gòu)而成。因此它可以重建拓撲結(jié)構(gòu)復(fù)雜的物體。對于不透明樣品，可以進行表面作圖，而對于透明樣品，則可以進行內(nèi)部結(jié)構(gòu)成像。內(nèi)部結(jié)構(gòu)成像上，圖像質(zhì)量在單臺顯微鏡中就可以得到極大的提升，因為來自樣品不同深度的信息

6、未被重疊。傳統(tǒng)顯微鏡能“看”到所有能被光投身到地方，而對于共聚焦顯微鏡，只有焦點處的信息被采集。實際上共聚焦激光掃描顯微是通過對焦點深度的控制和高度限制來實現(xiàn)的。共聚焦的原理早在1957年就由美國科學(xué)家馬文明斯基注冊為專利2，但實際上經(jīng)過三十年的時間及相應(yīng)專用激光器的發(fā)展，直至1980年代末這項技術(shù)才成為標(biāo)準技術(shù)。1978年，托馬斯和克里斯托弗克萊默設(shè)計出一套激光掃描程序3。該程序采用激光聚焦的方式逐點掃描物體三維表面，并通過類似于掃描電鏡的計算機化手段生成圖像。這一共聚焦激光掃描顯微設(shè)計首次結(jié)合了激光掃描方法和熒光標(biāo)記的生物樣品三維探測。接下來的數(shù)十年內(nèi)，共聚焦熒光顯微發(fā)展成一項成熟的技術(shù)，

7、尤其受益于阿姆斯特丹大學(xué)（University of Amsterdam），來自海德堡的歐洲分子生物實驗室（European Molecular Biology Laboratory）及其業(yè)界伙伴的共同努力。全內(nèi)反射熒光顯微鏡（total internal reflection fluorescent microscope，TIRFM），利用光線全反射后在介質(zhì)另一面產(chǎn)生衰逝波的特性，激發(fā)熒光分子以觀察熒光標(biāo)定樣品的極薄區(qū)域，觀測的動態(tài)范圍通常在200nm以下。因為激發(fā)光呈指數(shù)衰減的特性，只有極靠近全反射面的樣本區(qū)域會產(chǎn)生熒光反射，大大降低了背景光噪聲干擾觀測標(biāo)的，故此項技術(shù)廣泛應(yīng)用于細胞表面物

8、質(zhì)的動態(tài)觀察。1概念全內(nèi)角反射熒光顯微鏡（total internal reflection fluorescence microscope，TIRFM），利用光線全反射后在介質(zhì)另一面產(chǎn)生衰逝波的特性，激發(fā)熒光分子以觀察熒光標(biāo)定樣品的極薄區(qū)域，觀測的動態(tài)范圍通常在200 nm以下。因為激發(fā)光呈指數(shù)衰減的特性，只有極靠近全反射面的樣本區(qū)域會產(chǎn)生熒光反射，大大降低了背景光噪聲干擾觀測標(biāo)的，能幫助研究者獲得高質(zhì)量的成像質(zhì)量和可靠的觀測數(shù)據(jù)。故此項技術(shù)廣泛應(yīng)用于細胞表面物質(zhì)的動態(tài)觀察。2光學(xué)原理當(dāng)一束光從光密介質(zhì)進入光疏介質(zhì)時，根據(jù)斯涅耳定律一部分光會發(fā)生折射，而一部分光會發(fā)生反射，當(dāng)入射角度不斷增大

9、，折射角也會不斷增大，當(dāng)折射角剛好達到90度時，就發(fā)生了全反射現(xiàn)象。全反射發(fā)生后，折射光有一個臨界狀態(tài)沿著折射面?zhèn)鞑?，這部分光我們稱之為隱失波，其能量在Z軸上呈現(xiàn)指數(shù)衰減。、3技術(shù)分類TIRFM的實現(xiàn)是通過改變激光的入射角來實現(xiàn)的，按技術(shù)TIRF顯微鏡分為兩種：棱鏡型和物鏡型。棱鏡型TIRF顯微鏡采用棱鏡產(chǎn)生衰逝波，并用物鏡收集熒光成像。物鏡型TIRF顯微鏡采用大數(shù)字孔徑物鏡產(chǎn)生衰逝波，同時采用物鏡收集熒光成像。與棱鏡型TIRF顯微鏡相比，物鏡型TIRF的應(yīng)用更為廣泛。近場光學(xué)顯微鏡近場光學(xué)顯微鏡是采用亞波長尺度的探針在距離樣品表面幾個納米的近場范圍進行掃描成像的技術(shù)。如利用孔徑在20-90n

10、m的近場探針在樣品上進行掃描而同時得到分辨率高于衍射極限的形貌像和光學(xué)像的顯微鏡。傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的分辨率受到光學(xué)衍射極限影響，分辨率不超過該波長尺度范圍。與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡不同的是，近場光學(xué)顯微鏡利用亞波長尺度探針，可以得到更小分辨率。雙光子激發(fā)顯微鏡雙光子激發(fā)顯微鏡是一種熒光成像技術(shù)，對活體組織能達到很高的深度，最深可達1毫米。作為多光子熒光顯微技術(shù)的一種特殊形式，它使用能激發(fā)熒光染料的紅移激發(fā)光線。每一次激發(fā)，兩個紅外光光子都會被吸收。一方面，使用紅外激發(fā)光線能減少光線在組織內(nèi)的散射；另一方面，多光子吸收背景信號會受到強烈抑制，因此這種成像方法能夠達到如此的深度。但是這種方法然受到衍射的限制

11、。由于雙光子激發(fā)顯微鏡具有更好的組織穿透能力，更有效的光探測能力及更少的光毒性，在與共焦顯微鏡相比時顯然是一個更好的選擇。單光子就是通常的熒光激發(fā)方式，一個光子激發(fā)一個熒光分子發(fā)光，熒光波長比激發(fā)波長稍微長一些；雙光子就是用兩個光子激發(fā)一個熒光分子，激發(fā)光子能量小于熒光光子能量，因此激發(fā)波長長于熒光波長。現(xiàn)在公認的雙光子激發(fā)的用途：1. 用于用到紅外激發(fā)，穿透深度要高于單光子激發(fā)，2. 用于需要更高的激發(fā)功率，所以有效激發(fā)體積小于單光子激發(fā)，分辨率稍高一些。主要的單分子熒光技術(shù)smFRET（單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移）當(dāng)一個熒光分子（又稱為供體分子）的熒光光譜與另一個熒光分子（又稱為受體分子） 的

12、激發(fā)光譜相重疊時， 供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光， 同時供體熒光分子自身的熒光強度衰減。FRET 程度與供、受體分子的空間距離緊密相關(guān)， 一般為710 nm 時即可發(fā)生FRET; 隨著距離延長， FRET呈顯著減弱。 供體和受體之間FRET的效率，可以由E=1/1+(R/R0)exp6反映，其中R表示供體和受體之間的距離，R0表示福氏半徑，依賴供體發(fā)射譜和受體激發(fā)譜的重疊程度，以及供體和受體能量轉(zhuǎn)移的偶極子的相對方位。1發(fā)生原理熒光共振能量轉(zhuǎn)移是指在兩個不同的熒光基團中，如果一個熒光基團（供體 Donor）的發(fā)射光譜與另一個基團（受體 Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊，當(dāng)這

13、兩個熒光基團間的距離合適時（一般小于100），就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，即以前一種基團的激發(fā)波長激發(fā)時，可觀察到后一個基團發(fā)射的熒光。簡單地說，就是在供體基團的激發(fā)狀態(tài)下由一對偶極子介導(dǎo)的能量從供體向受體轉(zhuǎn)移的過程，此過程沒有光子的參與，所以是非輻射的，供體分子被激發(fā)后，當(dāng)受體分子與供體分子相距一定距離，且供體和受體的基態(tài)及第一電子激發(fā)態(tài)兩者的振動能級間的能量差相互適應(yīng)時，處于激發(fā)態(tài)的供體將把一部分或全部能量轉(zhuǎn)移給受體，使受體被激發(fā)，在整個能量轉(zhuǎn)移過程中，不涉及光子的發(fā)射和重新吸收。如果受體熒光量子產(chǎn)率為零，則發(fā)生能量轉(zhuǎn)移熒光熄滅；如果受體也是一種熒光發(fā)射體，則呈現(xiàn)出受體的熒光

14、，并造成次級熒光光譜的紅移。2發(fā)生條件能量供給體接受體（DA）對之間發(fā)生有效能量轉(zhuǎn)移的條件是苛刻的，主要包括：(1)能量供體的發(fā)射光譜與能量受體的吸收光譜必須重疊；(2)能量供體與能量受體的熒光生色團必須以適當(dāng)?shù)姆绞脚帕校?3)能量供體、能量受體之間必須足夠接近，這樣發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的幾率才會高。此外，對于合適的供體、受體分子在量子產(chǎn)率、消光系數(shù)、水溶性、抗干擾能力等方面還有眾多的要求。可見，要找到一個合適的DA對是很不容易的 。熒光共振能量轉(zhuǎn)移分子馬達分子馬達（molecular motor），是美國康奈爾大學(xué)研究人員在活細胞內(nèi)的能源機制啟發(fā)下，制造出的一種馬達。這種微型馬達以三磷酸腺苷酶為基礎(chǔ)

15、，依靠為細胞內(nèi)化學(xué)反應(yīng)提供能量的高能分子三磷酸腺苷（ATP）為能源。 肌球蛋白主要功能之一是使肌肉收縮。在非肌肉組織中維持細胞的彈性，以及參與細胞質(zhì)分裂。 驅(qū)動蛋白以微管為軌道的動力蛋白，運動的極性由三磷酸腺苷水解酶（ATP水解酶）活性域在蛋白一級結(jié)構(gòu)中的位置決定。 動力蛋白一般是以超分子集成體的形式存在，往微管的負極運動。乳糖操縱子E.coli的乳糖操縱子是原核生物基因表達調(diào)控的典型例子. 1?乳糖操縱子的結(jié)構(gòu) 大腸桿菌的乳糖操縱子含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼-半乳糖苷酶、透酶、乙酰基轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié)基因?；蚓幋a一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，

16、使操縱子受阻遏而處于轉(zhuǎn)錄失活狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激活蛋白CAP結(jié)合位點，由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點共同構(gòu)成LAC操縱子的調(diào)控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達。 2?阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié) 在沒有乳糖存在時，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)。此時，基因列在P啟動序列操縱下表達的乳糖阻遏蛋白與O序列結(jié)合，故阻斷轉(zhuǎn)錄啟動。阻遏蛋白的阻遏作用并非絕對，偶有阻遏蛋白與O序列解聚。因此，每個細胞中可能會有寥寥數(shù)分子半乳糖苷酶、透酶生成。 當(dāng)有乳糖存在時，乳糖操縱子即可被誘導(dǎo)。真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖經(jīng)透酶催化、轉(zhuǎn)運進入細胞，再經(jīng)原先存在于細胞中的少數(shù)

17、 -半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)閯e乳糖。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)型變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄，使-半乳糖苷酶分子增加 1000倍。 3?CAP的正性調(diào)節(jié) 分解代謝物基因激活蛋白 CAP是同二聚體，在其分子內(nèi)有DNA結(jié)合區(qū)及cAMP結(jié)合位點。當(dāng)沒有葡萄糖及cAMP濃度較高時，cAMP與CAP結(jié)合，這時CAP結(jié)合在乳糖啟動序列附近的CAP位點，可刺激RNA轉(zhuǎn)錄活性，使之提高50倍；當(dāng)葡萄糖存在時，cAMP濃度降低，cAMP與CAP結(jié)合受阻，因此乳糖操縱子表達下降。 由此可見，對乳糖操縱子來說 CAP是正性調(diào)節(jié)因素，乳糖阻遏蛋白是負性調(diào)節(jié)因素。兩種調(diào)節(jié)機制根據(jù)存在的碳源性

18、質(zhì)及水平協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)乳糖操縱子的表達。 4?對調(diào)節(jié)機制的解釋 大腸桿菌根據(jù)碳源性質(zhì)選擇代謝方式。 倘若有葡萄糖存在時，細菌優(yōu)先選擇葡萄糖供應(yīng)能量。葡萄糖通過降低 cAMP濃度，阻礙cAMP與CAP結(jié)合而抑制乳糖操縱子轉(zhuǎn)錄，使細菌只能利用葡萄糖。 在沒有葡萄糖而只有乳糖的條件下，阻遏蛋白與 O序列解聚，CAP結(jié)合cAMP后與乳糖操縱子的CAP位點，激活轉(zhuǎn)錄，使得細菌利用乳糖作為能量來源。光鑷原理編輯基本原理編輯介電質(zhì)顆粒會吸引到光束聚焦點中心。作用于物體上力的大小與物體到光束中心的距離成正比，就像彈簧系統(tǒng)。光鑷可以通過高度聚焦激光束產(chǎn)生的力來操作納米或微米級的介電質(zhì)顆粒。高度聚焦激光束通常是通過使激

19、光通過顯微鏡物鏡得到的。聚焦后的激光光束最窄的部分（光束腰）會存在非常強的電場梯度。介電質(zhì)顆粒會被吸引至電場梯度最高的區(qū)域，也就是光束的中心。同時，電場還會在光束傳播方向上對顆粒產(chǎn)生力。這點可以通過動量守恒來理解。光束中的介電質(zhì)顆粒會吸收并散射光子，于是就會產(chǎn)生相應(yīng)的動量的變化。如果顆粒不在光束腰上，由于光場光強梯度（即不同區(qū)域的光強差異）的影響，顆粒各個方向上會受到不均勻的力將其拉向光強最強的區(qū)域，如右圖所示。 光鑷是非常精確的設(shè)備，可以將亞微米級的顆粒移動亞納米級的距離。1 所以，光鑷常常被用于研究和操作DNA，蛋白質(zhì)，酶甚至是單個分子。在定量科學(xué)測量中，通常電介質(zhì)顆粒都會不移動到離光束中

20、心很遠的地方。當(dāng)顆粒與光束中心的距離很小時，顆粒受到的力與顆粒與光束中心的距離成正比。因此，其特性類似于普通的彈簧系統(tǒng)，遵守胡克定律.光鑷原理的細節(jié)編輯關(guān)于光鑷原理的解釋跟被作用顆粒的大小與使用激光波長的關(guān)系有關(guān)。當(dāng)顆粒的大小比激光波長大很多時，射線光學(xué)原理就可以解釋光鑷的原理。如果激光波長比顆粒尺寸大得多時，顆粒就可以被當(dāng)做是在光場中的電偶極子。當(dāng)被作用物體的尺寸與激光波長在同一數(shù)量級時，可以利用麥斯威爾方程組來解釋其原理。射線光學(xué)解釋編輯射線光學(xué)解釋（未聚焦激光）。當(dāng)顆粒偏離光束中心時（右圖），由于光束中心的光強較大，動量的轉(zhuǎn)移造成對顆粒有一個指向光束中心的合力。當(dāng)顆粒處于光束中心時（左圖

21、），顆粒受到的橫向合力為零。但是未聚焦的激光會對顆粒造成沿著光線傳播方向的力。射線光學(xué)解釋（聚焦激光）。聚焦的激光除了可以將顆粒困在激光的中心軸上，還可以將它困在光軸上的特定位置：無論顆粒在激光聚焦點之前（左圖）或之后（右圖），動量的傳遞都會對顆粒產(chǎn)生一個指向激光聚焦點的合力。因此，顆粒會被固定于聚焦點稍微偏后一點的位置。（稍微偏后是因為顆粒會由于光的散射而受到沿著光傳播方向的力）當(dāng)被作用的目標(biāo)尺寸比激光波長明顯大很多時，光學(xué)捕捉現(xiàn)象可以使用射線光學(xué)來解釋。如圖所示，激光中發(fā)出的光線進入和離開顆粒時會發(fā)生折射。因此，光線離開顆粒時，其位置與其進入顆粒時相反。由于光子本身帶有動量，這種方向的變化

22、說明有動量的轉(zhuǎn)移。根據(jù)牛頓第三運動定律，就會有一個大小相等，方向相反的動量作用于該顆粒。通常人們利用高斯光束來進行光學(xué)捕捉。在這種情況下，如果顆粒偏離光束中心，如圖右半部，由于光強較強的部分會比光強較弱的部分產(chǎn)生更大的動量轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生更大的力，因此顆粒最后受到的合力是指向光束中心的。如果顆粒在光束的軸線上，進入顆粒的光線會均勻地向周圍散射，造成顆粒在橫面上受到的合力為零。在這種情況下，顆粒受到的合力是沿著光線傳播方向的。軸向上，顆粒表面散射的產(chǎn)生的推力會與由于光場強度梯度產(chǎn)生的梯度力抵消，造成顆粒穩(wěn)定于軸線上束腰稍后一點的位置。熒光原位雜交(fluorescence in situ hybrid

23、ization, FISH)是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過免疫細胞化學(xué)過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點,不但能

24、顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).。原理FISH(fluorescence in situ hybridization)技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。它的基本原理是:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。實驗流程：FISH樣本的制備

25、探針的制備探針標(biāo)記雜交（染色體顯帶）熒光顯微鏡檢測結(jié)果分析。特點原位雜交的探針按標(biāo)記分子類型分為放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。用同位素標(biāo)記的放射性探針優(yōu)勢在于對制備樣品的要求不高，可以通過延長曝光時間加強信號強度，故較靈敏。缺點是探針不穩(wěn)定、自顯影時間長、放射線的散射使得空間分辨率不高、及同位素操作較繁瑣等。采用熒光標(biāo)記系統(tǒng)則可克服這些不足，這就是FISH技術(shù)。FISH技術(shù)作為非放射性檢測體系，有以下特點。熒光漂白恢復(fù)技術(shù)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)，研究膜蛋白和脂質(zhì)平移擴散以及溶質(zhì)通過質(zhì)膜和在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的一種技術(shù)。包括三個步驟：熒光染料與膜成分交聯(lián)；激光照射猝滅（漂白）膜上部分熒光；檢測猝滅部位熒光再現(xiàn)速率（由于膜成分的流動性）。熒光漂白后的