無菌檢查驗證范例

1、虎杖苷注射液無菌檢查的方法驗證1. 樣品：虎杖苷注射液由深圳海王藥業(yè)有限公司提供，批號20040305。2. 培養(yǎng)基：無菌檢查用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基，批號040203；霉菌液體培養(yǎng)基，批號040302； 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，批號0403045；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，批號040513；0.1%蛋白胨溶液，批號050217；虎紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，批號040202；由中檢所所培養(yǎng)基室提供。3. 方法：中國藥典2005版無菌檢查中薄膜過濾法方法驗證 4. 驗證試驗用菌種：驗證試驗用菌種包括金黃色葡萄球菌（26003）、銅綠假單胞菌（10104）、枯草芽孢桿菌（63501）、生孢梭菌（64941）、白色念珠菌（980

2、01）、黑曲霉菌（98003），來自中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏中心。5. 菌液制備：取經(jīng)34培養(yǎng)1824小時的金黃色葡萄球菌、綠膿假單胞菌與枯草芽孢桿菌肉湯液體培養(yǎng)物1ml加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至105107約為50100cfu/ml備用。取經(jīng)24培養(yǎng)1824小時的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml，加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至105約為50100cfu/ml備用。取經(jīng)34培養(yǎng)1824小時的生孢梭菌硫已醇酸鹽液體培養(yǎng)物1ml ，加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至107備用。取經(jīng)培養(yǎng)一周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加0.9%氯化鈉溶液3ml，洗下孢子，轉(zhuǎn)移至另一空管

3、，標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁后，取1ml加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中10倍稀釋至104約為50100cfu/ml備用。6. 供試液制備：取樣品10瓶分別加0.1%蛋白胨溶液30 ml溶解后，過濾。7. 活菌計數(shù)活菌計數(shù)結(jié)果見表1。表1 活菌計數(shù)（cfu/ml） 104稀釋105稀釋107稀釋試驗次數(shù)121212金黃色葡萄球菌  5660  枯草芽孢桿菌  7779  白色念珠菌  8670  黑曲霉菌8076    銅綠假單胞菌

4、60;   47508 方法驗證直接接種法：取樣品12支，分別接種8支硫乙醇酸鹽和4支霉菌液體培養(yǎng)基2ml/支后，再按要求加入相應(yīng)的陽性菌液（30-100個/ml），置規(guī)定溫度培養(yǎng)3-5天，逐日觀察結(jié)果。薄膜過濾法：取樣品11支，將樣品過濾于封閉式濾器（3聯(lián)筒/套），用0.1%蛋白胨氯化鈉溶液沖洗500ml后，再分別人工污染金黃色葡萄球菌、枯草桿菌50100個/筒即可，同時平行做稀釋劑的對照組。將稀釋劑對照濾筒和污染陽性菌的驗證濾筒置37培養(yǎng)35d，逐日觀察，結(jié)果見表1、2、3。表2 虎杖苷注射液無菌檢查法驗證（直接接種法） 菌株 次數(shù) 管數(shù)培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽 霉菌

5、 1 2 3 4 5 (d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌112 - - - - - - - - - -21 2 - - - - - - - - - -31 2 - - - - - - - - - -白色念株菌1 1 2 - + + + + - + + + +212 - + + + + - + + + +312 - + + + + - + + + +枯草桿菌112 - - - - - - - - - -212 - - - - - - - - - -312 - - - - - - - - - -黑曲霉112 - + + + + - + + + +212 - + + + + - + + + +

6、312 - + + + + - + + + +銅綠假單胞菌112 + + + + + + + + + +212 + + + + + + + + + +312 + + + + + + + + + +生孢梭菌112 + + + + + + + + + +212 + + + + + + + + + +312 + + + + + + + + + + 表3 薄膜過濾法人工污染金黃色葡萄球菌（活菌數(shù)58cfu） 硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（100ml/濾器）實驗次數(shù)培養(yǎng)1d培養(yǎng)2d培養(yǎng)3d培養(yǎng)4d培養(yǎng)5d1（沖洗量500 ml）+2（沖洗量500 ml）+陰性對照（50 ml）-表4 薄膜過濾法人工污染枯草桿菌（活菌數(shù)78cfu） 硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（100ml/濾器）實驗次數(shù)培養(yǎng)1d培養(yǎng)2d培養(yǎng)3d培養(yǎng)4d培養(yǎng)5d1（沖洗量500 ml）+2（沖洗量500 ml）+陰性對照（50 ml）- 9 結(jié)論：根