微量元素對食用菌生長的影響

1、 （2008屆）畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目：微量元素鈣鎂對食用菌生長的影響學(xué)院：生物與化學(xué)工程學(xué)院專業(yè)：生物工程班級：生物041學(xué)號：200438895120姓名：梅曉峰指導(dǎo)教師：朱長俊教務(wù)處制 2008 年6月5日誠信聲明我聲明，所呈交的論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。 論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 簽名日期: 年 月 日授權(quán)聲明學(xué)院有權(quán)保留送交論文（設(shè)計(jì)）的原件，允許論文（

2、設(shè)計(jì)）被查閱和借閱，學(xué)?？梢怨颊撐模ㄔO(shè)計(jì)）的全部或部分內(nèi)容，可以影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文（設(shè)計(jì)），學(xué)校必須嚴(yán)格按照授權(quán)對論文（設(shè)計(jì)）進(jìn)行處理，不得超越授權(quán)對論文（設(shè)計(jì)）進(jìn)行任意處理。 論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 簽名日期: 年 月 日嘉興學(xué)院本科生畢業(yè)論文 生物與化學(xué)工程學(xué)院摘要:本實(shí)驗(yàn)主要研究微量元素鈣、鎂對平菇菌絲生長的影響。在PDA培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的硫酸鎂和氯化鈣，接種培養(yǎng)并通過過測量菌絲圈直徑的辦法觀察菌絲的生長速度，挑選出生長最快的兩組進(jìn)行液體發(fā)酵。利用等離子體光譜儀測定菌絲中富集的鈣元素和鎂元素的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明Mg2+濃度為3.5g/L時，平菇菌絲體的生長狀況最好

3、，富集量達(dá)到6187.2mg/kg。另一組Ca2+濃度為2.5g/L時，平菇菌絲體的生長最好、最濃密，富集量達(dá)到57421.2 mg/kg。關(guān)鍵詞:食用菌；富鈣；富鎂Abstract: The influence of Ca and Mg on the mushrooms mass production was researched emphatically in this paper. We add MgSO4、CaCl2 with different concentration in to the PDA culture medium. Then measure the growth sp

4、eed of the cap fungus by observing the diameter of the mycelium cycle. Pick out two groups which grow faster than others, then inoculate in liquid culture. At last we will measure the content of Mg and Ca in the cap fungus by ICP-AES. From the research, we can draw the conclusion that Mg2+in the con

5、centration of 3.5 g/L can accelerate the growth speed of cap fungus and the highest content can reach 6187.2mg/kg . While Ca2+ in the concentration of 2.5g/L can accelerate the growth speed of cap fungus and the highest content can reach 57421.2 mg/kg. Keywords: Mushroom; Ca2+ enrichment; Mg2+ enric

6、hment; ICP-AESII嘉興學(xué)院本科生畢業(yè)論文 生物與化學(xué)工程學(xué)院目 錄摘要（） Abstract （）1 緒論 （1） 1.1 選題的背景、意義 （1）1.2 食用菌富集微量元素的特點(diǎn) （1）1.3 富集微量元素食用菌的生理功能 （2）1.4 生產(chǎn)富集微量元素食用菌的方法 （2）1.5 研究動態(tài)及前景 （4）2 實(shí)驗(yàn)部分 （5）2.1 實(shí)驗(yàn)流程 （5）2.2 分析方法 （5）2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 （6）3 結(jié)果與分析 （9）3.1 菌種培養(yǎng)過程中平菇菌絲體的生長狀況 （9）3.2 鈣離子、鎂離子對平菇菌絲生長的影響 (11)3.3 平菇菌絲體的富離子液體培養(yǎng) (13)3.4 平菇菌絲中鈣

7、、鎂離子含量的測定 (14)4 結(jié)論 （16）致謝 （17） 參考文獻(xiàn) （18） 1 緒論1.1 選題的背景、意義食用菌是一種既營養(yǎng)又美味的食品，食用菌中含有豐富的蛋白質(zhì)、無機(jī)元素及維生素，特別是各類的微量元素對人體的生長和發(fā)育有著不可忽視的影響，而且食用菌還具有保健功能，或許不久的將來食用菌保健品將走進(jìn)我們的生活。食用菌已被聯(lián)合國列入二十一世紀(jì)的健康食品。作為綠色食品，食用菌已越來越受人們的喜愛，并成為日常生活中不可缺少的一種食物。微量元素是人和動物必需的營養(yǎng)素，也是某些強(qiáng)化食品的重要組成部分。它對提高人體免疫機(jī)能、預(yù)防某些疾病的發(fā)生有著重要的作用。然而，根據(jù)中國營養(yǎng)學(xué)會發(fā)表的資料表明：在我

8、國，人體必需的微量元素Zn、Fe、I、Ca等元素缺乏較多，長期攝入量不足，必將耗盡體內(nèi)的儲存，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)微量元素失衡。自然界中的微量元素多以無機(jī)鹽形式存在，不利于人體吸收利用，甚至有時有毒副作用。因此，尋找一條能獲得有機(jī)態(tài)微量元素成本又低廉的途徑，對改善人類微量元素缺乏的現(xiàn)狀具有重要意義。食用菌是人類的第二大類蔬菜，又是醫(yī)藥保健工業(yè)的重要原料，以它為載體富集人體所必需的微量元素，是一條切實(shí)可行的方法。1.2 食用菌富集微量元素的特點(diǎn)1.2.1 食用菌的栽培規(guī)模食用菌在世界各國均有廣泛栽培，在我國幾乎各省市均有大規(guī)模的栽培，有的省市還有特色菇的栽培歷史，且有成熟的生產(chǎn)栽培、管理技術(shù)，及部分深加工

9、產(chǎn)品。大批菇農(nóng)掌握了先進(jìn)的栽培技術(shù)，專業(yè)技術(shù)隊(duì)伍與菇農(nóng)技術(shù)改造相結(jié)合更進(jìn)一步推動了食用菌的科學(xué)化栽培，使規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)逐漸成為主流。1.2.2 生產(chǎn)成本低，技術(shù)易掌握 利用現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)，采用富集含量高的菌株，可降低成本，且富集力和耐受力強(qiáng)，低濃度的微量元素對食用菌的生長呈現(xiàn)有利趨勢。1.2.3 富集微量元素的種類和含量可控性 例如：曹素芳等通過平菇母種、原種、栽培種加硒馴化，栽培時加入不同量的硒，推出了含硒量為10-20mgKg和50-60mgKg的兩種富硒平菇。其中前者可作為保健食品，日常鮮食100g可補(bǔ)足成人對硒的日需量；而后者可作為治癌的富硒藥物研究應(yīng)用。1.2.4 食用菌富集的有機(jī)

10、態(tài)微量元索易于吸收性無機(jī)態(tài)的微量元素在人體內(nèi)由于與脂肪、蛋白質(zhì)、草酸、氧化物、維生素等的反應(yīng)，以及與其他磷酸鹽、植酸鹽的相互作用的影響，生物利用率很低。1.2.5 食用菌富集的微量元素有機(jī)態(tài)具有良好的穩(wěn)定性與安全性食用菌富集的微量元素有機(jī)態(tài)具有良好的穩(wěn)定性，便于儲存、運(yùn)輸、深加工,避免其中某些營養(yǎng)成分的損失，且食用菌本身安全無毒，富集微量元素后，只要所攝取的微量元素在限制范圍內(nèi)，亦對人體無毒副作用。1.2.6 食用方法簡單多樣性 可直接食用鮮菌子實(shí)體，或鮮菇脫水處理制干菇儲藏長期食用，或脫水處理后將食用菌磨碎作為食品添加劑，也可將其菌絲子實(shí)體的提取液制成各種飲料飲用。1.3 富集微量元素食用菌

11、的生理功能1.3.1 食用菌中微量元素的存在形式 許多研究認(rèn)為，微量元素在食用菌內(nèi)生物轉(zhuǎn)化極高，大部分以有機(jī)態(tài)存在，多與菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖等結(jié)合。草菇富鋅研究發(fā)現(xiàn)子實(shí)體中的鋅較少與蛋白質(zhì)結(jié)合，較多與可溶性糖和游離氨基酸結(jié)合或呈游離狀態(tài)存在。硒在金針菇菌體內(nèi)的有機(jī)化程度達(dá)75以上，其中分布在硒蛋白占64.1，硒多糖占11.2。目前，由于分析技術(shù)及提取手段的限制，關(guān)于微量元素參與菌絲體內(nèi)的代謝途徑及存在方式尚不能作出完美的解釋，需做進(jìn)一步研究。1.3.2 生理功能微量元素在食用菌內(nèi)生物轉(zhuǎn)化的過程中，參與了食用菌體內(nèi)酶的轉(zhuǎn)化，影響了其部分代謝，促進(jìn)了體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖的合成，從而表現(xiàn)

12、出富集微量元素的食用菌比正常食用菌的脂肪、總糖及蛋白質(zhì)含量均有增高。從某種意義上說，富集微量元素的食用菌營養(yǎng)更高，它既體現(xiàn)了食用菌的保健作用,又強(qiáng)化了微量元素的生物功能，可作為具有良好的營養(yǎng)和藥用價(jià)值的食品使用。王關(guān)林等用富硒靈芝為材料，對小鼠全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)活性、全血SOD活性、丙二醛(MDA)含量進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與食用正常靈芝相比，富硒靈芝表現(xiàn)出了更好的生物效應(yīng)，其菌體內(nèi)的有機(jī)硒有效的協(xié)同靈芝的主要營養(yǎng)成分，如靈芝多糖增加了機(jī)體的GSHPx和SOD活性，增強(qiáng)了內(nèi)源性氧自由基清除系統(tǒng)的功能，從而降低了體內(nèi)MDA的含量。1.4 生產(chǎn)富集微量元素食用菌的方法生產(chǎn)富集微量元素食用

13、菌只需在目前生產(chǎn)上常用培養(yǎng)基中加入適量濃度的微量元素溶液進(jìn)行常規(guī)方法處理即可。有的食用菌需要進(jìn)行母種、原種、栽培種馴化，有的液體深層培養(yǎng)方法更方便,需要在實(shí)踐中總結(jié)。 培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基利用現(xiàn)在生產(chǎn)上常用培養(yǎng)基。如母種：PDA或改良PDA。栽培種：木屑或棉子殼等。 微量元素液的配制 可先制成母液，再依適宜濃度稀釋成加入液。Ca：CaCl2用蒸餾水溶解，調(diào)pH中性；Mg:MgSO4，用蒸餾水溶解，調(diào)pH中性。 加入微量元素液的濃度 一般低濃度的微量元素液對菌絲體及子實(shí)體生長有促進(jìn)作用,還可使食用菌內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖含量有所增加。而過高的濃度則抑制菌絲體生長。延遲出菇,降低產(chǎn)量，造成經(jīng)濟(jì)損失。

14、不同菌種、不同品種要求的適宜濃度不同，需要生產(chǎn)者在實(shí)踐中摸索?？茖W(xué)上，適宜的加入濃度要考慮施入量、富集率、回收率、產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)成本和用途等綜合作用因素，盡量做到低投入、高產(chǎn)出。如果是食用補(bǔ)充缺乏的微量元素，食用菌子實(shí)體的富集量可小一些。而藥用免疫的食用菌及其加工產(chǎn)品需要的富集濃度要稍高些。 以富鈣為例說明富集率、回收率的計(jì)算方法菌絲體富集率=(菌絲體干重*菌絲體含鈣量)/培養(yǎng)液中加入鈣量*100子實(shí)體富集率=每袋鮮菇重*(1一子實(shí)體含水量)*子實(shí)體含鈣量/每袋培養(yǎng)料中加入的鈣量*100菌絲體鈣回收率=(定量發(fā)酵液菌絲體含鈣量/定量發(fā)酵液添加鈣總量)*100子實(shí)體鈣回收率=(富鈣菇測得鈣一對照樣含

15、鈣*1/10)/(培養(yǎng)基加鈣量+培養(yǎng)基含鈣量)*100（注：樣品為干品，按鮮菇含水90計(jì))。 常見種類富集微量元素的建議適宜濃度見表1。據(jù)報(bào)道不同種類的耐受和富集微量元素的能力不同，不同品種間的差異不大。生產(chǎn)中，應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)卦耘嗟膶?shí)際情況選擇耐受和富集力強(qiáng)的種類。而且有些種類需要母種馴化培養(yǎng)，否則子實(shí)體產(chǎn)量不能提高。但是經(jīng)母種馴化后，耐受力增強(qiáng)。 微量元素液的加入方法，主要有噴灑、拌料、浸泡三種。綜合比較發(fā)現(xiàn)拌料優(yōu)于其它兩種，但在金針菇富碘的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)噴灑的效果要好于拌料。 栽培和管理栽培方法同普通菇類種植，液體培養(yǎng)比固體培養(yǎng)出菇早，且提取多糖更加方便。通過鋅對香菇的影響作用研究發(fā)現(xiàn)，同等濃度的

16、鋅對固體培養(yǎng)中的香菇菌絲生長有抑制作用，但對液體培養(yǎng)的香菇子實(shí)體產(chǎn)量及質(zhì)量均有明顯的促進(jìn)作用，在金針菇上則作用不明顯。 表1 常見食用菌加入微量元素的適宜濃度(mg/kg)元素種類抑制濃度適宜濃度備注硒金針菇靈芝猴頭菌平菇灰樹花香菇gt;1008020100500<3002005060-不同采集期的富集量有差異 - - -鋅 草菇 平菇 平菇母種 金針菇 4350 400 - 1000 800 2947 400 200 800 400培養(yǎng)料濃度低時，與富集量相關(guān)不同品種不同培養(yǎng)料平板培養(yǎng)基鍺靈芝香菇金針菇紫孢側(cè)耳 1100 1000 800 1050 <1

17、000 500 600 210鈣 平菇 - 0.6%在發(fā)酵液中加入碘 金針菇 >50 >50 >50 300500 100200 200300菌絲體液體培養(yǎng)子實(shí)體拌料加入噴灑 1.5 研究動態(tài)及前景利用食用菌為介質(zhì)獲得有機(jī)態(tài)微量元素的研究已取得了一定的成果，這為發(fā)展新型保健食品提供了一條有效途徑。隨著天然、營養(yǎng)、健康食品在全世界的興起，以及科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，用食用菌富集微量元素的研究必將會有更光明的前景。但是，盡管當(dāng)前研究所用的菌種、基質(zhì)豐富多樣，富集的微量元素種類繁多、含量較高、培養(yǎng)方式多樣，結(jié)果卻基本都停留于實(shí)驗(yàn)室或小試階段，應(yīng)用方面研究較少，機(jī)理、有機(jī)態(tài)形式、生理功能的認(rèn)

18、識也不全面。對作用機(jī)理進(jìn)行深入研究，完善栽培工藝，使科研成果與生產(chǎn)緊密結(jié)合，從而達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)、工業(yè)化應(yīng)用是目前亟待解決的問題，它需要科研工作者和生產(chǎn)者的共同努力?？傊?，用食用菌富集人和動物體所需微量元素的研究在未來的發(fā)展?jié)摿艽?，前景也是美好的? 實(shí)驗(yàn)部分2.1 實(shí)驗(yàn)流程 本課題采用含不同濃度Ca2+、Mg2+ 的離子液，加入食用菌平板培養(yǎng)基，考察不同濃度的Ca2+、Mg2+ 離子對菌絲生長的影響，并確定最佳離子濃度后，配制該濃度的液體培養(yǎng)基，接入菌種進(jìn)行搖床培養(yǎng)，獲得菌絲后用等離子光譜法測其中富集的Ca2+、Mg2+ 離子的含量。實(shí)驗(yàn)流程如圖2-1：菌種 菌種活化平板實(shí)驗(yàn)，測定菌絲生長速

19、度確定最佳離子濃度 液體搖瓶培養(yǎng)獲得濕菌絲體抽濾干燥，獲得干菌絲體獲得菌絲體中富集離子濃度圖2-1 實(shí)驗(yàn)流程示意圖2.2 分析方法觀察并記錄菌絲生長速度、長勢和菌絲外觀狀況，求出日平均生長的速度值。收集最佳濃度下液體培養(yǎng)得到的菌絲，烘干后稱得干重。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：在儀器推薦的濃度范圍內(nèi)，制備含待測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液至少3個點(diǎn)，濃度依次遞增，并分別加入待測樣品溶液配制中的相應(yīng)試劑。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定制備待測樣品溶液，使待測元素的估計(jì)濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi)。元素含量用等離子體-原子發(fā)射光譜法測定。等離子體-原子發(fā)射光譜法具有基體干擾少，線性范圍寬，可以進(jìn)行多元素同時檢測的優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于金屬、

20、礦產(chǎn)品中的元素分析。其工作原理為：1把試樣配成溶液。 2以一定流量進(jìn)入ICP光譜儀，在矩管處氣化，生成等離子體。此時，各元素粒子中的電子處于躍遷狀態(tài)。 3等離子體中各元素粒子中的電子開始從躍遷狀態(tài)回到基態(tài)，發(fā)射出譜線。4根據(jù)譜線的波長，定性判斷元素的種類。根據(jù)譜線的強(qiáng)度與標(biāo)樣中譜線的長度對比，定量判斷某種元素的含量。2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)器材試劑及菌種：MgSO4·7H2O、無水氯化鈣、土豆500g、葡糖糖50g 、瓊脂40g、蒸餾水、菌種為市售新鮮平菇分離獲得。儀器：SX2-4-10型 箱型電阻爐（嘉興恒泰電熱設(shè)備有限公司），SHP-150型 生化培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）

21、，DGX-9143B-1型 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），F(xiàn)A1004型 電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司），Cl-100型 雙層鐵皮電爐（浙江嘉興鳳橋電熱器廠），2D-8802B雙層大容量搖床，710ES全譜直讀電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（澳大利亞Varian公司），SA-300VF自動高壓滅菌鍋，電子天平，500ml、100ml、50ml燒杯各一個，1000mL燒杯2個，接種環(huán)，紗布，漏斗，電爐，鋁鍋，玻璃棒，25支100ml試管，標(biāo)簽紙，鐵架臺，棉花，酒精燈，牛皮紙，高壓鍋，石棉網(wǎng)，移液管1、2、5、10、20ml各1支，量筒50、100ml各一個。2.3.2 實(shí)

22、驗(yàn)步驟菌種的活化：培養(yǎng)基就是根據(jù)食用菌生長發(fā)育的需要，用人工的方法配制的來適合食用菌生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)的物質(zhì)，也叫基質(zhì)，或稱底物。 PDA培養(yǎng)基的配制：土豆洗凈，去皮，挖去芽眼，切成蠶豆塊大小，稱取200g。將200g土豆塊放在500ml水中煮30分鐘，用4-6層紗布過濾去土豆渣而取土豆汁。將土豆汁加水到1000ml再放進(jìn)20g瓊脂繼續(xù)加熱融化。最后加入20g葡萄糖，即為PDA培養(yǎng)基。培養(yǎng)基處理：用漏斗和46層紗布過濾PDA培養(yǎng)基并分裝試管中，每支試管的裝量占試管容積的1/51/4為宜（分裝時，不要讓培養(yǎng)基沾到管口上）分裝好的試管，再做一個棉花塞塞住管口，再立即將試管包扎成捆，棉塞部

23、分用牛皮紙包好。滅菌：將成捆的試管放入手提式高壓鍋內(nèi)，進(jìn)行高壓濕熱滅菌30min，待壓力磅指針回復(fù)到零位時，打開高壓鍋蓋，待鍋內(nèi)溫度下降到60-70取出。斜面培養(yǎng)基：選一水平的桌面，先在桌上放一木棒，將捆扎的試管打開，逐一斜放，培養(yǎng)基便傾斜成三角斜面。（斜面長度占試管總長的1/2左右，原則是不能使培養(yǎng)基沾到棉塞的）接種：將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅以達(dá)到滅菌效果。將裝有菌種的試管口在火焰上微燒一周（將管口上可能沾染的少量或帶菌塵埃燒掉）將燒過的接種喚伸入菌種管內(nèi)，先觸及沒有長菌的培養(yǎng)基使環(huán)冷卻。輕輕挑取少許菌種，將接種環(huán)抽出管外迅速伸入已制備好的斜面培養(yǎng)基試管內(nèi)。抽出接種環(huán)，將試管塞上棉塞并插在

24、試管架上。再次燒紅接種環(huán)，接種完畢?；罨?接種完畢的培養(yǎng)基放入恒溫箱中進(jìn)行活化，溫度在25。 2觀察菌絲的生長情況，待培養(yǎng)基上長滿菌絲時進(jìn)行下一歨的培養(yǎng)。 菌種擴(kuò)大：制備PDA平板培養(yǎng)基，用接種針從長滿菌絲的試管中勾取一小塊菌絲，接入平板中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。待培養(yǎng)基上長滿菌絲時進(jìn)行下一步培養(yǎng)。菌種的選育：以PDA培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別加入不同量的MgSO4·7H2O、無水CaCl2，配制成濃度(單位:g/L)為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0共8個濃度梯度的培養(yǎng)基，高壓滅菌30min，冷卻后取出，在無菌工作室中倒平板，每個濃度設(shè)3個重復(fù)，再設(shè)一個空白對照

25、組。并在每只平板表面都貼上標(biāo)簽紙標(biāo)記。冷卻凝固后在無菌室中用已滅菌的打孔器在培養(yǎng)好的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基中打孔，為了能得到相同的菌種，然后接到含不同濃度離子培養(yǎng)基中。置于28恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲的生長速度、生長勢和菌絲外觀狀況，求出日平均生長的速度值。優(yōu)良菌種液體培養(yǎng)：選出平板中生長速度最快的兩組，以該離子濃度濃度配制液體培養(yǎng)基，分別裝于150ml三角瓶中。在無菌室中用已滅菌的打孔器在培養(yǎng)好的含離子的固體培養(yǎng)基中打孔，將所得菌片接入三角瓶中，每組三個重復(fù)，室溫、90r/min搖床培養(yǎng)10d，并觀察菌絲生長狀態(tài)。抽濾干燥：將已經(jīng)長滿三角瓶的菌絲球真空抽濾，置于恒溫干燥箱70下干燥，干燥所

26、得即是樣品。將樣品在研缽中研磨成粉末，裝于干凈表面皿中標(biāo)記后待用。樣品處理：準(zhǔn)確稱取樣品0.3g于瓷坩堝中，放入馬弗爐中，先在200溫度下炭化2h，然后升溫至350預(yù)灰化1h，最后在500條件下灰化至灰白色?；一蟮臉悠芳尤?0mLV(硝酸)+V（高氯酸）=3+1的溶液。在電爐上加熱至溶液變成無色透明，如有少許沉淀應(yīng)冷卻后及時過濾，轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中定容，待測。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)溶液為國家標(biāo)準(zhǔn)樣品，其中Ca采用單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)值：1000ug/mL；Mg采用多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)值：100 ug/mL。定量稀釋后濃度如表2-1，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2-1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制標(biāo)樣號Mg（mg/L）

27、Ca（mg/L）標(biāo)準(zhǔn)樣1標(biāo)準(zhǔn)樣2標(biāo)準(zhǔn)樣3標(biāo)準(zhǔn)樣4標(biāo)準(zhǔn)樣50.000000.500002.500005.0000010.00000.000001.000005.0000010.0000020.0000元素含量測定：利用等離子體光譜儀測定待測液中各元素含量。等離子體原子發(fā)射光譜儀具有基體干擾少，線性范圍寬，可以進(jìn)行多種元素同時檢測的優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛用于石油、化工、環(huán)境、食品衛(wèi)生、科學(xué)研究、新型材料等70多種金屬元素的定性和定量分析，其檢測限在ppb級以下，而且通過一次測定同時得到常量組份和痕量組份的分析結(jié)果，波長范圍175-785nm，波長連續(xù)覆蓋，完全無斷點(diǎn)，等離子體輸出功率為：700-1700

28、W。 3 結(jié)果與分析3.1 菌種培養(yǎng)過程中平菇菌絲體的生長狀況本實(shí)驗(yàn)采用組織培養(yǎng)的方法接種，用經(jīng)過滅菌的鑷子小心夾取新鮮平菇子實(shí)體傘柄交界處的分生組織，快速接入已制備好的試管斜面培養(yǎng)基內(nèi)。如圖3-1。接種完畢后放入恒溫箱中進(jìn)行活化，溫度大約在25，培養(yǎng)大約一周以后培養(yǎng)基上長滿菌絲，如圖3-2。為進(jìn)行下一步擴(kuò)大培養(yǎng)提供已活化的菌種。 圖3-1接好平菇菌種的試管 圖3-2 長滿斜面的平菇菌種用接種針從長滿菌絲的試管中勾取一小塊菌種置于PDA培養(yǎng)皿中，在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，溫度大約在30，培養(yǎng)6天后可長滿培養(yǎng)皿，如圖3-3。作為下一步培養(yǎng)的菌種。圖3-3 擴(kuò)大培養(yǎng)后已長滿的平菇菌種以PDA培養(yǎng)

29、基為基本培養(yǎng)基，分別加入不同量的MgSO4·7H2O、無水CaCl2，配制成濃度(單位:g/L)為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0共8個濃度梯度的培養(yǎng)基，高壓滅菌30min后，冷卻取出，在無菌工作室中倒平板，每個濃度設(shè)3個重復(fù)，再設(shè)一個空白對照組，貼標(biāo)簽紙作標(biāo)記。待冷卻凝固后在無菌工作臺上用滅過菌的打孔器統(tǒng)一在各培養(yǎng)基中打孔（取得相同的菌種），然后接種到含不同濃度離子的培養(yǎng)基中。置于生化培養(yǎng)箱中28恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲的生長速度、生長勢和菌絲外觀狀況，求出日平均生長的速度值。如圖3-4，即為培養(yǎng)第4天測得的不同濃度Mg2+培養(yǎng)基的生長情況。 圖3-4

30、平菇菌種在含不同濃度離子的培養(yǎng)基中的生長狀況3.2 鈣離子、鎂離子對平菇菌絲生長的影響3.2.1鈣離子對平菇生長的影響表3-1 不同鈣離子濃度對平菇菌絲生長的影響處理氯化鈣濃度(g/L)日均生長量（直徑cm）菌絲長勢滿管天數(shù)菌絲外觀對照組01.25+-細(xì)弱 1.01.445+7較密 1.51.48+7較密 2.0 1.481+7較密 2.51.55+5濃密 3.01.54+6濃密 3.51.485+7較密 4.01.4+-細(xì)弱 5.01.34+-細(xì)弱注：表中表示菌絲稀疏，長勢弱；表示菌絲較密，長勢一般；表示菌絲密，長勢較強(qiáng)；表示菌絲濃密，長勢極強(qiáng)，表示不生長圖3-5 不同鈣離子濃度對菌絲生長的

31、影響以上的圖表是不同的鈣離子對平菇菌絲生長的影響。從圖表中可以得出與對照組相比適量的鈣離子的加入會促進(jìn)平菇菌絲的生長同時過量濃度的鈣離子也會抑制其生長，適宜量的鈣離子不但能提高平菇菌絲的日均生長量而且也可以加快其滿管的天數(shù)，其長勢也相應(yīng)的會更好。由表中的數(shù)據(jù)還能得出當(dāng)鈣離子的濃度在2.5g/L時平菇菌絲的長勢是最好的而且其日均生長量也是最大的，這說明2.5g/L時的鈣離子濃度是最適合平菇菌絲生長的濃度。而當(dāng)鈣離子的濃度達(dá)到4g/L時平菇菌絲的生長反而減慢了，這就表明4g/L以上的鈣離子濃度會抑制平菇菌絲的生長。所以并不是離子濃度越大就一定越能促進(jìn)菌絲的生長，對于其他食用菌也是如此。3.2.2

32、鎂離子對平菇生長的影響表3-2 不同鎂離子濃度對平菇菌絲生長的影響處理硫酸鎂濃度（g/L）日均生長量（直徑cm）菌絲長勢滿管天數(shù)菌絲外觀對照組01.25+-細(xì)弱1.01.63+7較密1.51.64+7較密2.01.642+7較密2.51.673+7較密3.01.68+6濃密3.51.71+5濃密4.01.7+5濃密5.01.635+7較密注：1：表中表示菌絲稀疏，長勢弱；表示菌絲較密，長勢一般；表示菌絲密，長勢較強(qiáng)；表示菌絲濃密，長勢極強(qiáng)，表示不生長圖3-6 不同鎂離子濃度對菌絲生長的影響以上的圖表是不同的鎂離子對平菇菇菌絲生長的影響。從圖表中可以得出與對照組相比適量的硫酸鎂會促進(jìn)平菇菌絲的生

33、長同時過量的硫酸鎂也會抑制其生長，適宜量的硫酸鎂不但能提高平菇菌絲的日均生長量而且也可以加快其滿管的天數(shù)，其長勢也相應(yīng)的會更好。由表中的數(shù)據(jù)還能得出當(dāng)硫酸鎂的濃度在3.5g/L時平菇菌絲的長勢是最好的而且其日均生長量也是最大的，這說明3.5g/L的鎂離子濃度是最適合平菇菌絲生長的濃度。而當(dāng)硫酸鎂的濃度達(dá)到5g/L時平菇菌絲的生長反而變慢了，這就表示5g/L以上的鎂離子濃度都會抑制平菇菌絲的生長，并不是鎂離子濃度越大就越能促進(jìn)平菇菌絲的生長。3.3平菇菌絲體的富離子液體培養(yǎng)通過觀察平菇菌絲在不同含濃度離子的培養(yǎng)基中的生長速度，選出生長速度最快的兩組，以該離子濃度配制液體培養(yǎng)基，分別裝于150ml

34、三角瓶中。在無菌室中用已滅菌的打孔器在培養(yǎng)好的含離子的固體培養(yǎng)基中打孔，將所得菌片接入三角瓶中，每組設(shè)三個重復(fù)，室溫、90r/min搖床培養(yǎng)3天后菌片萌發(fā)成為菌絲球，如圖3-7所示。圖3-7 液體培養(yǎng)初期形成的菌絲球培養(yǎng)10天后，菌絲球上萌發(fā)出了大量菌絲，菌絲生長已經(jīng)成熟，如圖3-8所示。 圖3-8 菌絲球萌發(fā)出大量菌絲3.4平菇菌絲中鈣、鎂離子含量的測定本次實(shí)驗(yàn)是從對菌絲的長勢，日均生長量以及菌絲的鈣、鎂離子含量這幾個方面進(jìn)行分析的。對于菌絲的長勢，是在實(shí)驗(yàn)過程中對其進(jìn)行觀察記錄而得到結(jié)論。平菇菌絲的日均生長量是利用干重法進(jìn)行測定的，先將無污染的菌絲球抽慮，然后用蒸餾水沖洗2-3次，于60攝

35、氏度下烘至恒重，測出每組菌絲的總干重。鈣、鎂離子的含量則由等離子發(fā)射光譜法來測定。等離子發(fā)射光譜法具有基體干擾少，線性范圍寬，可以進(jìn)行多元素同時檢測的優(yōu)點(diǎn)16,目前已廣泛應(yīng)用于金屬、礦產(chǎn)品中的元素分析。等離子發(fā)射光譜儀測定食用菌中Ca、Mg含量結(jié)果如表3-3：表3-3富離子培養(yǎng)的平菇中富集的鈣、鎂含量添加至培養(yǎng)基中的離子添加的離子濃度（g/L）平菇中元素含量平均值(mg/kg)Mg2+3.56187.24.05863.7空白0.016.4Ca2+2.557421.23.057352.3空白0.0246.7注：表中數(shù)值均為3次計(jì)算的平均值。 圖3-9 圖3-10 圖3-9展示了在平菇生長過程中添

36、加鈣離子后平菇中鈣元素含量大大增加，比空白組（橫坐標(biāo)0表示為添加鈣元素的空白對照組）增加了200多倍，說明鈣元素已經(jīng)大量富集，并且在2.5g/L這一濃度時達(dá)到最大值；圖3-10展示了在平菇生長過程中添加鎂離子后平菇中鎂離子含量大大增加，比空白對照組增加了將近400倍，說明此時鎂元素已經(jīng)大量富集，并且在3.5g/L這一濃度時達(dá)到最大值。通過元素含量的測定，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)明確表明：當(dāng)鎂離子濃度在3.5g/L左右時是最促進(jìn)平菇菌絲生長的，也是富集最大量最合適的濃度。當(dāng)鈣離子濃度在2.5g/L左右時達(dá)到富集量最大值，同時也最能促進(jìn)菌絲的生長。同時實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)測得的鈣、鎂元素的含量都超級高，這就說明平菇本身就具備

37、很強(qiáng)的富集微量元素的能力。由此可以推廣到人們?nèi)粘Ｊ秤玫氖秤镁?，食用菌中普遍含有多種維生素和多種具有生理活性的礦質(zhì)微量元素，由于味美、營養(yǎng)豐富，常被人們稱作健康食品，具有極好的保健作用。所以，在食用菌生長過程中通過添加微量元素的方法來富集人們身體所必須的微量元素，能夠收到一舉兩得的功效。 4 結(jié)論 鎂離子濃度在3.5g/L左右的時候是最能促進(jìn)平菇菌絲生長的，也是富集最大量最合適的濃度。鈣離子濃度在2.5g/L左右時達(dá)到富集量最大值，同時也最能促進(jìn)菌絲的生長。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)：接種效果不好，會造成菌種在培養(yǎng)基上難以生長。所以在接種操作時，一定要在無菌室里操作，不然就很容易感染其他的菌種。倒平板時，在

38、不浪費(fèi)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上應(yīng)盡量倒的厚一些，因?yàn)樵诰N萌發(fā)過程中需要大量的水分，水分不足就會使培養(yǎng)基干涸、裂開，影響菌種的正常生長。平菇菌絲培養(yǎng)時最好在接種后2天內(nèi)放入恒溫箱培養(yǎng)，然后再從恒溫箱里取出放在室溫下培養(yǎng)一天，這樣可以刺激平菇菌絲更快的生長。然后再次放入恒溫箱里一直培養(yǎng)直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。恒溫箱溫度一般控制在28攝氏度左右。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以得出，高劑量的離子濃度會抑制平菇菌絲的生長發(fā)育。當(dāng)菌種缺乏任何一種必需的微量元素時，生長發(fā)育就會受到抑制，導(dǎo)致減產(chǎn)和品質(zhì)的下降。反之，如果微量元素過多，同樣也會抑制菌種的生長，影響菌種的產(chǎn)量和質(zhì)量。在本實(shí)驗(yàn)中，高濃度的處理明顯抑制平菇菌絲的生長發(fā)育。適量的離子

39、能促進(jìn)平菇菌絲生長,提高菌種質(zhì)量,縮短制種周期,提高鮮菇產(chǎn)量，延緩菌種老化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)硫酸鎂的濃度在3.5g/L時，或者當(dāng)另一種離子鈣離子的濃度在2.5g/L時，菌絲的長勢，外觀明顯要比對照組的要強(qiáng)。菌絲的干重也要高于其他各個處理。菌絲體內(nèi)的離子濃度要比對照組高。這樣就可以達(dá)到通過食用香菇來增加人們對微量元素的攝入量。本實(shí)驗(yàn)中菌絲富集的微量元素含量采用等離子發(fā)射光譜發(fā)來測定，比目前國內(nèi)外主要使用的原子吸收光譜法和比色法更先進(jìn)，更方便。原子吸收光譜法靈敏度雖高,但一次只能測定一個元素,而且容易受到基體干擾的影響。比色法也不能進(jìn)行多元素同時檢測,檢測繁瑣費(fèi)時。電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法具有基體干擾少,線性范圍寬,可以進(jìn)行多元素同時檢測的優(yōu)點(diǎn),但是用該方法對樣品處理的要求比較高，待測液必須保證無顆粒物存在，否則在測量過程中極易堵塞吸液管，造成對儀器的損傷。在配制標(biāo)準(zhǔn)液時一定要精準(zhǔn)，才能繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，否則讀數(shù)不準(zhǔn)確。 相