現(xiàn)場調(diào)查血液樣品采集和保存標(biāo)準(zhǔn)

1、現(xiàn)場調(diào)查血液樣品采集和保存標(biāo)準(zhǔn)血樣的保存與管理：1血樣采集過程中，必須征得提供者的同意,不對提供者造成不必要的損傷。2血樣的保存須根據(jù)其類型的不同采用合適的方式,以將損失減少到最低為原則。3由于來源珍貴，應(yīng)當(dāng)有專人對血液樣品進行保存及管理，血液樣品的保存應(yīng)該有專用的空間及相應(yīng)的設(shè)備，保證血液樣品的安全可用。具體標(biāo)準(zhǔn) 1、采血管：采購質(zhì)量可靠的5ml真空塑料采血管，抗凝劑為EDTA-/K2，采血管應(yīng)符合中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)真空采血管和添加劑（WS/T 224-2002）。2采樣編號：為配合樣品管理，采集的樣品編號全部采用以個體流水序號進行標(biāo)注，編碼打印紙要耐磨、在低溫(-80)和高溫(90

2、)下粘貼牢固，且防水、防潮，編碼打印紙的大小規(guī)格控制在0.5 cm3 cm，便于粘貼。粘貼采樣編號時要注意方向，應(yīng)使編碼打印紙與采血管平行，避免“螺旋粘貼”情況的出現(xiàn)。編碼紙一式三份，一份貼在調(diào)查表，另外兩份分別粘貼于一支采血管和血液分離后裝血漿的管上。3采樣編號、編制規(guī)則：從0001開始編制。血樣采集1樣品采集時，每管采集5ml、每人采集1管。2采集后的樣品如能在24小時內(nèi)運送至指定生化檢測實驗室，可以采用常溫保存；如在三日之內(nèi)運送，則應(yīng)迅速存放到4冰箱保存。3樣品運送過程中，包裝箱內(nèi)應(yīng)放置足夠的冰凍好的蓄冷劑，確保樣品的低溫運輸。運送樣品前，對樣品進行認真清點。4 樣品運送至接運目的地后，

3、應(yīng)放入-40冰箱保存。 血樣采集準(zhǔn)備工作1準(zhǔn)備EDTA采血管和20-或23-規(guī)格的多樣品針或蝶形針（根據(jù)需要準(zhǔn)備針/管支架）2醫(yī)用干棉簽，酒精（70%異丙醇），繃帶，止血帶，準(zhǔn)備支架或盒，以支撐樣品管。3無粉乳膠或乙烯基手套，醫(yī)用外套及護目鏡。3在EDTA采血管上粘貼編碼樣品號。4如樣品需要運載或來自炎熱地區(qū)，可選用冷包裝或冰等儲運。5，用后適當(dāng)處理醫(yī)用廢棄物，以免生化品造成污染及危險。靜脈血采集：1取血自肘前橫脈（或其他方便的靜脈管），如果胳膊很臟，用肥皂和水清洗采血區(qū)域，并用毛巾擦干。在用酒精擦拭后放干。2將止血帶粘在肘前橫脈，并再次確認位置。3斜刺入靜脈，用多樣品針或蝶形針取血并移入ED

4、TA采血管。4在抽出針管前放開止血帶。5用干棉簽壓住針頭，抽出針管( 濕棉簽會汲出血樣)。6按住干棉簽以對采血位置施加壓力止血75分鐘后檢查采血位置是否已經(jīng)停止流血。8輕輕顛倒EDTA采血管10次，以使血樣和EDTA混勻。9檢查采血管標(biāo)簽是否正確，并適當(dāng)存放。10處理所有的針和醫(yī)用廢棄物與專用廢棄箱。附件1. 血樣采集規(guī)程1.首先確定被研究對象，受試者必須確定在基本相同的生活區(qū)域內(nèi)（如必須為中國四川涼山地區(qū)漢族人群）2. 受試者必須在知情同意的前提下，統(tǒng)一對其進行身高、體重 、血壓、 心率、血糖、血脂（包括：血清總甘油三酯（TG）、血清總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）等指標(biāo)的檢測，并進

5、行記錄。3. 受檢者取坐位，安靜休息5分鐘后，從肘靜脈抽血5毫升，裝入10毫升采心管中，經(jīng)1EDTA溶液進行抗凝處理后，現(xiàn)場離心分離血漿(2500r/ min) 。血漿和血凝塊均在- 40保存。待標(biāo)本收集完備后提取DNA。最后40冰箱凍存待用。附件2 血液中提取DNA樣本預(yù)處理：1. 吸取2ml全血樣本加入15ml離心管中，添加3ml CL，vortex混勻15s，2000g 離心5min棄上清。2. 在上述離心管中添加 2ml CL vortex混勻15s，2000g離心5min，棄上清。細胞裂解蛋白變性：3. 配制FG:PK=100:1工作液。4. 每個標(biāo)本加入1ml FG&PK 工作液，

6、立刻渦旋混勻。5. 65水浴30min，其間顛倒混勻數(shù)次。沉淀核酸：6. 添加1ml異丙醇，顛倒充分混勻至出現(xiàn)絲狀或簇狀基因組DNA。7. 離心2000g 離心3 分鐘,倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。8. 加入2ml 70%乙醇，渦旋振蕩5 秒鐘，2000g 離心3 分鐘，棄上清。9. 倒棄上清，將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5分鐘，確保沉淀在管中。10. 重復(fù)步驟8。11. 空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發(fā)干凈（至少5分鐘）。核酸溶解：12. 加入200300l洗脫緩沖液TB，低速渦旋5秒，65加熱10分鐘1小時溶解DNA，其間輕彈數(shù)次助溶。注意事項：1如果血液保存時間超過半年，可以重復(fù)步驟2，以保障更充分的樣本預(yù)處理。2FG&PK現(xiàn)用現(xiàn)配，配置好的溶液必須1h之內(nèi)使用。3. 當(dāng)處理多個樣品時，加入緩沖液FG和蛋白酶K的混合液后要立刻渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再渦旋，振蕩。附件3 慣用單位的國際單位（SI）間的換算系數(shù)檢測項目SI單位慣用單位慣用向SI轉(zhuǎn)換系數(shù)SI向慣用轉(zhuǎn)換系數(shù)血漿葡萄