脂質(zhì)組學(xué)血清樣品處理方法及其快速高分辨液相色譜_質(zhì)譜分析_習(xí)

1、 第9 期 習(xí) 聰?shù)龋?脂質(zhì)組學(xué)血清樣品處理方法及其快速高分辨液相色譜 質(zhì)譜分析 1313 謝物的差異， 而不是由分析方法的誤差產(chǎn)生的 ， 因此本研究獲得的檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠 、 重復(fù)性好， 能夠用于脂 質(zhì)組學(xué)研究。 圖3 Fig 3 QC 樣本的 RRLCMS 譜檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行 PCA 分析后， 各樣本在第一主成分的投影結(jié)果： （ A ） （ + ） ESI 檢測(cè)模 PCA results of quality control （ QC ） plots using the first component Data was acquired based on RRLCMS in 式； （ B） （ ）

2、 ESI 檢測(cè)模式； （ C） （ + ） APCI 檢測(cè)模式 （ A） （ + ） ESI mode （ B） （ ） ESI mode （ C） （ + ） atmosphere pressure chemical ionization （ APCI） mode 結(jié)果表明， 本方法靈敏度高、 精密度及穩(wěn)定性良好， 目前已成功應(yīng)用于 2 型糖尿病的脂質(zhì)組學(xué)研究中。 References 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Han X，Gross R W J Lipid Res ， 2003 ， 44 （ 6 ） ： 10711079 Bou Khal

3、il M，Hou W，Zhou H Mass Spectrom Rev ， 2010 ， 29 （ 6 ） ： 877929 Folch J，Lees M，Sloane Stanley G H J Biol Chem ， 1957 ， 226 ： 497509 Bligh E G，Dyer W J Can J Biochem Physiol ， 1959 ， 37 ： 911917 2006 ， 47 ： 21012111 Watson A D J Lipid Res ， 2006 ， 69 ： 18271842 Nagano K，Kano H，Arito H，Yamamoto S，Matsu

4、shima T J Toxicol Environ Health A， Schmid P ，E Hunter，J Calvert Physiol Chem Phys Med NMR， 1973 ， 5 ： 151155 Hu C，van Dommelen J，van der Heijden R，Spijksma G，Reijmers T H，Wang M，Slee E，Lu X，Xu G，van der Greef J， Hankemeier T J Lipid Res ， 2008 ， 7 （ 11 ） ： 49824991 Matyash V，Liebisch G，Kurzchalia T

5、 V，Shevchenko A，Schwudke D J Lipid Res ， 2008 ， 49 （ 5 ） ： 11371146 2008 ， 56 （ 12 ） ： 42974303 CequierSnchezE，Rodrguez C，Ravelo AG，Zrate R J Agric Food Chem ， 2013 ， 48 （ 3 ） ： 307318 Abbott SK，Jenner AM，Mitchell TW，Brown SH，Halliday GM，Garner B Lipids， Laaksonen R，Katajamaa M，Piv H，SysiAho M，Saari

6、nen L，Junni P ，Ltjohann D，Smet J， van Coster R，SeppnenLaakso T，Lehtimki T，Soini J，Oresic M PLoS One， 2006 ， 1 ： e97 Nie H，Liu R，Yang Y，Bai Y，Guan Y，Qian D，Wang T，Liu H J Lipid Res ， 2010 ， 51 （ 9 ） ： 28332844 Bioanalytical Method Validation 2001 FDA Guidance for IndustryEMA Guideline on Bioanalytica

7、l Method Validation 2011 Chinese Pharmacopoeia Guidelines of Human Bioavailability and Bioequivalence Test XIX B 2010 中國(guó)藥典，藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 附錄 XIX B 2010 Development of Method for Serum Preparation and Lipidomics Analysis Based on Rapid Resolution Liquid ChromatographyMass Spectrometry XI Con

8、g1 ，CHEN YanHua1 ，YANG Wei1 ，ZHANG RuiPing * 1 ，HE JiuMing1 ， ZHANG HuaBing2 ，XIAO XinHua2 ，ZEPER Abliz1 1 （ State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines，Institute of Materia Medica， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 10005

9、0 ，China） 2 （ Peking Union Medical College Hospital，Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100730 ，China） Abstract A rapid resolution liquid chromatographymass spectrometric （ RRLCMS ） method was developed 1314 分析化學(xué) 第 41 卷 and validated for the determination of endogenous lipid metabolites in h

10、uman serum The samples were pretreated by lipid extraction with methylene chloride methanol （ 2 1 ， V / V） mixture solvent and introduced to RRLCMS under intensive optimization of chromatography conditions and mass spectrometry parameters The chromatographic separation was performed on an ACQUITY UP

11、LC CSH C18 column （ 100 mm 2 1 mm， 1 7 m） with mobile phase containing 10 mmol / L ammonium formate （ 0 1% formic acid ） （ A ） and acetonitrile isopropyl alcohol （ 1 1 ， V / V） mixture solution （ B ） in a linear gradient elution The MS detection was carried out by the integrated ionization approach

12、using electrospray ionization （ ESI ） in both positive and negative ion modes and atmosphere pressure chemical ionization （ APCI ） in positive ion mode Typical lipid molecules such as free fatty acids （ FFAs） ，phospholipids （ PLs） ，sphingophosphalipids （ SPs） ，glycerolipids （ GLs） ，cholesterol （ Cho

13、l ） and cholesterol esters （ CEs ） had been detected with high sensitivity，good precision and reliable stability Furthermore，the principal component analysis （ PCA ） results of the quality control （ QC ） samples among the real sample queue indicated the data reliability of the method in lipidomics a

14、pplications Keywords Lipidomics； Serum preparation method； Liquid chromatographymass spectrometry （ Received 7 December 2012 ； accepted 17 April 2013 ） 櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫櫫 10 ASFE 系統(tǒng)降低天然產(chǎn)物樣品的復(fù)雜性 使用 MV10 ASFE TM 系統(tǒng)有選擇性地從復(fù)雜的天然產(chǎn)物基質(zhì)中萃取和富集巨大戟醇， 使用沃特世 MV以便實(shí)現(xiàn)下游色譜分 析和純化的方法優(yōu)化。 天然產(chǎn)物一直

15、是藥物研發(fā)和藥物發(fā)展線索的巨大來源 。尚待開發(fā)的生物資源與篩選 、 分離和合成中的技術(shù)成果相 結(jié)合， 使天然產(chǎn)物藥物的研發(fā)工作再次煥發(fā)活力 。 天然產(chǎn)物研究中的一個(gè)關(guān)鍵步驟是分離具有生物活性的化合物， 而這些化合物通常濃度很低， 往往被復(fù)雜的樣品基 質(zhì)所掩蓋。這種復(fù)雜性成為了隨后進(jìn)行的色譜分析， 尤其是制備型色譜分析的一項(xiàng)挑戰(zhàn) 。由于目標(biāo)化合物和基質(zhì)共同 競(jìng)爭(zhēng)色譜柱上的結(jié)合位點(diǎn)， 因此樣品的上樣量和純化通量均會(huì)受到嚴(yán)重限制 。在收集到所需量的化合物之前， 需要進(jìn)行 重復(fù)操作， 這個(gè)過程即費(fèi)時(shí)又費(fèi)力 。 10 ASFE 系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了超臨界流體萃?。?SFE） 從大戟屬植物的膠液中萃取出巨大戟醇， 通過 MV是一種高效而特別的 方法。 巨大戟醇是一種天然的具有生物活性的化合物， 人們正在對(duì)其進(jìn)行研究， 將其用作一種治療獲得性免疫缺乏綜合征 （ AIDS） 的藥物。目前， 巨大戟醇的分離方法是使用正己烷萃取大戟屬植物， 然后進(jìn)行色譜純化。 由于樣品的復(fù)雜性導(dǎo) 致了整個(gè)工藝的收益率非常低 。 解決方案 10 ASFE 系 統(tǒng) 上 進(jìn) 行。 將 200 mg 的 乳 膠 顆 粒 裝 入 一 個(gè) 5 mL 的 容 器 中， 所有超臨界流體萃取 均 在 MV總流速 為 5 g / min， 使用 10% 的正己烷作為共溶劑。 超臨界流體萃取后殘余樣品的提取離子色譜圖顯示： 經(jīng)過 1 5 小時(shí)的動(dòng)