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文檔簡介
1、細胞信號轉導 gnal transduction):指細胞通過胞膜或胞內受體感受信息分子的刺 激,經(jīng)細胞內信號轉導系統(tǒng)轉換,從而影響細胞生物學功能的過程?;緝热菔羌毎?信號傳遞、受體與信號跨膜轉導、細胞內信號傳遞途徑。細胞工程(cell engineering):應用細胞生物學和分子生物學以及分子生物學的理論和方 法,按照人們的設計藍圖,在細胞水平上進行的遺傳操作及進行大規(guī)模的細胞和組織 培養(yǎng)等,從而改造細胞創(chuàng)造新遺傳型細胞的現(xiàn)代生物技術。細胞生物學(cell biology):是研究細胞基本生命活動的科學,應用現(xiàn)代物理學與化學 的成就和分子生物學的概念和方法,以細胞作為生命活動的基本單位為
2、出發(fā)點,在顯 微、亞顯微和分子水平等不同層次上,研究細胞結構與功能,細胞增殖、分化、衰老 與凋亡,細胞信號傳導,真核細胞基因表達與調控,細胞起源與進化等主要內容,探 索生命活動規(guī)律的學科,其核心問題是將遺傳與發(fā)育在細胞水平上結合起來。細胞學(Cytology):是研究細胞的結構、功能和生活史的科學。細胞學說(cell theory): 1838年施萊登發(fā)表植物發(fā)生論,指出細胞是構成植物的基 本單位。1839年,德國動物學家施旺(M.J.Schwann)發(fā)表了他的關于動植物的結構 和生長的一致性的顯微研究論文,指出動植物都是細胞的集合物。施旺和施萊登兩 人共同提出:一切植物、動物都是由細胞組成的
3、,細胞是一切動植物的基本單位, 這就是著名的“細胞學說”細胞核(nucleus):遺傳物質的集中區(qū)域,在原核生物細胞稱擬核(nucleoid)或類核區(qū)。細胞質基質(Gytoplasmic matrix):是細胞質的可溶相,是作為細胞器的環(huán)境而存在 的。細胞器(Organelle):指存在于細胞中,用光鏡或電鏡能夠分辯出的,具有一定形態(tài)特 點,并執(zhí)行特定功能的結構。細胞質(Cytoplasm):指質膜以內核以外的原生質。它不是勻質的,具結構大體劃分為 兩部分,一部分是有形結構,稱為細胞器(Organelle),另一部分是可溶相,稱細胞質 基質(Cytoplasmic miatrix)。原生質(P
4、rotoplasm):指細胞內所含有的生活物質(構成細胞的生活物質),真核細胞包 括細胞膜、細胞質和細胞核。熒光顯微鏡(fluorescence microscope)用熒光素直接或間接標記生物大分子,從而進 行定性定位。是在光鏡水平對特異蛋白質等生物大分子定性定位的最有力的工具,如 綠色熒光蛋白(GFP)的應用。以紫外線為光源,照射被檢物體發(fā)出熒光,在顯微鏡下觀察形狀及所在位置。首先汞燈發(fā)出紫外線,經(jīng)第一次濾光片除去較長的波,使紫外線照到樣品上。目鏡 下方濾光片除去紫外線,使可見光通過,以保護眼睛。熒光顯微鏡可以觀察細胞內大 然物質經(jīng)紫外線照射后發(fā)熒光的物質,如葉綠體中的葉綠素能發(fā)出血紅色熒
5、光。也可 觀察誘發(fā)熒光物質,如用丫噬橙染色后,聊色中RNA發(fā)紅色熒光,DNA發(fā)出綠色熒光,根據(jù)發(fā)光部位,可以定位研究某些物質在細胞內的變化情況相差顯微鏡(phase-contrast microscope)原理以樣品中的密度差為基礎,將光程差或 相位差轉換成振幅差。不需要染色,可用于觀察活細胞,甚至研究細胞核、線粒體等細胞器的動態(tài)。暗視野顯微鏡(dark巾eld microscope):根據(jù)丁達爾效應的原理設計而成,在顯微鏡中 安裝特殊聚光器,使得照明光線不能直接進入物鏡,而是只允許被標本反射或折射的 光線進入物鏡,這樣視野背景是暗的,而物體的邊緣是亮的,使樣品在暗的背景上顯 得更加突出。這種
6、顯微鏡可使反差增大,分辨率提高。適于觀察細胞的運動和外部形 態(tài),而內部結構觀察不清。微分干涉顯微鏡(differential interference contrast microscope, DIC):利用平面偏振光。 偏振光經(jīng)合成后,使樣品中厚度上的微小區(qū)別轉化成明暗區(qū)別,增加了樣品反差且具 有立體感。適于研究活細胞中較大的細胞器和顆粒的運動。錄像增差顯微鏡技術(video-enhance microscopy)計算機輔助的DIC顯微鏡可在高分 辨率下研究活細胞中的顆粒及細胞器的運動負染色(negative staining):用重金屬鹽對鋪展在載網(wǎng)上的樣品進行染色,吸去多余染 料,自然干
7、燥后,整個載網(wǎng)都鋪上一薄層重金屬鹽,襯托出樣品的精細結構。利用高密度的重金屬物質作染色劑,把生物樣品包繞,以增加背景對電子的散射作 用,而生物樣品與此形成電子密度差,在熒光屏上形成暗背景下的亮像,樣品的精細 結構的反差得以增強。這種技術具有分辨率高、簡單可行、快速等優(yōu)點,在生物學研 究中被廣泛利用,特別在病毒學領域、生物大分子、細菌、原生動物,亞細胞碎片、 分離的細胞器及蛋白質晶體的研究中發(fā)揮作用。冰凍蝕刻技術(freeze etching):又稱冷凍蝕亥1J,冷凍復型(freeze-replica)、冷凍斷裂 (freeze-fracture)H一種由冷凍斷裂與復型相結合的樣品制備技術。功能
8、:主要用來觀察膜斷裂面的蛋白質顆粒和膜表面結構,深度蝕刻用于觀察細胞質 中細胞骨架及其結合蛋白。步驟:樣品固定一冷凍一斷裂一蝕刻一復型一剝離一撈膜一觀察。優(yōu)缺點:樣品不經(jīng)過化學固定,脫水、包埋等有機試劑的影響,能更好地保持樣品 的真實結構和天然特性;由于斷面通常是沿生物膜的結構薄弱處(膜的脂質層中間)劈開,故對于顯示各類膜結構特別使用;分辨力強,反差較好;顯示圖象富有立 體感;樣品可長期保存。具缺點是極易產(chǎn)生冰晶損傷,技術難度大,操作必須敏 捷,不易掌握。掃描隧道顯微鏡(Scanning tunneling Microscope,STM):是一種探測微觀世界物質表面 形貌的儀器,在納米生物學的
9、研究領域具有獨特的優(yōu)越性。包括:STM、AFM、磁力顯微鏡、摩擦力顯微鏡等原理:掃描探針與樣品接觸或達到很近距離時,即產(chǎn)生彼此間相互作用力,如量子力 學中的隧道效應(隧道電流)、原子間作用力、磁力、摩擦力等,并在計算機顯示出 來,從而反映出樣品表面形貌信息、電特性或磁特性等。裝置:掃描的壓電陶瓷,逼近裝置,電子學反饋控制系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集、處理、顯示系 統(tǒng)。特點:可對晶體或非晶體成像,無需復雜計算,且分辨本領高。(側分辨率為0.10.2nm,縱分辨率可達0.01nm);可實時得到樣品表面三維圖象,可測量厚度信 息;可在真空、大氣、液體等多種條件下工作;非破壞性測量。非破壞性測里。用途:利用掃描隧道
10、顯微鏡直接觀察生物大分子,DNA、RNA和蛋白質等分子的原子布陣,和某些生物結構,如生物膜、細胞壁等的原子排列。在原子水平上揭示樣本 表面的結構。沉降系數(shù)(Sedimentation Coefficient):單位離心力場中溶質分子的沉降速度稱為沉降 系數(shù)。顆粒在離心場中的沉降速度的大小與顆粒大小、形狀、密度、離心力、懸浮介質的密 度和粘度有關。原位雜交技術(in situ hybridization):用標記的核酸探針通過分子雜交確定特殊核甘酸 序列在染色體上或在細胞中的位置的方法。光鏡水平的原位雜交技術,探針用同位 素標記或熒光素標記;.電鏡水平的原位雜交技術,生物素標記的探針與抗生物素
11、抗體相連的膠體金標記結合。核酸分子雜交技術(molecular gbridization technique):(特異核酸的定性定位)兩條具有 互補核酸順序的單鏈核酸分子片斷,在適當件下,通過氫鍵結合,形成 DNA-DNA、 DNA-RNA或RNA-RNA雙鏈分子的過程。印跡雜交(blot hybridization):用已知的帶有標記的特定核酸分子(或抗體、蛋白質分 子)作為探針,與通過印跡被轉移的核酸分子(或抗原、蛋白質分子)片段雜交的過程。Southern blotting (DNA印跡法):將分離的DNA片段通過毛細管作用轉移到硝基纖維 素膜上,用DNA探針與之雜交的過程。是體外分析特
12、異DNA序列的方法。細胞顯微分光光度術(Microspectrophotometry):利用細胞內某些物質對特異光譜的吸 收,測定這些物質(如核酸與蛋白質等)在細胞內的含量。包括:紫外光顯微分光光 度測定法可見光顯微分光光度測定法流式細胞儀(Flow Cytometry):將細胞某成分的熒光信號 一電信號一疊加信號的圖 形,從而定量測定某一細胞的 DNA、RNA或某一蛋白的特定含量,還可以將細胞分 離。主要應用:用于定量測定細胞中的 DNA、RNA或某一特異蛋白的含量;測定細胞群 體中不同時相細胞的數(shù)量;從細胞群體中分離某些特異染色的細胞;分離 DNA含量 不同的中期染色體細胞培養(yǎng)(cell
13、culture):指細胞在體外條件下的生長,在細胞培養(yǎng)的過程中,細胞不 再形成組織。培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。原代培養(yǎng)細胞(primary culture cell):指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)細胞傳代培養(yǎng)細胞(sub-culture cell):已經(jīng)過數(shù)代培養(yǎng),轉到另一個培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的細胞 群。原生質體(protoplast):除去全部細胞壁的細胞”,或是一個為質膜所包圍的裸露細 胞”細胞融合(cell fusion):兩個或多個細胞融合成一個雙核或多核細胞的現(xiàn)象。細胞融合 可以在基因型相同的細胞間進行,也可以在基因型不同的種內細胞間
14、甚至種問細胞問 進行?;蛐拖嗤募毎纬傻娜诤霞毎Q為同核融合細胞 (homokaryon);基因型不 同的細胞形成的融合細胞稱為異核融合細胞 (heterokaryon)。雜交細胞在培養(yǎng)過程中會 發(fā)生染色體丟失現(xiàn)象。單克隆抗體(monoclone antibody): B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化,增殖形成 具有針對這種抗原分泌特異性抗體有限的不可能持續(xù)分化增殖下去的能力。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的 雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力,又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞的能力,這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內即可獲得
15、大量的高效價,單一 的特異性抗體,這種技術即稱為單克隆抗體技術.操作步驟:目的抗原的免疫 一細胞融合一雜交細胞的選擇性培養(yǎng)一檢測一陽性細胞的 克隆化培養(yǎng)一再檢測再克隆一陽性克隆的擴增一抗體的生產(chǎn)、純化與檢測 優(yōu)點:可以用不純的抗原分子制備純一的單克隆抗體生物膜(biomembrane):真核細胞內部存在由膜圍繞構建的各種細胞器形成的細胞內 膜系統(tǒng)與細胞質膜的統(tǒng)稱,包括細胞的內膜系統(tǒng) (細胞器膜和核膜)和細胞膜(cell membrane)脂筏,K型(Lipid rafts model): "脂筏”是在生物膜上膽固醇富集而形成有序脂相,載著 各種蛋白,并在不同程度上與膜下細胞骨架蛋白交
16、聯(lián)。推測一個100nm大小的脂筏可載有600個蛋白分子??山忉屔锬さ哪承┬再|與功能。流動鑲嵌模型(fluid mosaic model):生物膜是由磷脂雙分子層和蛋白質構成,膜蛋白 和膜脂均可側向運動,膜蛋白是鑲嵌于脂雙分子層中,是不對稱分布的。由 S.J.Singer和G.Nicolson1972年提出。這個模型的主要內容可歸納為:脂類物質以雙分子層排列,構成膜的骨架;鑲嵌性:蛋白質分子鑲嵌在脂雙層的網(wǎng)架中。存在方式有內在蛋白和外在蛋白。不對稱性:蛋白質分子和脂質分子在膜上的分布具不對稱性,膜兩側的分子性質和 結構不同。流動性:脂質雙分子層和蛋白質是可以流動或運動的綜合流動鑲嵌模型,其突出
17、特點是流動性、鑲嵌性、不對稱性和蛋白質極性。由此造 成各種膜的功能差異。單位膜模型(The unit membrane model)所有的生物膜都是由"蛋白質-脂質-蛋白質”的 單位膜構成,這個模型是英國倫敦大學的羅伯遜(Robertson), 19571959年通過電鏡觀察后提出的。雙分子片層模型(bimolecula門eaflet model):蛋白質-脂類-蛋白質”三夾板質膜結構模型 這一模型是Danielli & Davson于1935年提出的,因此又稱 Danielli & davson模型。內在膜蛋白(intrinsic/ integral membran
18、e proteins):水不溶性蛋白,形成跨膜螺旋,部 分或全部鑲嵌在細胞膜中或內外兩側的蛋白質,與膜結合緊密,需用去垢劑使膜崩解 后才可分離。外在膜蛋白(extrinsic/peripheral membrane proteins)水溶性蛋白,分布在細胞膜的表 面,靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合,改變溶液的離子 強度或提高溫度就可分離。如紅細胞的血影蛋白和錨定蛋白都是外周膜蛋白。去垢劑(detergent):是一端親水一端疏水的兩性小分子,是分離與研究膜蛋白的常用 試劑。分離子型去垢劑和非離子型去垢劑,常用的離子型去垢劑如十二烷基磺酸鈉 (SDS),非離子去垢劑Tri
19、ton X-100光脫色恢復技術(fluorescence recovery after photobleaching FRAP)用熒光素標記膜蛋 白或膜脂,然后用激光束照射細胞表面某一區(qū)域,使被照射區(qū)的熒光淬滅變暗。由于 膜的流動性,淬滅區(qū)域的亮度逐漸增加,最后恢復到與周圍的熒光強度相等。根據(jù)熒 光恢復的速度可推算出膜蛋白或膜脂擴散速率,是研究膜蛋白或膜脂流動性的基本實 驗技術之一。緊密連接(tightjunction ):是封閉連接的主要形式,常存在于上皮細胞之間。是由圍繞 在細胞四周的焊接線也稱崎線網(wǎng)絡而成。一般認為它由成串排列的特殊跨膜蛋白組 成,相鄰細胞的崎線相互交聯(lián)封閉了細胞之間的
20、空隙.從緊密連接的崎線中分離出兩類蛋白:封閉蛋白(occludin),相對分子量為60M03的跨膜4次的膜蛋白; claudin,跨膜4次的蛋白家族。功能:封閉作用隔離作用支持作用橋粒(desmosme maculae adherens)怫接相鄰細胞間的“鈕扣”樣盤狀致密斑結構,提 供錨定位點,將中間纖維連接成整體網(wǎng)絡,支持該組織并抵抗外界壓力與張力。半橋粒(hemides mosome)在形態(tài)上與橋粒類似,但功能和化學組成不同。它通過細 胞質膜上的膜蛋白整合素向上皮細胞固著在基底膜(basal lamina)±,在半橋粒中,中間纖維不是穿過而是終止于半橋粒的致密斑內。突觸(syna
21、pse)能使神經(jīng)元之間或神經(jīng)元與效應細胞(如肌細胞)之間完成神經(jīng)沖動傳 導的結構,分為電突觸(electronic junction)和化學突觸。電突觸(electronic junction):是指細胞間的某種間隙連接及其形成的低電阻通路,電 沖動可直接通過間隙連接從突觸前向突觸后傳導。胞間連絲(Plasmodesma)結構:相鄰細胞的細胞質膜共同組成的直徑20-40nm的管狀結構,中央是由內質網(wǎng)延伸形成的鏈管結構。功能:實現(xiàn)細胞間由信號介導的物質有擇性的轉運;實現(xiàn)細胞間的電傳導;在 發(fā)育過程中,胞間連絲結構的改變可以調節(jié)植物細胞間的物質運輸。選擇素(Selectin): 一類屬異親性依賴C
22、a2+的,能與特異糖基識別并相結合的糖蛋 白,其分子的胞外部分具有一凝集素(lectin)結構域。至少有三種:P(Platelet/擇素、 E(Endothelial)選擇素和L(Leukocyte)選擇素。功能:主要參與白細胞與脈管內皮細胞 之間的識別與粘著。免疫球蛋白超家族(Ig-superfamily, Ig-SF):分子結構中具有與免疫球蛋白類似的結構 域的CAM超家族。介導同親性或異親性不依賴 Ca2+的細胞粘著。免疫球蛋白結構 域是指借二硫鍵維系的兩組反向平行 B折疊結構。功能:在神經(jīng)組織細胞間的粘著中 起主要作用,并參與免疫功能的各個方面。細胞外被(cell coat):又稱糖萼
23、(glycocalyx)指由細胞產(chǎn)生的、與細胞膜外表面聯(lián)系密切 的粘多糖類物質,實際指細胞表面與質膜中的蛋白或脂類分子共價結合的寡糖鏈,是 細胞質膜的延伸,對膜蛋白起保護作用,并參與細胞識別。透明質酸(hyaluronic acid):透明質酸是增殖細胞和遷移細胞的胞外基質主要成分,也 是蛋白聚糖的主要結構組分 透明質酸在結締組織中起強化、彈性和潤滑作用 透 明質酸使細胞保持彼此分離,使細胞易于運動遷移和增殖并阻止細胞分化。彈性蛋白(elastin):是彈性纖維的主要成分,是高度疏水的非糖基化蛋白。彈性纖維 主要存在于脈管壁及肺,少量存在于皮膚、肌腱及疏松結締組織中。彈性纖維與膠原 纖維共同存
24、在,分別賦予組織以彈性及抗張性。有兩個明顯的特征:(1)構象呈無規(guī)則卷曲狀態(tài);(2)通過Lys殘基相互交連成網(wǎng)狀結構。木質素(lignin):由酚殘基形成的水不溶性多聚體。參與次生壁形成,并以共價鍵與細 胞壁多糖交聯(lián),大大增加了細胞壁的強度與抗降解。伸展蛋白(extensin):糖蛋白,在初生壁中含量可多達15%,糖的總量約占65%。果膠質(pectin):含有大量攜帶負電荷的糖,結合 Ca2+等陽離子,被高度水化形成凝 膠,果膠質與半纖維素橫向連接,參與細胞壁復雜網(wǎng)架的形成。半纖維素(hemicellulose):木糖、半乳糖和葡萄糖等組成的高度分支的多糖,介導微 原纖維連接彼此連接或介導微
25、原纖維與其它基質成分(果膠質)連接簡單擴散(simple diffusion):特點:物質順濃度梯度的擴散,不需要消耗細胞本 身的代謝能,不需專一的載體(膜蛋白)。協(xié)助擴散(facilitated diffusion):轉運對象:各種極性分子和無機離子(如糖、氨基酸、 核甘酸以及細胞代謝物等)轉運特點:比簡單擴散轉運速率高;存在最大轉運速率(Vmax);具有轉運的特異性;細胞質膜上存在膜轉運蛋白(membrane transport proteins) 一種特異性載體只能轉 運一種類型的離子或分子。膜轉運蛋白可分為兩類:載體蛋白,既可介導被動運輸,又可介導主動運輸;通道蛋白,只能介導被動運輸。
26、載體蛋白(carrier proteins):載體蛋白是幾乎所有類型的生物膜上普遍存在的多次跨膜 蛋白分子,由于有特異性結合位點,又稱通透酶(permease)能與特定的溶質分子結合,通過一系列構象改變介導溶質分子跨膜轉運。特點:具有飽和性 具有特異性 依賴PH轉運過程具有類似于酶與底物作用 的飽和動力學曲線;可被底物類似物抑制;載體蛋白可以改變反應過程的平衡點。通道蛋白(channel proteins)是橫跨質膜的親水性通道,允許適當大小的分子和帶電荷的離子順梯度通過,又稱為離子通道。特征:一是離子通道具有選擇性;二是離子通道是門控的。只介導被動運輸 不需要與溶質分子結合形成有選擇性開關的
27、多次跨膜通道 對被轉運離子的大小與電荷都有高度的選擇性,轉運速率高;離子通道是門控的, 即離子通道的活性由通道開或關兩種構象所調節(jié),并通過通道開關應答于適當?shù)男?號。類型:(A)電壓門門通道;(B)配體通道;(C )壓力激活通道動作電位(active potential):細胞在刺激作用下的膜電位。靜息電位(resting potential):細胞在靜息狀態(tài)下的膜電位。細胞通訊(cell communication):是指一個細胞發(fā)出的信息通過介質傳遞到另一個細胞 產(chǎn)生相應的反應。細胞間的通訊對于多細胞生物體的發(fā)生和組織的構建,協(xié)調細胞的 功能,控制細胞的生長和分裂是必需的。內分泌(endo
28、crine):內分泌細胞分泌信號分子經(jīng)血液循環(huán)運到各個部位,作用于靶細 胞,特點:a.低濃度;b.全身性;c.長時效。旁分泌(paracrine):分泌局部化學介質到細胞外液中,經(jīng)過局部擴散作用于鄰近靶細 胞自分泌(autocrine):細胞對自身分泌的物質產(chǎn)生反應,如月中瘤細胞合成學突觸(neuronal signaling):神經(jīng)遞質由突觸前膜釋放,經(jīng)突觸間隙擴散到突觸后膜, 作用于特定的靶細胞。電信號-化學信號-電信號轉換和傳導。細胞間接觸性依賴的通訊:(contact-dependent signaling)細胞間直接接觸,通過與質 膜結合的信號分子影響其它細胞細胞信號通路(signa
29、ling pathway):細胞接受外界信號,通過一整套特定的機制,將胞 外信號轉導為胞內信號,最終調節(jié)特定基因的表達,引起細胞的應答反應,這是細胞 信號系統(tǒng)的主線,這種反應系列稱之為細胞信號通路。細胞識別(cell recognition):是指細胞通過其表面的受體與胞外信號物質分子(配體)選 擇性地相互作用,從而導致胞內一系列生理生化變化,最終表現(xiàn)為細胞整體的生物學 效應的過程。細胞表面受體(cell-surface receptor):受胞外親水性信號分子激活 細胞內受體(intracellular recepor):受胞外親脂性信號分子所激活 受體(receptor):是一種能夠識別和
30、選擇性結合某種配基(信號分子)的大分子,多為糖 蛋白,一般至少包括兩個功能區(qū)域,與配基結合的區(qū)域及產(chǎn)生效應的區(qū)域,分別具結 合特異性和效應特異性,當與配基結合后,通過信號轉導gnal transduction加乍用將胞外信號轉換為胞內化學或物理的信號,以啟動一系列過程,最終表現(xiàn)為生物學效 應。分類: 細胞內受體(intracellular recepor)細胞表面受體(cell-surface receptor) 第二信使學說(second messenger theory)胞外化學物質作用于細胞表面受體,導致胞 內產(chǎn)生最早產(chǎn)生的信號分子稱為第二信使,從而激發(fā)一系列生化反應,最后產(chǎn)生一定 的生
31、理效應,第二信使的降解使其信號作用終止。第二信息兩個特征:第一信息同其膜受體結合后最早在細胞膜內側或胞漿中出現(xiàn),僅在細胞內部起作用的信息分子;能 啟動或調節(jié)細胞內稍晚出現(xiàn)的反應。目前公認的第二信使有cAMP、cGMP、三磷酸肌醇(IP3)、二酰基甘油(DG)等,現(xiàn)在一般認為Ca2+是磷脂酰肌醇信號通路的”第三信 使”。分子開關(molecular switches):細胞內的信號蛋白通過結合 GTP或磷酸基團被活化, 去除GTP或磷酸基團而失活。這類信號蛋白分子稱為分子開關。分子開關蛋白有兩類:蛋白激酶:是一類磷酸轉移酶,其作用是將 ATP的丫磷酸基轉移到底物特定的氨 基酸殘基上,使蛋白質磷酸
32、化。蛋白激酶在信號轉導中有兩個方面的作用:一是通過 磷酸化調節(jié)蛋白質的活性;二是通過蛋白質的逐級磷酸化,使信號逐級放大,引起細胞反應。GTP結合蛋白:結合GTP活化,結合GDP失活。離子通道偶聯(lián)的受體(ion-channel-linked receptor):又稱配體門離子通道(ligand-gated channel或遞質門離子通道(transmitter-gated channel'由多亞基組成的受體/離子通道 復合體,一般是4、6次跨膜蛋白,本身既有信號結合位點,又是離子通道,具跨膜 信號轉導無需中間步驟。有選擇性:配體的特異性選擇和運輸離子的選擇性。主要存 在于神經(jīng)細胞或其他可
33、興奮細胞間的突觸信號傳遞。如乙酰膽堿受體就是離子通道偶 聯(lián)受體。G蛋白偶聯(lián)的受體(G-protein-linked receptor): G蛋白偶聯(lián)型受體為7次跨膜蛋白,受 體胞外結構域識別胞外信號分子并與之結合,胞內結構域與G蛋白偶聯(lián)。通過與G蛋白偶聯(lián),調節(jié)相關酶活性,在細胞內產(chǎn)生第二信使,從而將胞外信號跨膜傳遞到胞 內影響細胞的行為。G-蛋白是三聚體GTP結合調節(jié)蛋白,由a、,丫三個亞基組成,a亞基本身具有 GTP酶活性,B匯聚體通過共價結合錨于膜上起穩(wěn)定a亞基的作用。G蛋白在信號轉導過程中起著分子開關的作用,當a亞基與GDP結合時處于關閉狀態(tài),與 GTP結合時處于開啟狀態(tài)。a亞基具有三個
34、功能位點:GTP結合位點;鳥甘三磷酸水解酶(GTPase)舌性位點;腺甘酸環(huán)化酶結合位點。受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases RTKs)又稱酪氨酸蛋白激酶受體,是單次 跨膜蛋白,包括6個亞族。通路:信號(配體)7受體(RTK)一受體二聚化(Dimer) T 體的自磷酸化一激活RTK的激酶活性一胞內信號蛋白(Ras)一疳動信號傳導 RTK- Ras蛋白信號傳遞途徑:細胞外信號 一受體一RaaRaf(MAPKKK) 一MAPKKMAPK ,轉錄因子的磷酸化 一激活靶基因一細胞應答和效應。細胞內膜系統(tǒng)(endomembrane system:)是真核細胞的細胞質內獨有
35、,在結構、功能、 乃至發(fā)生上相關的,由膜圍繞的細胞器或細胞結構。主要包括內質網(wǎng)、高爾基體、溶 酶體、胞內體和分泌泡等。特點:使真核細胞細胞內的區(qū)域化(compartmentalization):細胞骨架纖維為組織者的 Cytomatrix形成有序的動態(tài)結構;細胞內的膜相結構細胞器(organelles)。意義:大大增加了細胞內膜的表面積;為多種酶特別是多酶體系提供了大面積的結 合位點;酶系統(tǒng)的隔離與連接;蛋白質、糖、脂肪的合成、加工和包裝;運輸 分泌物;擴散屏障及膜電位建立;離子梯度的維持等。細胞內膜系統(tǒng)的研究方法:放射自顯影(Autoradiography);生化分析(Biochemical
36、analysis);遺傳突變分析(Genetic mutants)內膜系統(tǒng)(endomembrane system)是指細胞內在結構、功能及發(fā)生上相關的由膜包繞 形成的細胞器或細胞結構,主要包括:核膜、內質網(wǎng)、高爾基體及各種小泡和液泡。 內膜系統(tǒng)使真核細胞細胞內區(qū)域化。微粒體(microsomes):在細胞勻漿和差速離心過程,破碎的內質網(wǎng)膜和核糖體形成的 近似球形的囊泡。蛋白質約占2/3(比質膜多),主要是酶類,其中CytP-450是內質網(wǎng)的標記酶。脂類1/3(比質膜少)在滑面內質網(wǎng)高于粗面內質網(wǎng),主要為磷脂和膽固醇。內質網(wǎng)的標志酶是葡萄糖-6-磷酸酶。細胞色素P450在內質網(wǎng)膜中最為豐富。膜
37、分化(membrane differentiation):即在RER上合成的基本膜,經(jīng)過加工修飾,在化 學成份、結構和功能上發(fā)生差異,成為各種功能不同的膜的變化過程。殘余小體(residual body):又稱后溶酶體(post lysosome域終末?§酶體(telolysome),是 次級溶酶體中的物質被消化完畢后,其殘渣存在的泡狀結構。已失去酶活性或酶活性 極弱。次級溶酶體(secondary lysosome)是初級溶酶體與細胞內的自噬泡或異噬泡、胞飲泡或吞噬泡融合形成的復合體,分別稱之為自噬溶酶體(autophagolysosome)口異噬溶酶體(phagolysosome
38、二者都是進行消化作用的溶酶體。初級溶酶體(primary lysosome):是指剛從高爾基的邊緣膨大分離出來,還未同消化物 融合的潛伏狀態(tài)的溶酶體(不含作用底物)。呈球形,直徑約0.20.5仙叫內容物為均 一多種水解酶類,如蛋白酶、核酸酶、糖甘酶、脂酶、磷脂酶、磷酸酶和硫酸酶等, 其共同的特征是都屬酸性水解酶,即酶的最適pH為5左右。無活性。過氧化物酶體(peroxisome):又稱微體(microbody),是由單層膜圍繞的內含一種或幾 種氧化酶類的異質性細胞器。過氧化物酶體的功能動物細胞(肝細胞或腎細胞)中過氧化物酶體可氧化分解血液中的有毒成分,起到解 毒作用。過氧化物酶體中常含有兩種酶
39、:a依賴于黃素(FAD)的氧化酶,其作用是將底物氧化 形成H2O2;b.過氧化氫酶,作用是將H2O2分解,形成水和氧氣。過氧化物酶體分解脂肪酸等高能分子向細胞直接提供熱能。在植物細胞中過氧化物酶體的功能:a.在綠色植物葉肉細胞中,它催化 CO2固定 反應副產(chǎn)物的氧化,即所謂光呼吸反應;b.乙醛酸循環(huán)的反應,在種子萌發(fā)過程中,過氧化物酶體降解儲存的脂肪酸一乙酰輔酶K琥珀酸一葡萄糖。3.過氧化物酶體的發(fā)生氧化物酶體經(jīng)分裂后形成子代的細胞器,子代的過氧化物酶體還需要進一步裝配形 成成熟的細胞器。組成過氧化物酶體的蛋白均由核基因編碼,主要在細胞質基質中合成,然后轉運到 過氧化物酶體中。過氧化物酶體蛋白
40、分選的信號序列 (Peroxisomal-targeting signal, PTS):PTS1為Ser-lys-leu,多存在于基質蛋白的 C端。 PTS2為 Arg/Lys-Leu/lle-5X-His/Gln-leu ,存在于某些基質蛋白 N-端。過氧化物酶體膜上存在幾種可與信號序列相識別的可能的受體蛋白。過氧化物酶體的膜脂可能在內質網(wǎng)上合成后轉運而來。內質網(wǎng)也參與過氧化物酶體的發(fā)生熱休克蛋白(heat shock protei" Hsp):能選擇性的與畸形蛋白質結合形成聚合物,禾 用水解ATP釋放的能量使聚集的蛋白質溶解,并進一步折疊成正確構象。主要包括3 個家族,每一家族中都有由不同基因編碼的數(shù)種蛋白成員。后轉移(Post translocation)基本的特征:蛋白質在細胞質基質中合成以后再轉移到這 些細胞器中,稱后轉移(post translocation)。蛋白質跨膜*$移過程需要 ATP使多肽去折 疊,還需要一些蛋白質的幫助(如熱休克蛋白Hsp70)使其能夠正確地折疊成有功能的 蛋白。共轉移(Cotranslocati
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