膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測-6

1、半固體培養(yǎng)物半固體培養(yǎng)物4 4支，藥敏試驗培養(yǎng)物支，藥敏試驗培養(yǎng)物4 4個，微量發(fā)酵管培養(yǎng)物個，微量發(fā)酵管培養(yǎng)物1 1套。套。器材準(zhǔn)備器材準(zhǔn)備膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測實驗流程實驗流程(6(6次課次課1212學(xué)時）學(xué)時）培養(yǎng)基的制備細(xì)菌的分離培養(yǎng)細(xì)菌的純培養(yǎng)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的生化試驗等細(xì)菌的血清學(xué)試驗、結(jié)果分析實驗論文撰寫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗一v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（六）藥敏實驗結(jié)果分析糖發(fā)酵、動力實驗結(jié)果分析玻片凝集試驗高壓蒸汽滅菌細(xì)菌綜合性實驗總結(jié)實驗報告撰寫 細(xì)菌感染的檢查方法和防治原則（錄像）洗刷藥敏試驗結(jié)果用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）

2、用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）常用藥敏試驗紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)常用藥敏試驗紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)P P2121抗菌藥物 紙片含藥量 抑菌圈直徑(mm) 耐藥 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌) 10單位 28 - 29先鋒霉素 30微克 14 1517 18慶大霉素 10微克 12 1314 15鏈霉素 10微克 11 1214 15四環(huán)素 30微克 14 1518 19氯霉素 30微克 12 1317 18磺胺 300微克 12 1316 17藥敏試驗結(jié)果分析（錄入）藥敏試驗結(jié)果分析（錄入）青霉素先鋒霉素慶大霉素金黃細(xì)菌白色細(xì)菌紫黑細(xì)菌粉紅細(xì)菌 注：耐藥，中度敏感，敏感?？咕厮幟粼囼灱埰ńY(jié)果vG+球菌對青

3、霉素和先鋒霉素敏感。 vG-桿菌對青霉素耐藥，對先鋒霉素 敏感。vG+球菌和G-桿菌對廣譜抗菌素慶大霉素都敏感。糖發(fā)酵、動力試驗結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述符號培養(yǎng)基變黃色無氣泡分解糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣+培養(yǎng)基變黃色有氣泡分解糖產(chǎn)酸又產(chǎn)氣培養(yǎng)基不變色不分解糖-細(xì)菌擴(kuò)散生長,培基混濁細(xì)菌有鞭毛+沿接種線生長,培基清澈透明細(xì)菌無鞭毛-糖發(fā)酵試驗結(jié)果微量發(fā)酵管水平放置，觀察結(jié)果。半固體穿刺培養(yǎng)結(jié)果半固體并列，對光上下移動上下移動至合適觀察位置，觀察結(jié)果。腸道桿菌科各菌屬生化反應(yīng)鑒別表腸道桿菌科各菌屬生化反應(yīng)鑒別表 葡萄糖 乳糖 麥芽糖 甘露醇 蔗糖 半固體埃希菌屬 +志賀菌屬 + +/- -/+ -沙門菌屬 /

4、+ - - + 霍亂弧菌 + - + + + +變形桿菌屬 - - +注： + 產(chǎn)酸或陽性， 產(chǎn)酸產(chǎn)氣，- 陰性， +/- 多數(shù)陽性， -/+ 多數(shù)陰性 不確定。常見腸道感染細(xì)菌主要生化反應(yīng)特征常見腸道感染細(xì)菌主要生化反應(yīng)特征 葡萄糖 乳糖 半固體（動力）v大腸埃希菌 + v福氏志賀菌 + - -v傷寒沙門菌 + - +v霍亂弧菌 + - + v幽門螺桿菌 不分解糖類 +v變形桿菌 - +產(chǎn)酸能迅速殺死該菌。 細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析( (結(jié)果錄入）結(jié)果錄入） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號葡萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體12345678910結(jié)果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)

5、結(jié)果分析( (婦幼、病理）婦幼、病理） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號葡萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體1+-2+-+3+-4+-5+-6+-7+-8+-9+-10-+結(jié)果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析( (預(yù)防預(yù)防-2-2） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號葡萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體1+-2+-3+-6+-7+-8+-結(jié)果實驗結(jié)果錯誤的分析v純培養(yǎng)時，菌落挑錯了、不是單菌落、CFU。v無菌操作不嚴(yán)格，污染雜菌。v接種時未協(xié)調(diào)好，接種錯誤。玻片凝集試驗玻片凝集試驗 Slide Agglutination TestSlide Agglutination Testv在適量電解質(zhì)存在的情況下

6、，顆粒性抗原(細(xì)菌)與特異性抗體結(jié)合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。取潔凈的載玻片一張，將磨面近端近端設(shè)為對照區(qū)，滴加生理鹽水15ul。遠(yuǎn)端遠(yuǎn)端設(shè)為試驗區(qū)，滴加福氏志賀菌福氏志賀菌診斷血清15ul，用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔，約12個小菌落的菌量，研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻。載玻片來回傾側(cè)，讓菌液充分混 勻，凝集速度更快、結(jié)果更清楚。菌液凝集者記為陽性，菌液均勻混濁記為陰性。研磨成直徑810mm的一層薄菌膜。玻片凝集結(jié)果判定玻片來回傾側(cè)玻片來回傾側(cè)數(shù)次，肉眼觀數(shù)次，肉眼觀察；察；23分鐘分鐘內(nèi)仍不出現(xiàn)凝內(nèi)仍不出現(xiàn)凝集者集者,可認(rèn)為可認(rèn)為陰性陰性()。;菌液混菌液混濁，少量

7、絮濁，少量絮狀狀,25%凝集凝集,陽性陽性()。;菌液輕菌液輕度混濁度混濁,絮狀絮狀凝集塊較小凝集塊較小,陽性陽性()。;菌液澄菌液澄清清,有明顯絮有明顯絮片片,75%凝集凝集,陽性陽性()。生物安全警告v本次實驗操作，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。vPike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。v實驗時應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。滅菌 藥敏試驗平板、動力試驗半固體瓊脂、微量糖發(fā)酵管高壓蒸

8、汽滅菌 ! 器材收攤?cè)牍袂?，接種環(huán)，接種針必須再次燒灼滅菌！綜合性實驗一綜合性實驗一 實驗總結(jié)實驗總結(jié) v采用平板劃線分離法，從濃汁標(biāo)本中分離出金黃色和白色兩種菌落。顯微鏡下，這兩株細(xì)菌均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落或菌苔顏色，這兩株葡萄球菌分別是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過血漿凝固酶試驗鑒別，金黃色葡萄球菌是致病菌。v用伊紅美藍(lán)平板，從糞便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤和粉紅色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大腸埃希菌。粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，它們都是G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗，半固體動力試驗，

9、血清學(xué)試驗結(jié)果鑒定，它們分別是大腸埃希菌和福氏志賀菌。膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測結(jié)果膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測結(jié)果標(biāo)本標(biāo)本菌落菌落形態(tài)形態(tài)血漿血漿凝固酶凝固酶葡葡 乳乳 半半福痢福痢血清血清青青 鏈鏈慶慶結(jié)論結(jié)論金黃G+球 +金黃色葡萄球菌膿汁白色G+球-+白色葡萄球菌紫黑 G桿 +-+大腸埃希菌糞便粉紅 G桿+-+-+福氏志賀菌細(xì)菌鑒定的原則及基本方法v必須用純的細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定。因為不同的細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果相差較大，而反應(yīng)結(jié)果是以陽性或陰性表示的，一旦用混合菌做生化反應(yīng)，結(jié)果不可分析。v鑒定試驗的選擇：測定細(xì)菌的實驗方法很多，根據(jù)鑒定目的選擇適當(dāng)?shù)脑囼烅椖浚饶芡瓿设b定，項目又盡可能少。一般考慮以下

10、幾個問題。選擇有價值的試驗：鑒別兩種細(xì)菌選擇的試驗應(yīng)該其一為陽性，另一為陰性，且陽性和陰性的概率大于90%。否則，試驗無鑒別價值。選擇快速簡便的試驗。因為是常規(guī)實驗室，選擇的方法應(yīng)快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等應(yīng)為首選方法。鑒定一種細(xì)菌如果有幾種特異方法,只選一兩種,多選無價值。測定細(xì)菌的一種生物特性可能有幾種不同方法。應(yīng)該了解所用方法的敏感性，否則會導(dǎo)致錯誤的鑒定。思考題v如果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果不佳，原因何在?v報告紙片法藥敏試驗結(jié)果，是否符合你所鑒定的細(xì)菌的藥敏特性?v玻片凝集試驗觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?v怎么設(shè)計一個實驗，對傷寒沙門菌進(jìn)行分離和鑒定? 染色鏡檢

11、生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定雙糖鐵培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)血、骨髓挑取可疑菌落SS瓊脂、EMB平板分離培養(yǎng)糞便常見腸道致病菌的檢查程序常見腸道致病菌的檢查程序P48P48v傷寒沙門菌的分離培養(yǎng)標(biāo)本的采集與病程的關(guān)系：第1周取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取糞便和尿液。血液和骨髓液：先增菌培養(yǎng)，然后再用血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。糞便：可直接接種于選擇鑒別培養(yǎng)基，如SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。取血量：一般以肉湯培養(yǎng)基的1/10為宜。常規(guī)方法為用培養(yǎng)基50ml,取血510ml,注入培養(yǎng)瓶中。骨髓為12ml。 v細(xì)菌的純培養(yǎng)必須用純的細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定v形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌

12、，有周鞭毛。v動力學(xué)試驗：細(xì)菌自接種部位向四周移動、擴(kuò)散生長，培養(yǎng)基呈云霧狀混濁狀態(tài)。 v生化反應(yīng)：分解葡萄糖只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 ，不發(fā)酵乳糖。v血清學(xué)反應(yīng)：主要有O和H兩種抗原。傷寒沙門菌還有Vi抗原。對沙門菌屬的型和亞型鑒定有重要意義。玻片凝集試驗：定性鑒定細(xì)菌純培養(yǎng)物。肥達(dá)反應(yīng)：用已知傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副傷寒菌H抗原與患者血清作試管凝集試驗（定量），檢測有無相應(yīng)抗體及其效價，以輔助診斷傷寒或副傷寒。 正常值：一般是傷寒沙門菌O抗體的凝集效價1：80，H抗體凝集效價1：160，副傷寒沙門菌H抗體凝集效價1：80才有診斷價值。 動態(tài)觀察：動態(tài)觀察：若效價逐次遞增或恢

13、復(fù)期效價比初期4倍者更有意義。實驗報告v電子版v題目v年級專業(yè)，學(xué)號，姓名v實驗?zāi)康膙實驗器材v方法與步驟v結(jié)果與討論以多數(shù)人多數(shù)人的實驗結(jié)果為基礎(chǔ)。從2種標(biāo)本獲得4種菌的實驗結(jié)果（綜合性實驗一） 。討論是對實驗結(jié)果的分析，應(yīng)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)，圍繞主題，突出重點。結(jié)論應(yīng)該明確。v備注：請課代表將實驗報告按實驗室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師或 。如何撰寫科研論文v不論人們是否完全贊成“要么發(fā)表、要么銷毀”的格言，但毫無疑問，科學(xué)研究的目的就是要把研究成果發(fā)表出來。一般來說，評價科學(xué)工作者的工作，主要不是看他們在實驗室內(nèi)靈巧的操作，也不是看他們在廣闊或狹窄的科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)掌握知識的多少，也不是看他

14、們的智能或魅力，而主要是根據(jù)他們所發(fā)表的文章來估量。他們可能由此而成名，或仍然默默無聞。因此，寫出能充分展示自己工作、引起同行注意的論文是一個科研工作者必備的素質(zhì)。 v一項科學(xué)實驗，不論它的結(jié)果多么驚人，只有到它發(fā)表出來時才算完成。因此對科學(xué)工作者來說，他不僅必須“研究”科學(xué)，而且必須把科研成果“寫”出來。要寫好一篇科學(xué)論文，作者必須準(zhǔn)確地知道他要寫的是什么以及為什么要這么寫。v科學(xué)論文是敘述原始研究結(jié)果而寫成并發(fā)表的報告。具體地說，一篇公認(rèn)的原始科學(xué)論文，必須是首次公布的，它應(yīng)提供足夠的資料，以使同行們能夠：(1)評價觀察到的結(jié)果；(2)重復(fù)實驗；(3)評價推理過程，而且原始科學(xué)論文還必須能為人們所接受，基本上可供科學(xué)界永久地、不受限制地利用，要有嚴(yán)密的思維特性、邏輯性、清晰性和準(zhǔn)確性。 v科研論文內(nèi)容P57標(biāo)題 摘要引言材料與方法結(jié)果討論參考文獻(xiàn)Thank you !Thank you !試管用毛刷，試管用毛刷，上下、旋轉(zhuǎn)刷洗上下、旋轉(zhuǎn)刷洗內(nèi)壁和管底。內(nèi)壁和管底。字跡用濕紗布，字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。粘去污粉擦拭。管口朝向相同，管口朝向相同，流水沖洗流水沖洗1010次。次。洗干凈的試管，洗干凈的試管，倒扣在筐內(nèi)，晾干。倒扣在筐內(nèi)，晾干。平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)擦平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)擦拭內(nèi)外側(cè)，字跡用紗拭內(nèi)外側(cè)，字跡用紗布粘去污粉擦拭。布粘去污粉擦拭。流水