鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片的生物等效性研究

1、本研究以市售鹽酸環(huán)丙沙星普通片為參比制劑的單劑、多劑給藥雙周期交叉試驗(yàn),進(jìn)行鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片的人體藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度研究,評(píng)價(jià)是否生物等效及其是否符合緩釋制劑要求,為其臨床應(yīng)用和新藥報(bào)批提供試驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1儀器Agilent1100Series高效液相色譜儀,Agilent1100 Series G1314A型紫外檢測(cè)器,梅特勒-托利多-205電子天平梅特勒-托利多儀器(上海有限公司;LDZ4-0.8自動(dòng)平衡微型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠;XW80A型旋渦混合器(上海精科實(shí)業(yè)有限公司。1.2藥品與試劑鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片(500mg/片;鹽酸環(huán)丙沙星片(250 mg/片,廣州

2、南新制藥有限公司生產(chǎn);鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品由廣州白云山制藥廠提供,純度99%;內(nèi)標(biāo)加替沙星,純度99.6%。甲醇為色譜純,TEDIA Company INC.生產(chǎn);乙腈為色譜純,Caledon laboratories LTD.生產(chǎn);三乙胺為色譜純,為TEDIA Company INC.生產(chǎn);磷酸、鹽酸為分析純,萊陽經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠生產(chǎn);二氯甲烷為色譜純,美國TEDIA Company INC.生產(chǎn);水為杭州娃哈哈飲用純凈水,生產(chǎn)日期為2004年9月6日。1.3方法1.3.1色譜條件:大連依利特HYPERSIL ODS25m,4.6 mm×250mm色譜柱;紫外檢測(cè)波長277nm;

3、柱溫為室溫;流動(dòng)相:乙腈-磷酸緩沖液,pH3.0,體積分?jǐn)?shù)為2080(V/V;流速1.0 ml/min;進(jìn)樣量20l。1.3.2血樣處理1:取血清樣品1ml,加入40l內(nèi)標(biāo)加替沙星(50g/ml和100l磷酸,渦旋混合0.5min;加入2.0ml 乙腈沉淀蛋白,渦旋1min,4000r/min離心5min;移取上清液,加入二氯甲烷3ml,渦旋混合1min,4000r/min離心5 min,移取上清液,20l進(jìn)樣分析。1.3.3方法專一性:取志愿者空白血清1ml,按“1.3.2”方法操作,得空白血清色譜圖;將一定濃度鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣,得鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖;將一定濃度內(nèi)標(biāo)加替沙星

4、標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣,得內(nèi)標(biāo)加替沙星色譜圖;將一定濃度鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液和加替沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液混合直接進(jìn)樣,得鹽酸環(huán)丙沙星和加替沙星色譜圖;將一定濃度鹽酸環(huán)丙沙星和加替沙星加入空白血清,按“1.3.2”方法操作,得提取后鹽酸環(huán)丙沙星和加替沙星色譜圖;取志愿者樣品,按“1.3.2”方法操作,得志愿者血清樣品色譜圖。見圖1。1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線:取1mg/ml環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品工作液,以空白人血清配成濃度分別為0.01,0.05,0.1,0.25,0.5,1,2,4g/ml 的環(huán)丙沙星血清標(biāo)準(zhǔn)系列濃度,按“1.3.2”方法,取上清液20l進(jìn)樣測(cè)定。以環(huán)丙沙星和加替沙星峰面積比為縱坐標(biāo),環(huán)丙沙星和加替沙星濃度比

5、為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,計(jì)算直線回歸方程,Y=65.9626259X+0.0382432,r=0.99973。環(huán)丙沙星在0.014g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。當(dāng)信噪比(S/N3時(shí),血清最低檢出濃度為5ng/ml,符合試驗(yàn)要求。1.3.5精密度和回收率:分別取高(4g/ml、中(0.5g/ml、藥物研究鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片的生物等效性研究張媛李峻峰慈洪麗牟芳華王本杰郭瑞臣作者單位:264200山東省威海市立醫(yī)院藥劑科(張媛、李峻峰、慈洪麗、牟芳華;山東大學(xué)齊魯醫(yī)院臨床藥理研究所(王本杰、郭瑞臣 表4試驗(yàn)制劑(T 和參比制劑(R 環(huán)丙沙星主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(x ±s T 5.4±

6、1.11.03±0.255.5±0.810.9±1.411.0±1.487.79R1.5±0.53.09±0.454.2±1.012.4±1.412.7±1.55.61T m ax (h C m ax (g/ml t 1/2(h AUC 0t (g h -1ml -1AUC 0(g h -1ml -1F (%項(xiàng)目低(0.03g/ml 濃度的環(huán)丙沙星血清標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“1.3.2”方法操作,一日內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次,或每日1次連續(xù)測(cè)定5d ,計(jì)算日內(nèi)和日間變異系數(shù)和環(huán)丙沙星的相對(duì)回收率,評(píng)價(jià)方法的精密度。結(jié)果分別見

7、表1,2,3。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析1.4.1單劑:C m ax 和T m ax 采用實(shí)測(cè)值,以梯形法計(jì)算曲線下面積(AUC 0t ,根據(jù)公式F=(AUC T /AUC R ×100%計(jì)算單劑給藥鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片的相對(duì)生物利用度,采用DAS 實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算各志愿者主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),并進(jìn)行多因素方差分析和雙單側(cè)t 檢驗(yàn)。1.4.2多劑:實(shí)驗(yàn)制劑C m ax 為實(shí)測(cè)峰濃度值,參比制劑C m ax 為012h 和1224h 其血藥峰濃度值的平均值,C m in 為-48、-24、0h 實(shí)測(cè)血藥谷濃度的平均值,穩(wěn)態(tài)血藥濃度C av 根據(jù)公式AUC ss 0t /求得,血濃度波動(dòng)度DF

8、(%根據(jù)公式:DF=(C m ax -C m in /C av ×100%求得。利用DAS 軟件對(duì)試驗(yàn)制劑和參比制劑主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行方差分析和雙單側(cè)t 檢驗(yàn),比較緩釋制劑和普通制劑連續(xù)多次給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)藥物吸收的趨勢(shì)和程度、穩(wěn)態(tài)血濃度和波動(dòng)度。2結(jié)果2.1藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)健康志愿者20名,均為男性,年齡2125歲,平均(22.8±1.2歲;身高170180cm ,平均(174±3cm ;體重6070kg ,平均(66±4kg 。服藥前一般體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查(血、尿常規(guī)及肝、腎功能和心電圖檢查合格。20名志愿者按體重配對(duì)隨機(jī)分組進(jìn)行單劑和多劑二周期雙交

9、叉試驗(yàn)。周期間洗脫期為1周。試驗(yàn)前書面告知志愿者試驗(yàn)的目的、方法、試驗(yàn)制劑和參比制劑的藥理特性、可能發(fā)生的藥物不良反應(yīng)、受試者權(quán)益,并簽定書面知情同意書。志愿者在試驗(yàn)前2周及試驗(yàn)期內(nèi)禁煙酒,3個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行其他藥物試驗(yàn)。2.1.1單劑:20名健康志愿者口服環(huán)丙沙星緩釋片和普通片后,環(huán)丙沙星:主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表4,試驗(yàn)制劑(T 和參比制劑(R 環(huán)丙沙星血濃度均值-時(shí)間曲線見圖2。表1日內(nèi)變異系數(shù)項(xiàng)目x ±s RSD(%0.03g/ml 0.0316±0.00268.25220.5g/ml 0.5006±0.00561.11764.0g/ml4.0090±

10、0.06131.5282表2日間變異系數(shù)項(xiàng)目x ±s RSD(%0.03g/ml 0.0320±0.00288.83880.5g/ml 0.5036±0.00781.55474.0g/ml4.0762±0.06551.6061表3回收率項(xiàng)目x ±s RSD(%0.03g/ml 0.0322±0.00257.73290.5g/ml 0.5034±0.00871.72954.0g/ml4.0872±0.03540.86602.1.2多劑:20名健康志愿者口服環(huán)丙沙星緩釋片和普通片后,環(huán)丙沙星主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表5,試

11、驗(yàn)制劑(T 和參比制劑(R 環(huán)丙沙星血濃度均值-時(shí)間曲線見圖3。2.2生物等效性評(píng)價(jià)2.2.1單劑:對(duì)AUC 0t ,AUC 0,C m ax ,T m ax 數(shù)據(jù)進(jìn)行雙交叉方差分析,以及雙單側(cè)t 檢驗(yàn)(AUC 0t ,AUC 0,C m ax 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,AUC 0t ,AUC 0方差分析差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05。在=0.05水平上進(jìn)行雙單側(cè)t 檢驗(yàn),AUC 的90%可信限在80%125%范圍內(nèi),兩制劑吸收程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但C m ax 和T m ax 方差分析比較,制劑間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05。2.2.2多劑:對(duì)多劑給藥AUC 0-tn ,DF ,T m a

12、x 和C m ax 數(shù)據(jù)進(jìn)行雙交叉方差分析以及雙單側(cè)t 檢驗(yàn),AUC ss 0t 方差分析比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05。在=0.05水平上進(jìn)行雙單側(cè)t 檢驗(yàn),AUC 的90%可信限在80%125%范圍內(nèi),兩制劑吸收程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,DF 、T m ax 和C m ax 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在=0.05水平上進(jìn)行雙單側(cè)t 檢驗(yàn),90%可信限不在80%125%范圍內(nèi),緩釋制劑DF (206±42%小于普通制劑DF(309±60%,制劑間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05。3討論環(huán)丙沙星(ciprofloxacin 是第三代氟喹諾酮類抗菌藥,其藥效學(xué)研究結(jié)果表明

13、,它可以制成緩釋制劑來減少患者的服用次數(shù),提高患者的依從性。本試驗(yàn)鹽酸環(huán)丙沙星緩釋片為胃漂浮片(胃內(nèi)滯留片,口服后能較長時(shí)間滯留于胃內(nèi)逐漸溶解釋放藥物,能維持胃內(nèi)較長釋藥時(shí)間,有利于提高藥物的生物利用度,減少給藥次數(shù) ,平穩(wěn)血藥濃度,降低藥物不良反應(yīng)。環(huán)丙沙星是兩性物質(zhì),在流動(dòng)相中能解離,對(duì)組分的保留和峰形都會(huì)造成不良影響。此時(shí)在流動(dòng)相中加入三乙胺,太子參農(nóng)藥殘留量的研究王祥領(lǐng)近年來,我們發(fā)現(xiàn)多批氣味特異的中藥材,尤以太子參最具持續(xù)性,故以之為例運(yùn)用藥典方法對(duì)其進(jìn)行有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留檢測(cè);同時(shí)結(jié)合實(shí)地調(diào)查、查閱資料,對(duì)藥材種植的農(nóng)藥使用情況,藥農(nóng)、藥販和采購站的倉儲(chǔ)條件及農(nóng)村的農(nóng)藥市場進(jìn)行了考察

14、,發(fā)現(xiàn)了長期以來被人們普遍忽視的環(huán)節(jié),應(yīng)引起足夠重視。現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與儀器1.1實(shí)驗(yàn)樣品:太子參樣品共5批,為我院自20032005年從正規(guī)渠道購進(jìn):產(chǎn)地:安徽,購于2003年4月;產(chǎn)地:安徽,購于2003年5月;產(chǎn)地:山東,購于2003年5月;產(chǎn)地:浙江,批號(hào)20040802;產(chǎn)地:山東,批號(hào)20050531;以上中藥材均由我院主任中藥師鑒定。1.2實(shí)驗(yàn)試劑:農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品:六氯環(huán)己烷(俗稱:六六六(-BHC ,-BHC ,-BHC ,氯苯己烷(俗稱:滴滴涕(PP -DDE ,PP -DDD ,OP -DDT ,PP -DDT (國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供,純度100g/ml,丙酮、二氯甲烷、

15、石油醚、無水硫酸鈉等其他試劑均為國產(chǎn)分析純。1.3儀器:日本島津GC 14C 氣相譜儀(63Ni-ECD 電子捕獲檢測(cè)器,KQ 250B 型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司,RE 52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠等。2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果2.1色譜條件:彈性石英毛細(xì)管柱(30m ×0.32mm ×0.25m SE-54,63Ni-ECD 電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣溫度230,檢測(cè)溫度300,不分流進(jìn)樣。程序升溫:初始100,每min 10升至220,每min 8升至250,保持10min 。進(jìn)樣量1g ,外標(biāo)法定量。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:自-BHC,-BHC,-BHC,PP-

16、DDE,PP-DDD,OP-DDT,PP-DDT 標(biāo)準(zhǔn)溶液中各精密吸取1ml ,以石油醚(6090稀釋至20g/ml 作為儲(chǔ)備液。精密吸取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液0.25ml,于5ml 容量瓶中,用石油醚(6090定容成濃度為1g/ml 的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液,搖勻即得。精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液,用石油醚(6090稀釋成0.05,0.1,0.2,0.4,1.0g/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。各取1l 進(jìn)樣,依“2.1”色譜條件以色譜相應(yīng)對(duì)樣品濃度進(jìn)行線性回歸,計(jì)算回歸方程;并將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成不同濃度,分別取1l 進(jìn)樣,以S/N 5為標(biāo)準(zhǔn)確定峰面積測(cè)定最低檢出量,以2作者單位:277100山東省棗莊市中醫(yī)醫(yī)院

17、藥劑科表5試驗(yàn)制劑(T 和參比制劑(R 環(huán)丙沙星主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(x ±s T 0.12±0.051.17±0.230.51±0.0612.2±1.5206±4290.35R0.23±0.061.9±0.40.56±0.0813.6±0.96310±608.83C m in (g/ml C m ax (g/ml C an (g/ml AUC ss 0t (g h -1ml -1DF (%項(xiàng)目F (%加大了流動(dòng)相的離子強(qiáng)度,從而削弱了血樣在預(yù)處理后由于極性較大對(duì)色譜柱局部分配行為的影響

18、,同時(shí)將流動(dòng)相的pH 調(diào)至3.0來抑制解離或用來改變峰形,優(yōu)化了色譜過程。試驗(yàn)表明:20例受試者口服試驗(yàn)制劑與參比制劑后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)C m ax ,T m ax ,DF 和AUC ss 0t ,與文獻(xiàn)24相似。單、多次給藥試驗(yàn)制劑的相對(duì)生物利用度(均值為87.79%和90.35%,試驗(yàn)制劑與參比制劑的吸收程度符合生物等效的假設(shè),為生物等效制劑。試驗(yàn)制劑C m ax 明顯降低,為參比制劑的1/3左右,T m ax 明顯延長,為參比制劑的3倍多,具有明顯的緩慢釋放特征,符合緩釋制劑要求。(志謝:感謝山東大學(xué)齊魯醫(yī)院臨床藥理研究所郭瑞臣、王本杰、李小利老師在課題設(shè)計(jì)、研究等方面給予的悉心指導(dǎo)。參考文獻(xiàn)1Olutosin R.Simple,rapid determination of enrofloxacin and cipro-floxacin in bovine milk and plasma by high -performance liquid chromatography with fluorescence detection.J Pharm Ana